發(fā)酵食品中氨基甲酸乙酯檢測方法的研究進(jìn)展

馬曉馳 金諾 劉佳萌 孫晶 賈寧 孫玉鳳 范蓓

摘 要：氨基甲酸乙酯廣泛存在于發(fā)酵食品中，2007年被世界衛(wèi)生組織癌癥研究機(jī)構(gòu)列為2A類致癌物。國內(nèi)外研究者開發(fā)出了適用于不同樣品條件和研究目的檢測方法。分類介紹了近年來國內(nèi)外文獻(xiàn)報道的傳統(tǒng)和快速檢測氨基甲酸乙酯方法，包括色譜法、光譜法以及其他檢測方法，對這些方法在發(fā)酵食品中的應(yīng)用特點和檢測效果進(jìn)行綜述，并對我國未來氨基甲酸乙酯檢測技術(shù)的發(fā)展趨勢進(jìn)行展望。

關(guān)鍵詞：氨基甲酸乙酯;發(fā)酵食品;傳統(tǒng)檢測;快速檢測

氨基甲酸乙酯（EC）在工業(yè)、畜牧業(yè)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛[1-4]，而在食品領(lǐng)域，EC則是發(fā)酵食品在生產(chǎn)和儲存過程中不可避免產(chǎn)生的副產(chǎn)物，常見于黃酒、醬油和腐乳等食品中[5]。不同發(fā)酵食品中EC的形成機(jī)理不同，但大多與酒精和微生物代謝相關(guān)[6]。EC的主要前體物質(zhì)有尿素、瓜氨酸、氨甲酰磷酸、氫氰酸以及焦碳酸二乙酯等，這些前體物質(zhì)在微生物的作用下與乙醇反應(yīng)產(chǎn)生EC[7-10]。動物毒性實驗表明，EC是一種多點位致癌物，短期、大劑量注射可誘發(fā)嚙齒類動物出現(xiàn)肺癌、皮膚癌等腫瘤[11-12]。給非人類靈長類動物長期每日口服EC，可誘發(fā)其出現(xiàn)肺腺癌和血管瘤等[13]。EC在CYP450的作用下分別轉(zhuǎn)化為N-羥基氨基甲酸乙酯和乙烯基氨基甲酸乙酯，這兩種物質(zhì)能引起DNA、RNA結(jié)構(gòu)損傷，并使機(jī)體中蛋白質(zhì)發(fā)生加聚反應(yīng)，進(jìn)而引發(fā)癌癥[14-15]。因為EC在人體中的代謝機(jī)理與其在嚙齒類動物中的原理十分相似，所以對于人類而言，EC是一種潛在的致癌物質(zhì)，2007年，世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)將EC由2B類提高為2A類致癌物[16]。因此，對發(fā)酵食品中的EC進(jìn)行定性和定量分析檢測具有重大意義，本文將對發(fā)酵食品中EC的標(biāo)準(zhǔn)與各種檢測方法進(jìn)行介紹與評價，并對其未來發(fā)展進(jìn)行展望。

1 國內(nèi)外酒飲料中氨基甲酸乙酯的標(biāo)準(zhǔn)

早在1985年，加拿大衛(wèi)生管理部門就根據(jù)不同酒飲料中EC含量差異，對多種酒飲料中的EC制定了不同等級的強制限量：葡萄酒≤30 μg/L、強化酒≤100 μg/L、蒸餾酒≤150 μg/L、清酒≤200 μg/L、白蘭地≤400 μg/L[17];1989年，美國食品藥品管理局對酒類中的EC制定了推薦限量標(biāo)準(zhǔn)：葡萄酒≤15 μg/L、強化酒≤60 μg/L[18];法國的限量標(biāo)準(zhǔn)為蒸餾酒≤150 μg/L、白蘭地≤1 000 μg/L;捷克的限量標(biāo)準(zhǔn)與加拿大基本一致;韓國、德國和瑞士等國家也對個別酒類制定了限量標(biāo)準(zhǔn);2002年，聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織規(guī)定酒飲料中的EC限量為20 μg/L[19] （表1）。

目前，我國出臺的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)（現(xiàn)行有效）有三部，分別為《GB 5009.223—2014 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基甲酸乙酯的測定》《SN/T 0285—2012 出口酒中氨基甲酸乙酯殘留量檢測方法 氣相色譜—質(zhì)譜法》《GB/T 34266—2017 黃酒中氨基甲酸乙酯預(yù)防控制技術(shù)措施指南》[18-20]。雖然我國對食品中EC的檢測和防控較為關(guān)注，但是沒有相應(yīng)的限量標(biāo)準(zhǔn)。研究表明，我國發(fā)酵食品中EC含量最高的前三名分別是黃酒、腐乳和醬油，平均濃度分別為307.2 、123 、108 μg/L，其次是料酒87 μg/L、白酒72 μg/L、食醋51 μg/L[21-24]，這對于我國發(fā)酵食品產(chǎn)業(yè)和國民健康都具有一定的不良影響。

2 氨基甲酸乙酯檢測方法

為了滿足不同發(fā)酵食品基質(zhì)中的EC檢測，研究者已經(jīng)開發(fā)出了多種定性和定量的EC檢測方法以滿足不同需求（表2）。傳統(tǒng)的檢測方法為色譜法，基于大型分析儀器，能夠?qū)κ称分械腅C進(jìn)行準(zhǔn)確且靈敏的檢測[25];隨著食品檢測技術(shù)的發(fā)展和實際生產(chǎn)生活的需要，研究者也開發(fā)出了更加便捷和快速的檢測方法[26]，如酶法、免疫分析法和分子印跡法等。

2.1 色譜法

EC色譜法檢測技術(shù)大多是基于液相色譜和氣相色譜按照不同的檢測需求與不同檢測器聯(lián)用，對EC痕量檢測，采取凈化/濃縮預(yù)處理程序，以確保方法靈敏度高、重復(fù)性好、適用性廣，能夠滿足不同基質(zhì)中EC定量分析[26]。

2.1.1 液相色譜 Alberts等[27]運用反相固相萃取，建立了液相色譜-大氣壓化學(xué)離子化-串聯(lián)質(zhì)譜的EC檢測方法，檢出限為0.25 μg/L，分別對葡萄酒和烈性酒中的EC進(jìn)行定量分析，平均回收率為94.5%。該法雖然靈敏度和可重復(fù)性高，但是較為耗費時間和經(jīng)濟(jì)成本。Leca等[28]以液-液微萃取法用少量乙酸乙酯提取強化葡萄酒中的EC，運用反相液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜，以EC的二次離子躍遷對EC進(jìn)行定量，檢出限和定量限分別為0.17 、0.52 μg/L，回收率為93%～114%，且重現(xiàn)性較好。該方法有效減少了樣品前處理時有機(jī)溶劑的使用量，同時具有較好的靈敏度。Ojeda等[29]運用液相色譜-熒光法檢測EC，使用高氯酸酸化樣品，用9-呫噸醇對EC進(jìn)行自動柱前衍生使其具有熒光性質(zhì)，用熒光檢測器進(jìn)行捕獲，進(jìn)而計算出EC含量，該法檢出限為0.52 μg/L，應(yīng)用于葡萄酒中EC的檢測，回收率為101%～103%。這種通過衍生化進(jìn)行樣品前處理的方法，極大地縮短了前處理時間，使樣品檢測前處理過程更加快速簡便。

2.1.2 氣相色譜 GC-MS結(jié)合了化合物的分離和鑒定，并具有高分辨率和重現(xiàn)性的特點。Ma等[30]建立了一種基于乙醇和K2HPO4水溶液兩相系統(tǒng)的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法，用于定量紅酒中EC，研究者優(yōu)化了萃取時間、溫度、pH和乙醇濃度，該方法的線性工作范圍是10～100 μg/L，檢出限和定量限分別為2.8、9.2 μg/L。Xian等[31]建立了一種基于冰浴輔助氫氧化鈉純化的GC-MS/MS法，檢測啤酒和黃酒中的EC，樣品在加入內(nèi)標(biāo)后用乙腈-乙酸乙酯萃取，在冰浴條件下用NaOH純化濃縮后上機(jī)檢測，該法線性范圍為2～200 μg/ L，檢出限為0.1～0.5 μg/ kg，定量限為0.5～1.5 μg/ kg，回收率為81.5%～121.0%。趙依芃等[32]建立了穩(wěn)定同位素稀釋-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測乳酪、腐乳和酸奶等食品中的EC，在前處理時向樣品中加入EC-d5作為內(nèi)標(biāo)物，該方法的檢出限不超過5 ng/g，回收率在94.2%～108.3%之間。GC-MS法的靈敏度好、穩(wěn)定性和回收率高，但是檢測結(jié)果會受到萃取條件如溶劑、溫度和時間的影響，同時樣品基質(zhì)和酒精含量對檢測結(jié)果也有一定的影響，對低EC含量的食品檢測差異性比較大。

2.1.3 薄層色譜法 黃秋婷等[33]建立了薄層色譜數(shù)碼成像法，將EC直接上樣至薄層板，用在磷酸創(chuàng)造的酸性環(huán)境下用肉桂醛對EC進(jìn)行衍生，得到的衍生物能夠在365 nm的激發(fā)波長下產(chǎn)生445～460 nm范圍內(nèi)的熒光，展開劑展開后在暗箱式紫外分析儀在365 nm下掃描薄層板，運用MATLAB對衍生物的熒光斑點進(jìn)行積分定量，該方法的檢出限為59.5 μg/L，樣品加標(biāo)回收率為60.12%～84.70%。該法操作方便簡單，無需前處理，但由于人工上樣不均勻且不同薄層板之間的差異較大，因此該法的穩(wěn)定性較差。

2.2 光譜法

雖然色譜技術(shù)能夠準(zhǔn)確對痕量的EC進(jìn)行定量檢測，但是由于其操作復(fù)雜、成本較高，無法實現(xiàn)大規(guī)?？焖俸Y查，因此，光譜技術(shù)可以作為色譜技術(shù)的補充，對EC進(jìn)行半定量的篩查。常用的EC光譜檢測技術(shù)主要有傅里葉變換紅外光譜、核磁共振波譜和表面增強拉曼光譜等。

2.2.1 傅里葉變換紅外光譜 隨著化學(xué)計量學(xué)以及計算機(jī)技術(shù)的發(fā)展，研究人員將傅里葉變換紅外光譜法運用在食品檢測領(lǐng)域[34]。Manley等[35]運用軟件獨立建模分類法結(jié)合FTIR，對葡萄汁和葡萄酒中EC含量進(jìn)行了大批量檢測，雖然樣品分辨率達(dá)到了80%～88%，但是樣品EC實際值和檢測值之間的相關(guān)性較差（r=0.47）。Lache Nmeier等[36]用傅立葉變換紅外光譜儀，通過偏最小二乘回歸衰減法對82個果酒樣品中的EC含量進(jìn)行監(jiān)測，同時對比GC-MS/MS檢測結(jié)果，發(fā)現(xiàn)FTIR檢測方法定量分析的準(zhǔn)確性較差，但由于前處理簡單、檢測快速方便，該方法可以作為半定量分析用于大規(guī)模篩查。

2.2.2 核磁共振波譜 Monakhova等[37]首次將核磁共振波譜技術(shù)于偏最小二乘法（PLS）結(jié)合，對112個果酒樣品進(jìn)行檢測，核磁共振波譜提供全面的結(jié)構(gòu)信息，研究者基于芳香族區(qū)域中的PLS校準(zhǔn)進(jìn)行間接定量，通過GC-MS/MS驗證PLS模型的準(zhǔn)確性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在EC含量小于1 mg/L時，該方法能夠提供可靠的EC定量分析，具有良好的靈敏度和選擇性。

2.2.3 表面增強拉曼光譜 表面增強拉曼光譜法是通過檢測樣品吸附在金、銀等粗糙表面的拉曼散射信號，從而獲得待測樣品信息的方法[38]。Yang等[39]以銀包裹的納米金粒子制備銀星納米顆粒作為信號放大器，可在樣品中提高EC的拉曼增強作用，選取1 003 cm-1處的特征譜帶用于EC定量，檢出限范圍為0.8～11.9 μg/L。Qi等[40]用AgNO3、抗壞血酸和聚乙烯吡咯烷酮制備了花形銀納米顆粒，將其吸移在硅片上，以785 nm為激發(fā)波長，選取857 cm-1處的特征譜帶建立拉曼強度和EC濃度之間的回歸模型，該方法的線性范圍為10-9～10-5 mol/L，在白酒樣品的檢測中，回收率為89.94%～90.14%。Du等[41]將EC吸附在Ag20團(tuán)簇上，形成絡(luò)合物C3H7NO2-Ag20，該絡(luò)合物的拉曼強度比EC常規(guī)拉曼強度增強了10倍左右，在化學(xué)與電磁場增強共同作用下，絡(luò)合物的表面拉曼增強因子達(dá)到3.6×1010，因此可以看出表面增強拉曼光譜法能夠?qū)C進(jìn)行痕量檢測。

2.3 其他方法

隨著快檢技術(shù)的發(fā)展，越來越多國內(nèi)外研究者致力于EC快檢方法的研究和建立，如酶法、免疫分析法以及分子印跡法等快檢方法。

2.3.1 酶法 酶分析法是利用酶的特異性這一特點，對待測物進(jìn)行定性和定量分析。劉麗斌等[42]發(fā)現(xiàn)，EC在溴水-氫氧化鈉增敏處理后，對乙酰膽堿酯酶活性的抑制效果顯著提高，并且在一定范圍內(nèi)，酶活性的抑制效果與EC的濃度線性相關(guān)，該檢測方法在1～7.5 mg/L范圍內(nèi)線性良好，檢出限為41.77 μg/L。該方法操作簡單，條件溫和，檢測成本較低。LU等[43]建立谷氨酸脫氫酶/氨基甲酸酯降解酶的雙酶偶聯(lián)反應(yīng)體系，根據(jù)監(jiān)測NADH的濃度變化來實現(xiàn)對EC的定量檢測，進(jìn)而開發(fā)了基于雙酶體系的分光光度法檢測EC，在NADH在340 nm處的吸光度與EC的濃度在0.3～50 μmol/L范圍內(nèi)線性正相關(guān)，該法檢出限為9.28 nmol/L。Zhang等[44]同樣基于谷氨酸脫氫酶/氨基甲酸酯降解酶的雙酶體系，將兩種酶用殼聚糖和明膠包裹并固定在石墨電極表面，從而建立電流型生物傳感器，該傳感器的檢測范圍為0.4～50 μmol/L，檢出限為5.30 nmol/L，測定黃酒中的EC，回收率為100%～103%。這種酶分析法是基于酶的高度專一性對EC進(jìn)行定量，無需對樣品前處理，易于操作，檢測結(jié)果較為穩(wěn)定，靈敏度較高。

2.3.2 免疫分析法 免疫分析法是基于抗原和抗體的特異性識別和可逆性結(jié)合而建立的相對高效的檢測方法。馬曉馳等[45]設(shè)計并合成了一種新型EC半抗原，進(jìn)而制備抗原及抗血清，抗血清效價1∶10 000，對抗血清的免疫活性進(jìn)行評價，靈敏度和特異性顯示良好。Luo等[46]將EC用9-呫噸醇衍生化后，制備其抗原和抗體，并通過間接ELISA法檢測黃酒中的EC，檢出限為166 μg/L，回收率為84.4%～100.9%。在上述研究的基礎(chǔ)上，Luo等[47]將熒光納米硅顆粒引入ELISA的OPD-H2O2底物顯色系統(tǒng)中，建立熒光-酶聯(lián)免疫吸附法，用于檢測紅酒中的EC，辣根過氧化物酶催化OPD的產(chǎn)物DAP可以有效地猝滅納米硅在440 nm處的發(fā)射的熒光信號，大大提升了ELISA的靈敏度，該方法的工作范圍為3.9～105 μg/L，檢出限為2.6 μg/ L。任勃儒[48]制備EC的抗體和抗原，用膠體金標(biāo)記EC抗體，與EC人工抗原發(fā)生特異性結(jié)合，以此制備金標(biāo)免疫層析試紙條用于檢測發(fā)酵醋，該方法的檢出限為0.5 μg/L，選擇性高，無前處理過程，檢測過程方便快捷、操作人員學(xué)習(xí)成本低。

2.3.3 分子印跡法 分子印跡聚合物是以待測分子為模板，通過分子印跡技術(shù)合成的物質(zhì)，該聚合物具有特異性識別位點，能夠?qū)δ０宸肿舆M(jìn)行高效的特異性識別和選擇性吸附。劉紀(jì)紅等[49]以EC作為模板分子、MMA為功能單體制備了EC分子印跡聚合物，再與CdSe/CdS核殼量子點結(jié)合，制備了EC熒光分子印記復(fù)合微球，使其具有較好的熒光猝滅作用，利用該微球檢測EC，檢測線性范圍為1 ～5 mmol/L。李曼麗[50]以EC為模板分子，PTMSO為功能單體制備了EC分子印跡聚合物，并建立了EC分子印跡電化學(xué)傳感器，該方法線性范圍為10-10～10-6 mol/L，檢出限為3.14 nmol/L，回收率為97.2%～108%。Wu等[51]首次將SERS、固相萃取SPE與分子印跡技術(shù)結(jié)合用于檢測黃酒中的EC，結(jié)果表明，該法在0～500 mg/L 范圍內(nèi)對黃酒中EC的含量有較好的定量能力。分子印跡法特異性強，可以排除樣品基質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，同時可以結(jié)合不同的檢測手段，以提高檢測靈敏度。

3 結(jié)論與展望

近年來，國內(nèi)外研究者開發(fā)了許多EC的檢測方法，各種方法在靈敏度、回收率、穩(wěn)定性和便捷性上各有特色，互為補充。對于痕量檢測而言，色譜法尤其是氣相色譜-質(zhì)譜法應(yīng)用廣泛，其準(zhǔn)確性、靈敏度和檢測的穩(wěn)定性相較于其他方法較高，但是由于前處理過程復(fù)雜、檢測成本較高，該方法無法滿足大規(guī)模的現(xiàn)場篩查工作。因此，國內(nèi)外研究者開發(fā)出了諸多其他可用于大規(guī)模篩查的快速檢測方法，操作簡單、便攜度高，且對EC具有較好的選擇性，能夠達(dá)到對EC的定性和半定量檢測。

發(fā)酵食品在我國日常生活中隨處可見且種類繁多，國民對其質(zhì)量安全也十分重視。因此，針對傳統(tǒng)儀器檢測法，應(yīng)開發(fā)更加高通量、便捷快速的前處理方法，以提高檢測效率;針對快檢方法，排除基質(zhì)效應(yīng)的影響、優(yōu)化現(xiàn)有方法并建立能夠檢測不同食品基質(zhì)中EC的方法具有重要意義;同時，我國應(yīng)當(dāng)盡快出臺EC在發(fā)酵食品中的限量標(biāo)準(zhǔn)，以此來促進(jìn)我國發(fā)酵食品產(chǎn)業(yè)的健康和穩(wěn)定發(fā)展。

參考文獻(xiàn)

[1]Schmidt C F，Harer W B.The action of drugs on respiration：II.ether，chloroform，chloral，urethane，luminal，magnesium，caffeine，strychnine，and atropine[J]. Journal of Experimental Medicine，1922，37（1）：69-81.

[2]Hawkins J A，Murphy J B.The effect of ethyl urethane anesthesia on the acid-base equilibrium and cell contents of the blood[J]. Journal of Experimental Medicine，1925，42（5）：609-618.

[3]Ough C S.Ethyl carbamate in fermented beverages and foods.I.Naturally occurring ethyl carbamate[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，1976，24（2）：323-328.

[4]Canas B J，et al.Ethyl carbamate levels in selected fermented foods and beverages[J]. Journal - Association of Official Analytical Chemists，1989，72（6）：873-876.

[5]Lee K G，et al.Effect of citrulline，urea，ethanol，and urease on the formation ofn，ethyl carbamate in soybean paste model system[J]. Food Chemistry，2015，189（15）：74-79.

[6]Ough C S.Ethyl carbamate in fermented beverages and foods.II.Possible formation of ethylcarbamate from diethyl dicarbonate addition to wine[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，1976，24（2）：328-331.

[7]Haque M R，Bradbury J H.Total cyanide determination of plants and foods using the picrate and acid hydrolysis methods[J]. Food Chemistry，2002，77（1）：107-114.

[8]Zhou K，Siroli L，Patrignani F，et al.Formation of ethyl carbamate during the production process of cantonese soy sauce[J]. Molecules，2019，24（8）：1474.

[9]Anderson N，Pual S H，Henry L M.Induction of pulmonary tumors in mice with ethyl carbamate （urethane）[J]. Journal of the National Cancer Institute，1943，4 （3）：309-319.

[10]Beland F A，et al.Effect of ethanol on the tumorigenicity of urethane （ethyl carbamate）in B6C3F1 mice[J]. Food and Chemical Toxicology，2005，43（1）：19.

[11]Schlatter J，Lutz W K.The carcinogenic potential of ethyl carbamate （urethane）：risk assessment at human dietary exposure levels[J]. Food and Chemical Toxicology，1990，28（3）：205-211.

[12]Philipp H，et al.Genotoxicity of ethyl carbamate （urethane）in Salmonella，yeast and human lymphoblastoid cells[J]. Mutation Research/Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis，1997，390（1-2）：11-19.

[13]Jiao Z H，et al.Ethyl carbamate in fermented beverages：presence，analytical chemistry，formation mechanism，and mitigation proposals[J]. Comprehensive Reviews in Food Science & Food Safety，2014，13（4）：611-626.

[14]Allen N，et al.Alcohol consumption and ethyl carbamate[J]. IARC monographs on the evaluation of carcinogenic risks to humans/World Health Organization，International Agency for Research on Cancer，2010（96）：1-1379.

[15]Conacher H B，Page B D.Ethyl carbamate in alcoholic beverages，a Canadian case history[A]. In Proceedings of the euro food toxicity，interdisciplinary conference on natural toxicants in food[C]. Zurich，Switzerland：European Society of Toxicology，1986：237-242.

[16]Weber J V，Sharypov V I.Ethyl carbamate in foods and beverages：a review[J]. Enviro nmental Chemistry Letters，2009，7（3）：233-247.

[17]Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives.Joint FAO/WHO Food Standards Programme[Z].Beijing，China：Codex Committee on Contaminants in Foods，2007：16-20.

[18]食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基甲酸乙酯的測定：GB 5009.223—2014[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2015：1.

[19]出口酒中氨基甲酸乙酯殘留量檢測方法氣相色譜-質(zhì)譜法：SN/T 0285—2012[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012：1.

[20]國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.黃酒中氨基甲酸乙酯預(yù)防控制技術(shù)措施指南：GB/T 34266—2017[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017：1.

[21]Chen D W，Ren Y P，Zhong Q D，et al.Ethyl carbamate in alcoholic beverages from China：levels，dietary intake，and risk assessment[J]. Food Control，2017（72）：283-288.

[22]Li G H，Zhong Q D，Wang D B，et al.A survey of ethyl carbamate in beer from Chinese market[J]. Food Control，2017（79）：254-257.

[23]Xia Q，Yang C J，Wu C D，et al.Quantitative strategies for detecting different levels of ethyl carbamate （EC）in various fermented food matrices：an overview[J]. Food Control，2018（84）：499-512.

[24]林宜錦，歐夢瑩，關(guān)統(tǒng)偉，等.釀造酒中氨基甲酸乙酯的研究進(jìn)展[J]. 食品工業(yè)科技，2019（11）：358-364

[25]舒志鋼，褚國良，安康.飲料酒中氨基甲酸乙酯檢測方法研究進(jìn)展[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2019，10（6）：1594-1600.

[26]馬澤鑫，范勇，趙曉寧，等.葡萄酒中氨基甲酸乙酯檢測前處理方法綜述[J]. 中國標(biāo)準(zhǔn)化，2019（18）：180-181.

[27]Alberts P，Stander M A，De V A.Development of a novel solid-phase extraction，LC-MS/MS method for the analysis of ethyl carbamate in alcoholic beverages：application to South African wine and spirits[J]. Food Additives & Contaminants，2011，28（7）：826-839.

[28]Leca J M，Pereira V，Pereira A C，et al.A Sensitive method for the rapid determination of underivatized ethyl carbamate in fortified wine by liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry[J]. Food Analytical Methods，2018，11（2）：327-333.

[29]Ojeda D A，et al.Automated pre-column derivatization with 9-xanthydrol for the determination of ethyl carbamate in food matrices by high performance liquid chromatography with fluorimetric detection[J]. Journal of Food Measurement and Characterization，2019，13（4）：2722-2728.

[30]Ma L J，Tong W Z，Du L P，et al.Optimization of an aqueous two-phase system for the determination of trace ethyl carbamate in red wine[J]. Journal of Food Protection，2019，82（8）：1377-1383.

[31]Xian Y P，Wu Y L，Hao D，et al.Ice-bath assisted sodium hydroxide purification coupled with GC-MS/MS analysis for simultaneous quantification of ethyl carbamate and 12 N-nitrosoamines in yellow rice wine and beer[J]. Food Chemistry，2019（300）：125200.

[32]趙依芃，王宗義，沙菲，等.穩(wěn)定同位素稀釋-GC-MS/MS快速檢測發(fā)酵食品中的氨基甲酸乙酯[J].中國食品學(xué)報，2018，18（4）：306-311.

[33]黃秋婷，王浩，黃惠華.薄層數(shù)碼成像法檢測酒中氨基甲酸乙酯[J]. 釀酒科技，2019 （6）：96-100.

[34]高孟朝，米春利，施怡.傅里葉變換紅外光譜分析技術(shù)及在食品檢測中的應(yīng)用[J].食品安全導(dǎo)刊，2018（33）：67-69.

[35]Manley M，Van Z A，Wolf E E，et al.The evaluation of the applicability of fourier transform near-infrared （FT-NIR）spectroscopy in the measurement of analytical parameters in must and wine[J]. South African Journal of Enology and Viticulture，2017，22（2）：93-100.

[36]Lache Nmeier D W.Rapid screening for ethyl carbamate in stone-fruit spirits using FTIR spectroscopy and chemometrics [J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry，2005，382（6）：1407-1412.

[37]Monakhova Y B，Kuballa T，Lache Nmeier D W.Rapid quantification of ethyl carbamate in spirits using NMR spectroscopy and chemometrics [J]. ISRN Analytical Chemistry，2012，352（6）：416-420.

[38]宋佳，喬玲，朱毛毛，等.拉曼光譜技術(shù)在食品質(zhì)量安全檢測中的應(yīng)用[J]. 食品安全導(dǎo)刊，2018（33）：123.

[39]Yang D T，Zhou H B，Ying Y B，et al.Surface-enhanced Raman scattering for quantitative detection of ethyl carbamate in alcoholic beverages [J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry，2013，405 （27）：9419-9425.

[40]Qi H Y，Chen H C，Wang Y，et al.Detection of ethyl carbamate in liquors using surface-enhanced Raman spectroscopy[J]. Royal Society Open Science，2018，5（12）：185139.

[41]Du J M，Wang H Y，Wang H，et al.Surface-enhanced Raman scattering of ethyl carbamate adsorbed on Ag20 cluster：enhancement mechanism [J]. Journal of Molecular Structure，2017（1131）：212-217.

[42]劉麗斌，黃秋婷，彭程，等.乙酰膽堿酯酶抑制率法測定氨基甲酸乙酯的研究 [J]. 食品工業(yè)科技，2014，35（5）：299-302.

[43]Lu X Xiaoxia，et al.Spectrophotometric determination of ethyl carbamate through bi -enzymatic cascade reactions[J]. Analytical Methods，2015，7（4）：1261-1264.

[44]Zhang Z W，Lu X X，Tian Y P，et al.High-sensitive electrochemical determination of ethyl carbamate using urethanase and glutamate dehydrogenase modified electrode[J]. Electroanalysis，2017，29（2）：481-488.

[45]馬曉馳，孫玉鳳，陳衛(wèi)華.新型氨基甲酸乙酯人工抗原的制備與表征[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2020，2（11）：556-561.

[46]Luo L，et al.Development of an indirect ELISA for the determination of ethyl carbamate in Chinese rice wine[J]. Analytica Chimica Acta，2016（950）：162-169.

[47]Luo L，Song Y，Zhu C Z，et al.Fluorescent silicon nanoparticles-based ratiometric fluorescence immunoassay for sensitive detection of ethyl carbamate in red wine[J]. Sensors and Actuators B-Chemical，2018（255）：2742-2749.

[48]任勃儒.發(fā)酵醋液中氨基甲酸乙酯免疫快速檢測技術(shù)研究[D].河北保定：河北大學(xué)，2016.

[49]劉紀(jì)紅，楊衛(wèi)海，嚴(yán)守雷，等.氨基甲酸乙酯熒光分子印跡微球識別機(jī)理及其熒光特性研究[J]. 食品科學(xué)，2010，31（Z1）：14-18.

[50]李曼麗.氨基甲酸乙酯的分析方法的研究[D].江蘇無錫：江南大學(xué)，2016：27-36.

[51]Wu Z Z，et al.Highly sensitive determination of ethyl carbamate in alcoholic beverages by surface-enhanced Raman spectroscopy combined with a molecular imprinting polymer[J]. RSC Advances，2016，6（111）：109442-109452.

Research Advancements on Detection Methods of Ethyl Carbamate in Fermented Food

MA Xiao-chi，JIN Nuo，LIU Jia-meng，SUN Jing，JIA Ning，SUN Yu-feng*，F(xiàn)AN Bei*

（Institute of Food Science and Technology，Chinese Academy of Agricultural Sciences/ Key Laboratory of Agro-products Quality and Safety in Harvest，Storage，Transportation，Management and Control，MOA，Beijing 100193，China）

Abstract：Ethyl carbamate is widely found in fermented foods.In 2007，ethyl carbamate was classified as a Class 2A carcinogen by the International Agency for Research on Cancer of the World Health Organization.Researchers have developed detection methods suitable for different sample conditions and research purposes.This article reviewed the traditional and rapid methods for the detection of ethyl carbamate，including chromatography，spectroscopy，and other detection methods，and describes the application characteristics and detection results of these methods in fermented food.The development trend of ethyl ester detection technology is prospected.

Keywords：ethyl carbamate;fermented food;traditional detection;rapid detection

基金項目：國家農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)地收貯運質(zhì)量安全風(fēng)險評估項目（項目編號：GJFP2019019）。

作者簡介：馬曉馳（1995— ），女，碩士研究生，研究方向：食品質(zhì)量與安全。

共同通信作者：孫玉鳳（1984— ），女，博士，副研究員，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與品質(zhì)評價;范蓓（1981— ），女，博士，研究員，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全。