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    慢性淺表性胃炎不同證型大鼠琥珀酸脫氫酶活性與細(xì)胞色素C含量對(duì)比研究

    2015-03-03 00:48:35王麗李翌萌
    環(huán)球中醫(yī)藥 2015年3期
    關(guān)鍵詞:慢性淺表性胃炎

    王麗 李翌萌

    慢性淺表性胃炎不同證型大鼠琥珀酸脫氫酶活性與細(xì)胞色素C含量對(duì)比研究

    王麗李翌萌

    【摘要】目的探討慢性淺表性胃炎(chronic superficial gastritis, CSG)脾虛與濕熱證模型大鼠胃組織琥珀酸脫氫酶(succinate dehydrogenase,SDH)的活性及細(xì)胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的含量變化,從能量代謝的角度揭示CSG不同證候的實(shí)質(zhì)。方法用水楊酸鈉溶液灌胃法復(fù)制大鼠單純CSG模型,在此基礎(chǔ)上,用小承氣湯瀉下法及饑飽失常法復(fù)制脾虛CSG模型;用肥甘辛辣飲食法復(fù)制濕熱CSG模型,5周后,檢測(cè)大鼠胃組織琥珀酸脫氫酶活性及細(xì)胞色素C含量。結(jié)果SDH的含量為:濕熱CSG組最高,而脾虛CSG組最低。脾虛CSG組與濕熱CSG組分別與其他組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);胞漿中Cyt-C含量造模組均高于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01),其中脾虛CSG組最高,濕熱CSG組次之,兩組之間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論CSG不同證型大鼠胃組織SDH活性及Cyt-C含量的差異,提示同一疾病不同證型之間能量代謝狀態(tài)的不同,濕熱證相對(duì)于脾虛證能量代謝較亢進(jìn)。

    【關(guān)鍵詞】濕熱證;脾虛證;琥珀酸脫氫酶;細(xì)胞色素C;慢性淺表性胃炎

    慢性淺表性胃炎(chronic superficial gastritis, CSG)為消化系統(tǒng)的一種常見病,指胃黏膜呈慢性淺表性炎癥改變。有研究[1]發(fā)現(xiàn),脾虛證和濕熱證是其較多見的證型。琥珀酸脫氫酶(succinate dehydrogen-ase,SDH)是三羧酸循環(huán)中的一個(gè)重要的酶,在生物體內(nèi),能催化琥珀酸脫氫轉(zhuǎn)變成延胡索酸,同時(shí)釋放出大量能量供機(jī)體利用。相關(guān)研究[2]得出結(jié)論,SDH活性高低與細(xì)胞有氧代謝呈正相關(guān)。細(xì)胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)是線粒體呼吸鏈中傳遞電子的載體,研究[3]指出,如果Cyt-C功能障礙,則會(huì)引起線粒體呼吸鏈功能異常,導(dǎo)致ATP缺失,出現(xiàn)細(xì)胞死亡。本研究通過復(fù)制慢性淺表性胃炎大鼠脾虛證和濕熱證模型,檢測(cè)大鼠胃組織SDH活性及胞漿中細(xì)胞色素C的含量,以期從能量代謝的角度探討CSG脾虛證及濕熱證的實(shí)質(zhì)。

    1材料和方法

    1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    40只清潔級(jí)SD大鼠[合格證號(hào):SCXK(京)2007-0001],體質(zhì)量(170±20)g,雌雄各半。

    1.2分組與造模

    參考文獻(xiàn)[4-6]進(jìn)行造模。40只大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法選出10只,每天灌胃2 mL生理鹽水,持續(xù)5周,此為正常對(duì)照組;另30只每天灌胃5%水楊酸鈉溶液10 mL/kg·d,3周后,用隨機(jī)數(shù)字表法將其平均分為以下三組:?jiǎn)渭僀SG組、脾虛CSG組和濕熱CSG組。此三組繼續(xù)按體重灌胃5%水楊酸鈉溶液,在此基礎(chǔ)上,脾虛CSG組另予小承氣湯10 mL/kg·d灌胃,隔日半量飲食,自由飲水;濕熱CSG組大鼠可自由飲用200 g/L的蜂蜜水,隔日交替灌服10 mL/kg·d的白酒與油脂;而單純CSG組不加其他因素,2周后,造模結(jié)束。此造模過程共持續(xù)5周,3只大鼠由于灌胃不慎等原因死亡。

    1.3主要試劑

    SDH試劑盒(批號(hào):20101207)、考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒(批號(hào):20101207)、大鼠Cyt-C定量檢測(cè)試劑盒(批號(hào):20101207),均購自南京建成生物工程研究所。

    1.4主要儀器

    anthos 2010全自動(dòng)酶標(biāo)儀(奧地利安圖公司),TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司);勻漿器;BX51 Olympus 熒光顯微鏡(日本奧林巴斯公司);TGL-20M高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司);精密移液器;SHA-B恒溫振蕩器(常州國(guó)華電器有限公司);

    1.5指標(biāo)檢測(cè)

    1.5.1琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測(cè)大鼠處死后剖開腹腔,稱量一定量的胃組織,加9倍生理鹽水,制成10%的勻漿,2500 r/min離心10分鐘后,按試劑盒說明方法取上清液進(jìn)行SDH活性檢測(cè)。

    1.5.2細(xì)胞色素C(Cyt-C)檢測(cè)將準(zhǔn)確稱量的胃組織按重量體積比加入4倍的生理鹽水,制成20%的勻漿,2500 r/min離心10 分鐘后棄沉淀, 取上清液,再以10000 r/min低溫離心15 分鐘, 取上清液,上清液為胞漿,采用雙抗體兩步法夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進(jìn)行Cyt-C含量的測(cè)定。

    1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    2結(jié)果

    2.1大鼠胃組織SDH活性變化比較

    大鼠胃組織SDH活性比較:濕熱CSG組最高,而脾虛CSG組最低。各組數(shù)值經(jīng)Levene檢驗(yàn)方差齊,說明組間有差異,用LSD法進(jìn)行組間比較,得出以下結(jié)果:脾虛CSG組分別與其它三組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);濕熱CSG組分別與其他三組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);正常組與單純CSG組比較,差異未有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

    組別nSDH(U/mgprot)Cyt-C(nmol/L)正常組102.24±0.50ac62.57±7.01c單純CSG組101.84±0.22bc71.87±5.9cd濕熱CSG組82.84±0.48c74.93±8.97ce脾虛CSG組91.12±0.56b86.43±3.58

    注:與濕熱CSG組比較,aP<0.05,bP<0.01;與脾虛CSG組比較,cP<0.01;與正常組比較,dP<0.05,eP<0.01

    2.2各組大鼠胃組織Cyt-C含量變化比較

    大鼠胃組織胞漿中Cyt-C含量比較:造模三組均高于正常對(duì)照組。其中,濕熱CSG組最高,脾虛CSG組次之,各組經(jīng)Levene檢驗(yàn)方差齊,說明總體有差異,采用LSD法進(jìn)行多組間比較,得出以下結(jié)果:脾虛CSG組分別與其他三組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);正常組分別與單純CSG組及濕熱CSG組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);濕熱CSG組與單純CSG組比較,差異未有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

    3討論

    SDH是線粒體內(nèi)膜的結(jié)合酶,為線粒體的一種標(biāo)志酶,可為真核細(xì)胞線粒體和多種原核細(xì)胞需氧和產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子,SDH的活性增高,標(biāo)志著細(xì)胞內(nèi)能量即ATP生成增強(qiáng)[7]。

    實(shí)驗(yàn)中濕熱CSG組大鼠胃組織SDH活性增強(qiáng),提示機(jī)體能量生成增加,究其原因有可能與熱證時(shí)細(xì)胞線粒體氧化磷酸化功能亢進(jìn)有關(guān)。有研究[8]通過復(fù)制大鼠實(shí)熱證、虛熱證模型,發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞線粒體呼吸鏈SDH活力升高,后經(jīng)清熱中藥干預(yù)2周后,SDH活力有所恢復(fù),提示熱證與機(jī)體能量代謝的正相關(guān)性。

    實(shí)驗(yàn)中脾虛CSG組大鼠胃組織SDH活性明顯低于其他三組,其活性下降原因可能因?yàn)闄C(jī)體處于正氣不足的虛證狀態(tài),組織細(xì)胞代謝低下,而SDH活性亦隨著線粒體功能下降而降低。相關(guān)研究[9]用大黃復(fù)制大鼠脾虛模型,發(fā)現(xiàn)SDH含量明顯降低,與本研究結(jié)果相一致。

    Cyt-C是生物氧化呼吸鏈中重要的電子傳遞體,供應(yīng)細(xì)胞能量。正常情況下,位于線粒體內(nèi)、外膜之間,不能透過外膜。但當(dāng)組織缺氧等致細(xì)胞膜通透性增高時(shí),細(xì)胞色素C可以穿過外膜[10],進(jìn)入到胞漿中。亦有研究[11]表明在長(zhǎng)期脾虛狀態(tài)下,各器官線粒體DNA受到損害,機(jī)體能量代謝相應(yīng)減少。通過本研究可知:脾虛組大鼠的胃細(xì)胞胞漿內(nèi)Cyt-C含量最高,由此推測(cè)可能是由于脾虛,正氣不足,線粒體呼吸鏈功能異常,ATP缺乏,能量產(chǎn)生不足,細(xì)胞功能下降,導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性相對(duì)增高,Cyt-C透過線粒體外膜進(jìn)入胞漿,出現(xiàn)胞漿內(nèi)Cyt-C含量增高的變化。

    本研究顯示濕熱CSG組大鼠Cyt-C含量高于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但不及脾虛CSG組(P<0.01),與單純CSG組比較差異未有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),關(guān)于濕熱證大鼠細(xì)胞色素C活性研究的相關(guān)報(bào)道較少,尚未查到,其作用機(jī)制尚待進(jìn)一步探討,亦不排除本研究由于樣本含量、造模方法、實(shí)驗(yàn)手段、操作流程等出現(xiàn)的偏倚所致。

    相關(guān)研究[6]指出,大鼠脾虛狀態(tài)下肝臟線粒體琥珀酸脫氫酶、細(xì)胞色素氧化酶活性均顯著降低,說明線粒體受損,能量代謝出現(xiàn)障礙。本研究亦發(fā)現(xiàn),SDH活性及Cyt-C含量在濕熱CSG組及脾虛CSG組大鼠中存在差異,由此可推斷病同證不同,則其分子生物學(xué)指標(biāo)出現(xiàn)差異,這可能是證在微觀指標(biāo)上的體現(xiàn)。關(guān)于細(xì)胞色素C的釋放途徑、發(fā)生機(jī)制等,尚待進(jìn)一步探討。

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    (本文編輯:蒲曉田)

    ·論著·

    作者單位:210002 南京軍區(qū)南京總醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科

    Contrast of succinate dehydrogenase vitality and cytochrome C content in rats of different syndromes of chronic superficial gastritisWANGLi,LIYi-meng.NursingCollegeofLiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shenyang110847,China

    【Abstract】ObjectiveTo explore the mechanisms of different syndromes in terms of the energy metabolism by observing the activity changes of succinate dehydrogenase (SDH)and the content changes of cytochrome C (Cyt-C) in rats with chronic superficial gastritis (CSG) of spleen-deficiency syndrome and damp-heat syndrome. MethodsCSG rat model was established by the intragastric administration of sodium salicylate solution. CSG rat model with spleen-deficiency syndrome was established by Xiaochengqi Decoction-induced purgation and eating disorders. CSG rat model with damp-heat syndrome was established by feeding fat, sweet and spicy diet. Five weeks later, SDH activity and Cyt-C content of gastric tissue were determined. ResultsThe activity of SDH in damp-heat CSG group was the highest of all, but which in spleen-deficiency CSG group was the lowest . The activity of SDH was obviously changed in damp-heat CSG group also in spleen-deficiency CSG group in comparison with the other three groups, respectively.(P<0.05 or P<0.01). The content of Cyt-C in the three model groups was higher than which in normal group(P<0.05 or P<0.01). The content of Cyt-C in spleen-deficiency CSG group was the highest of all, with the damp-heat CSG group secondarily. There was a significantly content difference between the two groups (P<0.01) . ConclusionThe difference in the SDH activity and Cyt-C content of CSG rat with different syndromes , revealed the different energy metabolism of different syndromes for the same disease, the energy metabolism of damp-heat symdrome was higher than which of spleen-deficiency syndrome.

    【Key words】Damp-heat syndrome;Spleen-deficiency syndrome;Succinate dehydrogenase;Chronic superficial gastritis

    作者簡(jiǎn)介:趙凌杰(1966- ),女,博士,副主任醫(yī)師,研究生導(dǎo)師。研究方向:中西醫(yī)結(jié)合治療風(fēng)濕免疫。E-mail:zhaolingjie68@163.com

    基金項(xiàng)目:南京軍區(qū)南京總醫(yī)院科研基金(2013056)

    (收稿日期:2014-03-08)

    Corresponding author:WANG Li,E-mail: wltcm@126.com

    【中圖分類號(hào)】R573.3+1

    【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

    doi:10.3969/j.issn.1674-1749.2015.03.012

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