中藥逍遙丸對(duì)小鼠糖皮質(zhì)激素抑郁模型動(dòng)情周期的影響研究

鞠博名 王澤鑫 劉欽臣 李佳 鮑晨 竇薇

摘要：目的：研究探討臨床常見(jiàn)藥中藥逍遙丸對(duì)昆明小鼠氫化可的松藥物抑郁模型的動(dòng)情周期效果與影響。方法：選用雌性昆明小鼠共計(jì)40只，分為4組（正常組、對(duì)照組、中藥組、西藥組）。除正常組灌胃0.1ml生理鹽水外其余各組給予氫化可的松灌胃，每組每只小鼠每日一次，一次0.1ml，持續(xù)灌胃21天后，中藥組與西藥組分別采用逍遙丸與氟西汀進(jìn)行治療（通過(guò)制作特定劑量的混懸液分別灌胃）每日一次，一次0.1ml。正常組與對(duì)照組同上方式灌胃0.1ml生理鹽水，持續(xù)14d，進(jìn)行治療的第一天開(kāi)始每日同一時(shí)間取各組每只小鼠進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞學(xué)涂片檢查，同樣持續(xù)14d后進(jìn)行涂片的觀察。結(jié)果：各組動(dòng)情期開(kāi)始的時(shí)間不同，有顯著差異（P<0.01），正常、中藥、西藥組早于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但正常、中藥、西藥組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各組動(dòng)情間期持續(xù)時(shí)間不同，且具有極顯著差異（P<0.001）。正常、中藥、西藥組時(shí)間明顯短于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。正常組明顯短于中藥組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。中藥組與西藥組動(dòng)情間期長(zhǎng)短無(wú)明顯差異。鏡下卵巢切片觀察對(duì)照組小鼠卵巢閉鎖卵泡數(shù)量相比于其余三組增多，且在相對(duì)來(lái)說(shuō)較成熟的卵泡中其形態(tài)異常的卵母細(xì)胞也增多。而中藥組與西藥組鏡下觀察趨近于正常組。結(jié)論：中藥逍遙丸與西藥氟西汀均可以延長(zhǎng)氫化可的松抑郁模型小鼠的動(dòng)情期并縮短其動(dòng)情間期使其趨近于正常組小鼠，且中劑量療效就已與氟西汀相當(dāng)。而卵巢鏡下切片觀察也顯示中藥組與西藥組的卵巢形態(tài)趨近于正常組并區(qū)別于對(duì)照組。

關(guān)鍵詞：小鼠;動(dòng)情周期;抑郁;中藥;逍遙丸;卵巢;陰道脫落細(xì)胞;涂片

抑郁癥是以一種持續(xù)且顯著的情感低落，且伴有思維與行動(dòng)的遲滯與各種軀體化有關(guān)癥狀，及心境不快與身體器官部分之功能紊亂。臨床上表現(xiàn)復(fù)雜，且發(fā)病機(jī)制尚不明確[1]。激素是影響抑郁癥的一大原因，其中也包括了性激素，性激素在維持正常的性生理中起到了關(guān)鍵的作用，且也是導(dǎo)致情緒產(chǎn)生變化的重要因素。逍遙散源自《太平惠民合劑局方》，由當(dāng)8味中藥組成，具有具有疏肝解郁，健脾和營(yíng)，養(yǎng)血調(diào)經(jīng)之功效。應(yīng)用廣，療效好，安全性高[2]。

一.實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1材料

選用昆明雌性小鼠為實(shí)驗(yàn)研究動(dòng)物對(duì)象，開(kāi)始試驗(yàn)時(shí)小鼠重18g～21g，由齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2實(shí)驗(yàn)使用藥物

逍遙丸 ：由河南省濟(jì)源市濟(jì)世藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（濃縮丸），批號(hào) ：1901092，氫化可的松（注射液）：由國(guó)藥集團(tuán)容生制藥有限公司生產(chǎn)，氟西汀：由（Patheon France（法國(guó)）生產(chǎn)商生產(chǎn)，禮來(lái)蘇州制藥有限公司，編號(hào)：8802A。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1小鼠抑郁模型的建立

采用糖皮質(zhì)激素——?dú)浠傻乃晒辔阜绞浇⑿∈笠钟舭Y模型。

1.3.2小鼠的分組及實(shí)驗(yàn)步驟

分為正常組，對(duì)照組，中藥組和西藥組共四組，每組15只小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后，除正常組外，余組小鼠建立抑郁模型，三組模型組對(duì)小鼠灌胃每只每日0.1ml氫化可的松，正常組對(duì)小鼠灌胃每只每日0.1ml生理鹽水，持續(xù)21d后，停止造模，后中藥組給予逍遙丸灌胃，將100丸逍遙丸溶于125ml蒸餾水中制成混懸液，劑量為0.3g/ml（每8丸相當(dāng)于飲片3g，將200，100，50丸逍遙丸分別溶于125ml蒸餾水可分別制成劑量為0.6g/ml，0.3g/ml，0.15g/ml，本實(shí)驗(yàn)采用中劑量即0.3g/ml），每只小鼠灌胃0.1ml，西藥組給予氟西汀灌胃，每只小鼠灌胃0.1ml（10mg/kg），正常組與對(duì)照組每組每只小鼠灌胃0.1ml生理鹽水，給藥治療14d，首日給藥時(shí)開(kāi)始采用陰道脫落細(xì)胞法制作涂片，每日一次，每日固定時(shí)間采集，持續(xù)14d，后將涂片固定放置在顯微鏡下觀察確定小鼠動(dòng)情期，末次取完動(dòng)情周期后取每組每只小鼠卵巢進(jìn)行HE切片染色觀察。

1.3.3動(dòng)情周期判斷指標(biāo)

涂片以角化細(xì)胞為主則可認(rèn)為小鼠進(jìn)入了動(dòng)情期[3]。

1.3.4數(shù)據(jù)分析

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，定量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析，使用SPSS25.0，規(guī)定P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二.結(jié)果

2.1小鼠陰道脫落細(xì)胞涂片觀察動(dòng)情周期結(jié)果

a，b代表差異性，不同字母表示具有差異性

結(jié)果分析：不同組別的動(dòng)情期時(shí)間不同，具有顯著差異（P<0.01），正常組、中藥組、西藥組時(shí)間高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但是正常組、中藥組、西藥組無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05）.不同組別的動(dòng)情期間期不同，具有極顯著差異（P<0.001）.正常組、中藥組、西藥組時(shí)間低于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。正常組低于中藥組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）.中藥組與西藥組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同組別的動(dòng)情期（%）不同，具有極顯著差異（P<0.001）。正常組、中藥組、西藥組時(shí)間高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。正常組高于于中藥組、西藥組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。中藥組與西藥組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同組別的動(dòng)情間期（%）不同，具有極顯著差異（P<0.001），正常組、中藥組、西藥組時(shí)間短于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。正常組低于于中藥組、西藥組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。中藥組與西藥組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同組別的動(dòng)情周期（d）不同，具有顯著差異（P<0.001），正常組、中藥組、西藥組時(shí)間低于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但是正常組、中藥組、西藥組的動(dòng)情周期（d）無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05）。

2.2小鼠陰道脫落細(xì)胞光學(xué)顯微鏡下觀察

鏡下觀察后可以看出動(dòng)情期小鼠以無(wú)核的角化上皮細(xì)胞為主，而非動(dòng)情期則以有核上皮細(xì)胞和炎細(xì)胞浸潤(rùn)為主。

3.3小鼠卵巢組織HE染色光學(xué)顯微鏡觀察

鏡下觀察發(fā)現(xiàn)對(duì)照組小鼠卵巢閉鎖卵泡數(shù)量相比于其余三組增多，且在相對(duì)來(lái)說(shuō)較成熟的卵泡中其形態(tài)異常的卵母細(xì)胞也增多。而中藥組與西藥組鏡下觀察趨近于正常組。

三.分析

逍遙丸是為古書(shū)籍《傷寒論》中之“四逆散”演變而成。首見(jiàn)于宋代《太平惠民和劑局方》逍遙散。由柴胡、當(dāng)歸、白芍、白術(shù)、茯苓、甘草、薄荷、生姜 8 味中藥組成[4]，是歷代中醫(yī)們喜用的疏肝解郁，養(yǎng)血調(diào)經(jīng)之經(jīng)典方劑，逍遙丸被廣泛應(yīng)用于婦科疾病、肝臟疾病、應(yīng)激性損傷內(nèi)分泌疾病皮膚疾病和神經(jīng)疾病，而近些年對(duì)神經(jīng)疾病有進(jìn)一步進(jìn)展，大量研究表明逍遙丸可治療部分抑郁癥狀，尤其是經(jīng)期抑郁，產(chǎn)后抑郁以及老年抑郁[5]。

目前被廣泛認(rèn)可的假說(shuō)有去甲腎上腺素（ NE） 及其受體學(xué)說(shuō)、5-羥色胺（5-HT） 及其受體學(xué)說(shuō)、多巴胺（DA）及其受體學(xué)說(shuō)、乙酰膽堿（Ach） 能學(xué)說(shuō)，循環(huán)系統(tǒng)疾病與抑郁、神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞變化、抗抑郁藥物與神經(jīng)元再生，遺傳相關(guān)因素、社會(huì)心理因素，還有與本文有關(guān)的內(nèi)分泌相關(guān)學(xué)說(shuō)如，下丘腦-垂體-腎上腺素軸（ HPA） 興奮亢進(jìn)學(xué)說(shuō)、下丘腦-垂體-甲狀腺軸（ HPT） 功能減退學(xué)說(shuō)、下丘腦-垂體-性腺軸（HPG）的改變（以上均為神經(jīng)內(nèi)分泌研究）[6]，以及較重要的性激素，其中雌激素與孕激素以及其他生殖腺激素均可以影響神經(jīng)中樞系統(tǒng)，如雌激素通過(guò)抑制單胺氧化酶而促進(jìn)抑郁發(fā)作，因此可以解釋女性更年期時(shí)抑郁癥的發(fā)病率較高，孕激素能通過(guò)促進(jìn)部分受體功能而加強(qiáng)對(duì)于神經(jīng)元抑制，產(chǎn)后抑郁癥可能也是由于患者分娩后孕激素快速消退從而導(dǎo)致產(chǎn)后焦慮和易激惹癥狀[7]。

其余大量的實(shí)驗(yàn)研究也表示，抑郁癥與性激素的水平息息相關(guān)尤其是與雌激素水平含量的下降，因此調(diào)查顯示抑郁癥的女性患者更為男性患者的2倍之多。因此臨床上女性容易發(fā)生產(chǎn)后抑郁與絕經(jīng)期抑郁。而男性抑郁患者為睪酮的水平下降臨床上容易發(fā)生老年抑郁[8]。

且逍遙丸中還含有部分化學(xué)成分，其中柴胡皂苷a能調(diào)節(jié)炎癥因子及其相關(guān)通路從而提高精神營(yíng)養(yǎng)因子含量來(lái)改善5-HT、DA、和HPA軸的功能從而產(chǎn)生抗抑郁與焦慮作用、芍藥苷為一種雙向抗炎免疫調(diào)節(jié)藥物，對(duì)于抑郁與焦慮癥狀也具有一定的改善作用[9]。

通過(guò)觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，各組的動(dòng)情期具有顯著差異（p<0.01），各組動(dòng)情間期，動(dòng)情期（%），動(dòng)情間期（%）具有極顯著差異，正常組，中藥組，西藥組動(dòng)情期、動(dòng)情期（%）、動(dòng)情間期（%）均高于對(duì)照組，動(dòng)情間期、動(dòng)情周期均低于對(duì)照組，且中藥組和西藥組分別與正常組對(duì)比，偶具有差異，中藥組與西藥組對(duì)比，極偶具有差異。

即動(dòng)物模型復(fù)制成功，中藥逍遙丸與西藥氟西汀都可以改善小鼠動(dòng)情周期，且使其接近于正常組，且中藥逍遙丸和西藥氟西汀對(duì)小鼠動(dòng)情周期改善效果相當(dāng)，但與正常組還略有差距。

中醫(yī)上腎與HPA軸具有很大的關(guān)聯(lián)性，糖皮質(zhì)激素會(huì)破壞人體陰陽(yáng)平衡從而導(dǎo)致腎陽(yáng)虛[10]，而上述過(guò)外源性注入了糖皮質(zhì)激素也會(huì)導(dǎo)致模型動(dòng)物HPA軸紊亂，這種HPA軸紊亂后表現(xiàn)的現(xiàn)象與中醫(yī)上腎陽(yáng)虛的癥狀十分相似，

而逍遙丸又是疏肝解郁的代表之作，可以改變體內(nèi)5-HT、NE、DA等激素水平含量，改善體內(nèi)HPA、HPT、HPG軸，而其中HPG軸即下丘腦-垂體-性腺軸可能對(duì)動(dòng)情周期的影響較大。

動(dòng)情周期與性激素有極大關(guān)聯(lián)，而抑郁可以導(dǎo)致HPG軸紊亂，從而導(dǎo)致性激素的紊亂，最后即為動(dòng)情周期的改變，逍遙丸可以改善激素水平，進(jìn)而改善HPG軸，對(duì)抑郁癥進(jìn)行治療的同時(shí)即可改善動(dòng)情周期。

綜上所述，抑郁癥與激素息息相關(guān)，而激素又可以改變小鼠的動(dòng)情周期，逍遙丸可以提高激素含量以及改變體內(nèi)5-HT、NE、DA等激素水平含量從而影響小鼠的動(dòng)情周期。

參考文獻(xiàn)

[1]郭珊，郭克鋒.抑郁癥的研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床康復(fù)，2005（04）：131-133.

[2]李夢(mèng)濤，項(xiàng)輝.逍遙丸（散）有效成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中藥材，2010，33（12）：1968-1972.

[3]李靖，李炫誠(chéng)，吳云霞.確定小鼠動(dòng)情周期的三種方法[J].實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2007（03）：63-64+62+76.

[4]修春，宓穗卿，王寧生.逍遙散的藥理研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2007（09）：702-703.

[5]管慶霞，楊志平，趙夢(mèng)瑤，夏昭睿，張雪，楊芳芳，周小影，周妍妍，陳忠新.逍遙丸藥理研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2021，27（07）： 228-234.

[6]王睿，黃樹(shù)明.抑郁癥發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2014，27（12）：1332-1336.

[7]丁桂霞，胡大吉，李有田.抑郁癥發(fā)病機(jī)理的研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007（04）：733-734.

[8]奚耕思，張武會(huì).抑郁癥發(fā)生機(jī)制研究進(jìn)展[J].陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2011，39（06）：64-71.

[9]劉琳，鄒俊波，張小飛，王媚，郭東艷，周曉，王林，張雪，史亞軍.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討逍遙丸治療抑郁和焦慮的作用機(jī)制[J/OL].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)：1-14[2021-06-05].https：//doi.org/ 10.13210 /j.cnki.jhmu.2020 0827.004.

[10]吳斌.糖皮質(zhì)激素副作用的中醫(yī)藥研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21（03）：719-721.