黃連須多糖水浴提取工藝優(yōu)化及體外抗氧化活性研究

田谷正男，胡 瑩，蔣鳳珍，朱希強(qiáng)，姜 寧,2，劉曉鵬,2*

(1.湖北民族大學(xué) 生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，湖北 恩施 445000；2.生物資源保護(hù)與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 恩施 445000)

黃連(CoptischinensisFranch.)為毛茛科黃連屬多年生草本植物，主要藥用部位是干燥根莖.《中華人民共和國(guó)藥典》記載的方劑中有120多種含有黃連及其炮制品[1]，研究證明多糖為黃連的主要活性成分之一[2-3]，具有降血糖[4]、抗氧化[5]、神經(jīng)保護(hù)[6]、抗炎[7]等諸多藥理活性.

自從1956年衰老自由基學(xué)說(shuō)提出后，各種抗氧化劑一直是研究的熱點(diǎn)，而天然的抗氧化劑具有穩(wěn)定性好、安全、無(wú)副作用、易獲取等特點(diǎn)，因此從綠色天然的植物中提取，特別是從藥食同源的植物中提取抗氧化劑具有極大的研究?jī)r(jià)值.以黃連須為研究對(duì)象，對(duì)黃連須多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)其體外抗氧化活性進(jìn)行探究，為黃連副產(chǎn)物的高效開發(fā)利用、提高黃連附加值提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).

1 材料與方法

1.1 材料

黃連須(購(gòu)于恩施市太山廟天惠黃連專業(yè)合作社)，60 ℃烘干，粉碎過(guò)60目篩，備用.

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

硫酸，三氯甲烷，L-抗壞血酸，H2O2，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)有限公司；無(wú)水乙醇，正丁烷，武漢市中天化工有限責(zé)任公司；蒽酮，DPPH，ABTS，三吡啶三吖嗪(2,4,6-Tris(2-pyridyl)-s-triazine,TPTZ)，菲啰嗪，源葉生物科技有限公司.

1.3 儀器與設(shè)備

TDL-40B離心機(jī)，TDL-80ZB離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州智博儀器制造有限公司；752紫外可見分光光度計(jì)，上海菁華科技有限公司；全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀，賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司.

1.4 方法

1.4.1 黃連須粗多糖含量測(cè)定 稱取一定量的黃連須粉末，水浴提取后，4 000 r/min離心20 min，收集上清液，此過(guò)程重復(fù)2次，合并上清液并加入無(wú)水乙醇至無(wú)水乙醇的體積分?jǐn)?shù)達(dá)80%，4 ℃過(guò)夜，然后4 000 r/min離心20 min，取沉淀，用80 ℃的去離子水使其復(fù)溶后用Sevag法[8]去蛋白，再加4倍體積的無(wú)水乙醇醇沉.醇沉沉淀經(jīng)去離子水復(fù)溶，即為黃連須粗多糖溶液.采用硫酸蒽酮比色法[9]，測(cè)其多糖含量，按照以下公式計(jì)算黃連須粗多糖得率:

式中：A為多糖得率(%)；ρ為測(cè)定樣品液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(mg/mL)；V為提取體積(mL)；N為稀釋倍數(shù)；m為黃連須粉末質(zhì)量(mg).

1.4.2 黃連須多糖提取工藝的優(yōu)化

1) 單因素實(shí)驗(yàn).① 不同提取溫度對(duì)多糖得率的影響.稱取一定量的黃連須粉末按料液比1∶20(g/mL)，分別在50、60、70、80、90 ℃水浴下提取2 h；按1.4.1方法提取多糖并計(jì)算得率.② 不同提取時(shí)間對(duì)多糖得率的影響.稱取一定量的黃連須粉末按料液比1∶20(g/mL)，分別在80 ℃水浴下提取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h；按1.4.1方法提取多糖并計(jì)算得率.③ 不同料液比對(duì)多糖得率的影響.稱取一定量的黃連須粉末按料液比1∶5、1∶10、1∶20、1∶30、1∶40(g/mL)，在80 ℃水浴下提取2 h；按1.4.1方法提取多糖并計(jì)算得率.④ 不同提取次數(shù)對(duì)多糖得率的影響.稱取一定量的黃連須粉末按料液比1∶20(g/mL)，在80 ℃水浴下2 h分別提取1、2、3、4次，按1.4.1方法提取多糖并計(jì)算得率.

2) 正交實(shí)驗(yàn).根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用L9(34)正交表設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平見表1.

表1 正交因素水平表Tab.1 Factors and levels of orthogonal experiment

3) 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn).按照正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的工藝進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以驗(yàn)證工藝的穩(wěn)定性和可靠性.

1.4.3 黃連須粗多糖體外抗氧化活性的測(cè)定

1) DPPH自由基清除力的測(cè)定.將Vc配制成摩爾濃度分別為88.72、44.36、22.18、11.09、5.54、2.77和1.39 μmol/L的溶液，根據(jù)改良馬超等[10]的方法，測(cè)定其DPPH自由基清除率，以Vc摩爾濃度為橫坐標(biāo)，DPPH自由基清除率為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程；同時(shí)檢測(cè)黃連須粗多糖2.000 0、1.000 0、0.500 0、0.250 0、0.125 0、0.062 5、0.031 2 mg/mL質(zhì)量濃度范圍的DPPH自由基清除率，以黃連須粗多糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，DPPH自由基清除率為縱坐標(biāo)，繪制量效曲線并計(jì)算回歸方程.以Vc當(dāng)量表示黃連須粗多糖DPPH自由基清除力的大小.DPPH自由基清除率計(jì)算公式為

式中：B1為DPPH自由基清除率(%)；As為待測(cè)樣品與DPPH溶液混合的吸光度值；Ac1為待測(cè)樣品與無(wú)水乙醇混合的吸光度值；A01為蒸餾水或緩沖液與DPPH溶液混合的吸光度值.

2) ABTS自由基清除力的測(cè)定.根據(jù)張巖等[11]測(cè)定方法，稍作改良.將88.72 μmol/L摩爾濃度的Vc溶液2倍系列稀釋，測(cè)定1.39～88.72 μmol/L范圍內(nèi)的ABTS自由基清除率，以Vc摩爾濃度為橫坐標(biāo)，ABTS自由基清除率為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程；按照相同方法檢測(cè)黃連須粗多糖在1.000 0、0.500 0、0.250 0、0.125 0、0.062 5、0.031 2、0.015 6 mg/mL質(zhì)量濃度范圍的ABTS自由基清除率，繪制曲線、計(jì)算線性回歸方程.以Vc當(dāng)量表示黃連須粗多糖ABTS自由基清除能力的大小.ABTS自由基清除率計(jì)算公式為

式中：B2為ABTS自由基清除率(%)；At為待測(cè)樣品與ABTS溶液混合的吸光度值；Ac2為待測(cè)樣品與無(wú)水乙醇或緩沖液混合的吸光度值；A02為蒸餾水或緩沖液與ABTS溶液混合的吸光度值.

3) 羥自由基清除力的測(cè)定.根據(jù)Wang等[12]測(cè)定方法，稍作改良.分別檢測(cè)2.84、1.42、0.71、0.35、0.18、0.09、0.04 mmol/L Vc溶液和2.000 0、1.000 0、0.500 0、0.250 0、0.125 0、0.062 5、0.031 2 mg/mL黃連須粗多糖溶液的羥自由基清除率，以Vc摩爾濃度、黃連須粗多糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，羥自由基清除率為縱坐標(biāo)，繪制曲線并計(jì)算回歸方程.以Vc當(dāng)量表示黃連須粗多糖羥自由基清除力大小.羥自由基清除率計(jì)算公式為

式中：B3為羥自由基清除率(%)；Ar為加入樣品的吸光度值；Ac3為樣品本身的吸光度值；A03為不加樣品的吸光度值.

4) 總還原力的測(cè)定.根據(jù)劉進(jìn)杰等[13]測(cè)定方法，稍作改良.以Vc為陽(yáng)性對(duì)照，檢測(cè)354.87、177.43、88.72、44.36、22.18、11.09、5.55 μmol/L Vc溶液的總還原力，以Vc摩爾濃度為橫坐標(biāo)，在波長(zhǎng)700 nm處有總還原反應(yīng)特征吸收峰，因此以吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程；再測(cè)定黃連須粗多糖質(zhì)量濃度為2.000 0、1.000 0、0.500 0、0.250 0、0.125 0、0.062 5、0.031 2 mg/mL溶液的總還原力，以黃連須粗多糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制曲線并計(jì)算回歸方程.以Vc當(dāng)量表示黃連須粗多糖總還原力的強(qiáng)弱.

5)黃連須粗多糖鐵離子還原抗氧化能力(FRAP)的測(cè)定.根據(jù)張韞等[14]測(cè)定方法，稍作改良.測(cè)定摩爾濃度為177.44、88.72、44.36、22.18、11.09、5.54、2.77 μmol/L Vc溶液作為陽(yáng)性對(duì)照，以Vc摩爾濃度為橫坐標(biāo)，在波長(zhǎng)593 nm處有鐵離子還原反應(yīng)特征吸收峰，因此以吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程；再測(cè)定黃連須粗多糖質(zhì)量濃度分別為2.000 0、1.000 0、0.500 0、0.250 0、0.1250 0、0.062 5、0.031 2 mg/mL溶液的鐵離子還原抗氧化能力，以黃連須粗多糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制曲線并計(jì)算回歸方程.以Vc當(dāng)量表示黃連須粗多糖鐵離子還原抗氧化能力的大小.

6) 亞鐵離子螯合能力的測(cè)定.根據(jù)Agrawal等[15]測(cè)定方法，稍作改良.以EDTA-2Na為陽(yáng)性對(duì)照，分別檢測(cè)摩爾濃度為185.90、92.95、46.47、23.14、11.62 μmol/L EDTA-2Na溶液的亞鐵離子螯合能力，以EDTA-2Na摩爾濃度為橫坐標(biāo)，亞鐵離子螯合力為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程；再測(cè)定黃連須粗多糖2.000、1.000、0.500、0.250、0.125 mg/mL溶液的亞鐵離子螯合能力，以黃連須粗多糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，亞鐵離子螯合力為縱坐標(biāo)，繪制曲線并計(jì)算回歸方程.以EDTA-2Na當(dāng)量表示亞鐵離子螯合能力的大小.亞鐵離子螯合力計(jì)算公式為

式中：B4為亞鐵離子螯合力(%)；A1為加入樣品的吸光度值；A2為不加菲咯嗪的吸光度值；A04為不加空白吸光度值.

2 結(jié)果與分析

2.1 黃連須多糖提取單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 提取溫度對(duì)黃連須粗多糖提取的影響 提取溫度對(duì)黃連須多糖得率的影響見圖1.由圖1可知提取溫度會(huì)顯著影響多糖得率(P<0.01).隨著溫度的不斷提高，黃連須的多糖提取率隨之遞增，在提取溫度為90 ℃時(shí)，提取率最高達(dá)1.13%；這是因?yàn)樘崛囟容^低，黃連須細(xì)胞內(nèi)的多糖分子運(yùn)動(dòng)速率較低，導(dǎo)致大量多糖分子無(wú)法溶出;隨著溫度的提升，細(xì)胞內(nèi)的分子熱運(yùn)動(dòng)逐漸加強(qiáng)，使大部分的多糖分子溢出細(xì)胞，溫度的提高也加快了黃連須細(xì)胞的滲透性增加，從而導(dǎo)致多糖的提取率提高.根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取70、80、90 ℃為后續(xù)正交實(shí)驗(yàn)的3個(gè)水平.

注：小寫字母代表α=0.05顯著水平上的差異. 注：小寫字母代表α=0.05顯著水平上的差異. 圖1 提取溫度對(duì)黃連須多糖得率的影響 圖2 提取時(shí)間對(duì)黃連須多糖得率的影響Fig.1 Effect of extraction temperature on the yield of coptidis radix fibrous polysaccharides Fig.2 Effect of extraction time on the yield of coptidis radix fibrous polysaccharides

2.1.2提取時(shí)間對(duì)黃連須粗多糖提取的影響 提取時(shí)間對(duì)黃連須多糖提取的影響見圖2.由圖2可知，當(dāng)時(shí)間增加到一定程度時(shí)多糖得率明顯增加；在2.5 h后多糖得率趨于穩(wěn)定，此時(shí)的多糖分子已經(jīng)大部分溶出.在提取時(shí)間為1～3 h期間內(nèi)，雖然得率有所增加，無(wú)顯著性差異(P>0.01)，提取2.5 h多糖得率只比提取2.0 h多糖得率高出0.07%，綜合考慮提取效率和能量損耗性，因此選取1.0、1.5、2.0 h為后續(xù)正交實(shí)驗(yàn)的3個(gè)水平.

2.1.3 料液比對(duì)黃連須粗多糖提取的影響 料液比對(duì)黃連須粗多糖提取的影響見圖3，提取料液比顯著影響多糖得率(P<0.05).當(dāng)料液比為1∶5(g/mL)時(shí)多糖提取率最低，主要是提取溶劑過(guò)少，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)大量的多糖分子無(wú)法有效溶出；當(dāng)料液比增加到1∶10(g/mL)時(shí)，多糖提取率顯著提高.當(dāng)料液比為1∶10、1∶20、1∶30(g/mL)時(shí)，多糖得率無(wú)顯著差異；當(dāng)料液比為1∶40(g/mL)時(shí)多糖得率反而下降，主要是因?yàn)槎嗵欠肿釉?∶30(g/mL)時(shí)已經(jīng)大部分溶出，這時(shí)增加提取溶劑體積，并沒有更多的多糖分子溶出，反而溶劑體積增加導(dǎo)致多糖的額外損失，故黃連須多糖的提取率下降.根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取1∶10、1∶20、1∶30(g/mL)為后續(xù)正交實(shí)驗(yàn)的3個(gè)水平.

注：小寫字母代表α=0.05顯著水平上的差異. 注：小寫字母代表α=0.05顯著水平上的差異.圖3 料液比對(duì)黃連須多糖得率的影響 圖4 提取次數(shù)對(duì)黃連須多糖得率的影響 Fig.3 Effect of material-liquid ratio on the yield of coptidis radix fibrous polysaccharides Fig.4 Effect of extraction times on the yield of coptidis radix fibrous polysaccharides

2.1.4 提取次數(shù)對(duì)黃連須粗多糖提取的影響 由圖4可知多糖提取得率與次數(shù)呈正相關(guān).提取2次和3次多糖得率并沒有顯著變化(P>0.05)，但均與提取1次有顯著差異.提取4次雖與提取2次、3次有差異顯著，但從得率比較只比前兩次分別增加了0.17%、0.18%，綜合實(shí)驗(yàn)周期、效率和能耗考慮，故選取1、2、3次為后續(xù)正交實(shí)驗(yàn)的3個(gè)水平.

2.1.5 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示.根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行極差分析，得出影響黃連須多糖提取得率因素主要順序?yàn)锳>D>B>C，即提取溫度>提取次數(shù)>提取時(shí)間>料液比；最優(yōu)組合為A3B2C3D3，即提取溫度90℃、料液比1∶20(g/mL)、提取時(shí)間2 h、提取3次.根據(jù)方差分析(表3)結(jié)果F值得出因素主次與極差分析的結(jié)果一致；且提取溫度、提取時(shí)間、料液比、提取次數(shù)對(duì)多糖得率均有顯著性差異.考慮生產(chǎn)成本與能耗，C3的K值僅比C2大0.07，故選取最優(yōu)提取時(shí)間為C2，即1.5 h，故最終的最優(yōu)組合為A3B2C2D3，即提取溫度90 ℃、料液比1∶20 (g/mL)、提取時(shí)間1.5 h、提取次數(shù)3次.

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of orthogonal experiment

表3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析Tab.3 Results of analysis of variance of orthogonal experiment

2.1.6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的工藝進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，黃連須多糖得率為(1.64±0.02)%.提取得率高于正交實(shí)驗(yàn)的任一組合，證明該提取工藝穩(wěn)定有效.

2.2 黃連須粗多糖體外抗氧化活性測(cè)定結(jié)果

2.2.1 黃連須粗多糖的DPPH自由基清除力 Vc在1.39～88.72 μmol/L摩爾濃度范圍內(nèi)，DPPH自由基清除率與摩爾濃度呈正相關(guān)，且線性關(guān)系良好，決定系數(shù)R2=0.968 9，線性方程為y=0.666 3x+38.361(圖5)；由圖5可知，黃連須粗多糖在0.031 2～2.000 0 mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，DPPH自由基清除率與質(zhì)量濃度呈線性相關(guān)，R2=0.945 1，線性方程為y=28.029x+23.607.計(jì)算得黃連須粗多糖DPPH自由基清除能力為(24.46±2.12)μmol Vc當(dāng)量/mg.

圖5 DPPH自由基清除率 圖6 ABTS自由基清除率 Fig.5 DPPH free radical scavenging rate Fig.6 ABTS free radical scavenging rate

2.2.2 黃連須粗多糖的ABTS自由基清除力 圖6為Vc摩爾濃度與ABTS自由基清除率的量效關(guān)系.由圖6可知，當(dāng)摩爾濃度在1.39～88.72 μmol/L范圍內(nèi)時(shí)，Vc的ABTS自由基清除率與摩爾濃度呈線性關(guān)系，線性方程為y=0.786 8x+11.643，R2為0.997 5；黃連須粗多糖的ABTS自由基清除率與質(zhì)量濃度呈線性關(guān)系(濃度0.015 6～1.000 0 mg/mL)，線性方程為y=62.976x+17.039，決定系數(shù)為R2=0.990 9(圖6).計(jì)算得黃連須多糖ABTS自由基清除能力為(101.63±10.62)μmol Vc當(dāng)量/mg.

2.2.3 黃連須粗多糖的羥自由基清除力 由圖7可知，當(dāng)Vc摩爾濃度在0.04～2.84 mmol/L范圍內(nèi)時(shí)，Vc摩爾濃度與羥自由基清除率呈正相關(guān)，決定系數(shù)為R2=0.994 1，線性方程為y=27.101x+25.824.圖7為黃連須多糖質(zhì)量濃度與羥自由基清除率的量效關(guān)系，當(dāng)黃連須多糖質(zhì)量濃度為0.031 2～2.000 0 mg/mL時(shí)線性關(guān)系良好，線性方程為y=27.01x+11.293，決定系數(shù)為R2=0.985 6，計(jì)算得黃連須多糖羥自由基清除能力為(0.47±0.17)mmol Vc當(dāng)量/mg.

圖7 羥自由基清除率 圖8 總還原力Fig.7 Hydroxyl radical scavenging rate Fig.8 Total reducing power

2.2.4 黃連須粗多糖的總還原力 當(dāng)Vc摩爾濃度在5.54～354.87 μmol/L范圍內(nèi)時(shí)，Vc摩爾濃度與總還原能力為正相關(guān)，且有良好線性關(guān)系，線性方程為y=0.002 7x+0.114 4，決定系數(shù)為R2=0.993 7(圖8).由圖8可知當(dāng)黃連須多糖質(zhì)量濃度在0.031 2～2.000 0 mg/mL范圍內(nèi)時(shí)，量效關(guān)系良好，且質(zhì)量濃度與總還原能力呈正相關(guān)，決定系數(shù)為R2=0.995 7，線性方程為y=0.131 3x+0.116 4.計(jì)算得黃連須多糖總還原力為(52.56±2.99)μmol Vc當(dāng)量/mg.

2.2.5 黃連須粗多糖的鐵離子還原抗氧化能力(FRAP) 圖9為Vc摩爾濃度與鐵離子還原抗氧化能力的量效關(guān)系.由圖可知，當(dāng)Vc摩爾濃度范圍為2.77～177.44 μmol/L時(shí)，Vc摩爾濃度與鐵離子還原抗氧化能力呈正相關(guān)，線性關(guān)系良好，線性方程為y=0.001 3x+0.270 4，決定系數(shù)為R2=0.999 1.當(dāng)黃連須多糖質(zhì)量濃度在0.031 2～2.000 0 mg/mL范圍內(nèi)時(shí)，由圖9可知黃連須多糖質(zhì)量濃度與鐵離子還原抗氧化能力呈線性關(guān)系，線性方程為y=0.056x+0.267 1，決定系數(shù)為R2=0.987 2.計(jì)算得黃連須多糖鐵離子還原抗氧化能力為(45.80±4.05)μmol Vc當(dāng)量/mg.

圖9 Fe3+還原抗氧化力 圖10 亞鐵離子螯合力 Fig.9 Fe3+ reducing antioxidant power Fig.10 Ferrous ion chelating power

2.2.6 黃連須粗多糖的亞鐵離子螯合能力 EDTA-2Na摩爾濃度與亞鐵離子螯合能力量效關(guān)系見圖10.由圖10可知,當(dāng)EDTA-2Na摩爾濃度范圍在11.62～185.90 μmol/L內(nèi)，亞鐵離子螯合能力與EDTA-2Na摩爾濃度線性關(guān)系良好，呈正相關(guān)，線性方程為y=0.479 7x+15.398，決定系數(shù)為R2=0.959 5.當(dāng)黃連須粗多糖質(zhì)量濃度在0.125～2.000 mg/mL范圍內(nèi)，亞鐵離子螯合能力與黃連須多糖質(zhì)量濃度具有線性關(guān)系，線性方程為y=24.469x+25.424，決定系數(shù)為R2=0.977 9(圖10).計(jì)算得黃連須粗多糖亞鐵離子螯合能力為(77.55±9.53)μmol EDTA-2Na當(dāng)量/mg.

3 討論

近年來(lái)，黃連多糖的研究越來(lái)越受到重視.呂秀梅等[16]采用效應(yīng)面法優(yōu)化黃連多糖的提取工藝，黃連多糖得率為35.43 mg/g；吳玉娟等[17]研究了3種提取液對(duì)黃連多糖進(jìn)行提取，在生藥中最高含量為1.42%；姜爽等[18]優(yōu)化了黃連多糖回流提取法的最優(yōu)工藝，平均得率為1.52%.上述研究均采用黃連塊莖為研究對(duì)象.作為黃連副產(chǎn)品的黃連須，目前研究主要集中在生物堿上[19-21]，而對(duì)黃連須多糖鮮有研究.本研究以黃連須為研究對(duì)象，優(yōu)化了黃連須多糖的提取工藝，多糖得率達(dá)(1.64±0.02)%，高于黃連多糖.

隨著自由基的深入研究，廣大學(xué)者致力于尋找天然的、無(wú)毒的抗氧化劑，多糖類化合物在此領(lǐng)域具有良好的活性.李云等[22]從羥自由基、超氧陰離子和DPPH自由基3個(gè)方面評(píng)價(jià)了4個(gè)不同組分的黃連多糖體外抗氧化活性，結(jié)果表明其具有一定的抗氧化活性.隋玉等[23]以IC50為計(jì)算方法，從DPPH自由基、ABTS自由基、羥自由基清除能力3個(gè)角度評(píng)價(jià)了元蘑多糖的體外抗氧化活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其對(duì)羥自由基清除能力IC50達(dá)到0.64 mg/mL.姜爽等[18]研究了黃連多糖的體外抗氧化活性，結(jié)果表明黃連多糖對(duì)超氧陰離子自由基、羥自由基和DPPH自由基具有一定的清除作用.本實(shí)驗(yàn)從6個(gè)體外抗氧化活性指標(biāo)全方位評(píng)價(jià)了黃連須多糖的體外抗氧化能力，結(jié)果表明，黃連須多糖具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性；且與目前多數(shù)以半抑制濃度(IC50)表示抗氧化能力大小相比，本實(shí)驗(yàn)采取陽(yáng)性對(duì)照摩爾當(dāng)量的表示方法可定量表示體外抗氧化活性的強(qiáng)弱，為定量添加抗氧劑黃連須多糖提供了數(shù)據(jù)參考.

由于黃連對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境的苛刻要求，且從栽培到收獲需3～4年，藥用黃連與市場(chǎng)關(guān)系一直處于供不應(yīng)求狀態(tài)，但在采收過(guò)程中黃連須根往往被藥農(nóng)遺棄，黃連須根被利用的程度很低，據(jù)統(tǒng)計(jì)湖北省利川市每年會(huì)有大約500 t的黃連須根被遺棄.研究結(jié)果顯示黃連須中的多糖含量高于黃連塊莖，且在體外抗氧化實(shí)驗(yàn)中證實(shí)黃連須多糖有較強(qiáng)的ABTS自由基清除率和羥自由基清除率，分別達(dá)到(101.63±10.62)μmol Vc當(dāng)量/mg、(0.47±0.17)mmol Vc當(dāng)量/mg，對(duì)DPPH自由基清除率、鐵離子還原抗氧化能力、亞鐵離子螯合力、總還原力也具有一定活性，說(shuō)明黃連須多糖具有較高的體外抗氧化活性.因此，該研究為黃連須的高效利用、變廢為寶、增加收益奠定了有力基礎(chǔ).