甘加藏羊肝臟細胞組織形態(tài)結構觀察

王雪艷，漫貴貴，朱倩鋒，趙文強，柴君臣，姚鋒鋒，何玉琴，趙 禹

（甘肅農業(yè)大學 生命科學技術學院，甘肅 蘭州 730070）

藏羊，又稱藏系綿羊，屬我國三大原始綿羊品種之一[1]。主要生活在青藏高原地區(qū)，甘肅和青海是其主要棲息地[2]。藏羊種類繁多，依據生態(tài)環(huán)境、生產特性和經濟效益，可將其分為高原型、山谷型和歐拉型3大類。在甘肅，藏羊的主體為高原型，占比達90%以上，主要分布在高寒牧區(qū)[3]。甘加藏羊是藏羊的一個優(yōu)良地方品種，也是中國國家地理標志產品，因其主產區(qū)位于甘肅省甘南州夏河縣甘加鎮(zhèn)而命名。由于甘加藏羊主要分布在高寒牧區(qū)，采樣較困難，所以目前關于甘加藏羊的研究資料非常有限，而對其各器官組織結構的研究尚未見報道。因此，本文擬通過石蠟切片技術對甘加藏羊肝臟組織的形態(tài)結構進行研究。

肝臟是動物體內新陳代謝的重要器官，它含有多種與生物轉化作用相關的酶類，有利于動物體內外的某些代謝產物、毒物和藥物等非營養(yǎng)性物質從腎臟和膽道排出，在體內起著去除毒素、儲存糖原、分泌膽汁、合成蛋白質等作用。了解甘加藏羊肝臟細胞組織的結構，有助于對反芻動物肝臟生理功能進行研究，對進一步提高甘加藏羊的養(yǎng)殖水平具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

2020年5月在甘肅省甘南州夏河縣甘加鎮(zhèn)屠宰場（平均海拔4 100 m）通過齒齡鑒別法隨機選擇年齡在2～3歲、營養(yǎng)良好的未孕雌性成年甘加藏羊4只，剖殺試驗羊，取其肝臟用于試驗材料。

1.2 主要儀器設備

光學顯微鏡、組織包埋機、電熱恒溫鼓風干燥箱（DHG-9140型）、精密輪轉半自動螺旋切片機、攤片機、烤片機、圖像分析軟件等。

1.3 主要試劑

蘇木精染液、伊紅染液（上海鼎國生物技術有限公司）；鹽酸酒精[4]（湖南艾佳生物科技股份有限公司）；酒精、二甲苯、中性樹膠（均購自北京索萊寶科技有限公司）。

1.4 肝臟形態(tài)學測量

剖殺試驗羊取出肝臟后，大體解剖觀察肝臟外部形態(tài)特點并對肝臟進行測量。

1.5 肝臟組織石蠟切片制備及觀察

將選取的甘加藏羊肝臟進行解剖，每只羊選肝實質各切取兩塊約1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm的組織塊，并編號進行標記，然后將所有組織塊迅速投入4%多聚甲醛溶液中固定。取固定好的組織數塊，使用常規(guī)梯度酒精脫水后用雙刃刀片切成厚1 cm、寬0.3～0.5 cm的薄片，8片左右，用紗布包裹薄片，并放入有紗布封口的燒杯中進行洗滌。經脫水透明、組織浸蠟、包埋等步驟制作組織蠟塊，待蠟塊凝固，修正蠟塊，切片（注意刀的傾角不宜過大，也不宜過小，一般使切片刀的刀口與石蠟的平面保持在10～15°為宜[5]），貼片以及烤片。將切片脫蠟染色，脫水透明，最后封片，在光學顯微鏡下觀察。

1.6 數據分析

用平均值±標準差來表示肝臟的形態(tài)學測量結果，用SPSS22.0軟件進行數據統(tǒng)計分析，P＜0.05和P＜0.01分別表示統(tǒng)計學差異顯著和極顯著，用one-way ANOVA或Student’s t-test比較組間均值的差異。

2 結果與分析

2.1 肝臟形態(tài)學測量結果

甘加藏羊肝臟外觀呈紅褐色，質軟而脆。肝臟形態(tài)呈不規(guī)則楔形，右側鈍厚而左側偏窄，上面突起渾圓，與膈肌接觸，下面較扁平，與胃、十二指腸、膽囊和結腸相鄰。肝臟有一定的活動度，可隨體位的改變和呼吸而上下移動。按解剖學結構主要分四葉，分別是左葉、右葉、尾葉和方葉（見圖1）。

圖1 甘加藏羊肝臟形態(tài)

肝臟四葉之間界限明顯，大小不等。右葉（長12.3 cm、寬13.6 cm）整體比左葉（長10.7 cm、寬11.3 cm）大，對每個小葉進行測量，結果見表1。

表1 甘加藏羊肝臟形態(tài)測量結果

2.2 肝臟組織形態(tài)觀察

甘加藏羊肝臟組織結構由肝小葉和門管區(qū)構成（見圖2A）。肝小葉包含肝細胞索（肝板）、中央靜脈、膽小管和肝竇，是肝臟的基本結構和功能單位（見圖2B）。肝小葉數目較多、體積偏小、呈不規(guī)則的多邊形，小葉間結締組織不發(fā)達，分界不明顯。其中肝板是由肝細胞呈行排列成的不規(guī)則的、相互連接的板狀結構。肝細胞界限清晰，呈多邊形，規(guī)則地排列成肝細胞索，細胞核較大且核仁明顯。肝血竇位于肝板之間，大小不等，細胞核扁平，凸向竇腔。此外，在肝血竇之間還散在枯否氏細胞（見圖2C），其胞體較大，形狀不規(guī)則，胞核大而圓。小葉中心為中央靜脈，其管壁不明顯，只由一層內皮細胞和少量的結締組織構成。

門管區(qū)（見圖2D）由小葉間動脈、小葉間靜脈和小葉間膽管3種伴行的管道形成的結締組織構成。小葉間動脈管腔較小，管壁較厚。小葉間靜脈管腔相對較大，管壁較薄。小葉間膽管的管腔狹小，呈圓形，由于細胞核大且著色深，故呈藍色外觀。

圖2 甘加藏羊肝臟組織形態(tài)結構

3 討論

肝臟存在于所有脊椎動物中，通常是動物體內最大的腺體，其功能很多，如參與多種營養(yǎng)物質的代謝和儲存、分泌膽汁、解毒、造血和調節(jié)激素等[6]，同時也是動物檢疫中常見的病變組織器官。肝臟的形式在不同物種中有較大差異，在很大程度上取決于周圍器官的形狀和排列。在大多數物種中，肝臟可分為左葉和右葉。

甘加藏羊肝臟組織比較發(fā)達，其表面覆蓋漿膜，延伸入肝實質的結締組織將肝臟分為若干個肝小葉。肝小葉結構中的肝板、肝竇和膽小管以中央靜脈為中心呈輻射分布[7]。中央靜脈位于肝小葉中央，管壁為單層扁平上皮，因與周圍的肝血竇相通而管壁不完整；肝板由肝細胞單層排列構成，肝細胞呈多邊形，核大而圓，位于細胞中央，有的可見雙核；肝血竇竇壁緊貼肝細胞索，由內皮細胞構成，細胞核扁圓形，染色深[8]。門管區(qū)的小葉間靜脈屬于門靜脈分支，管腔較大而不規(guī)則，內皮外有散在平滑肌纖維分布；小葉間動脈屬肝動脈分支，內皮外可見環(huán)形平滑肌層；小葉間膽管屬肝管分支，管壁為單層立方上皮，細胞排列整齊，細胞質染色淺，細胞核呈圓形。甘加藏羊肝小葉結締組織不發(fā)達，肝小葉區(qū)分不明顯，而門管區(qū)較明顯。不同家畜的肝小葉間結締組織發(fā)達程度因種類不同而存在差異，豬、貓和駱駝的小葉間結締組織特別發(fā)達，肝小葉輪廓清晰，而其他動物小葉間結締組織不發(fā)達，肝小葉分界不明顯[9]。

前人對動物肝臟的研究共揭示了3種肝細胞排列方式，即肝細胞呈團塊狀聚集排列、單層或兩層肝細胞呈索狀結構排列。一般來說，肝細胞索的細胞組成和排列方式的差異與動物種類有一定聯(lián)系，如哺乳動物的肝細胞索往往是由單層細胞排列構成，而鳥類的肝細胞索則由兩層細胞排列構成。本研究中的甘加藏羊肝細胞符合上述動物肝細胞的排列規(guī)律，為單排索狀結構。肝臟血竇內血液的充盈程度會使肝細胞索產生一定形變。有研究表明，哺乳動物和鳥類的肝細胞索結構差異可能和肝臟功能密切相關[10]。哺乳動物在消化期可通過神經和體液等途徑刺激膽汁的分泌，從而實現對多種營養(yǎng)物質的消化和吸收，該過程中大量消化液的分泌需要肝臟提供足夠的血液供給，血竇內的血液不斷充盈，擠壓肝細胞使其更加趨向于單層排列。而鳥類對食物的消化主要依賴于嗉囊中的分泌液，對肝臟中的消化液依賴程度低，因此肝臟對血液的需求相對哺乳動物較低，從而具有兩層細胞構成的肝細胞索[10]，這體現出組織器官結構與其發(fā)揮的生理功能密切相關。

本試驗以甘加藏羊為研究對象，對其肝臟細胞組織結構與特征進行了觀察和研究，揭示了甘加型藏羊在高寒牧區(qū)生長環(huán)境下肝臟的組織結構特點，為將來肝臟中環(huán)境適應性相關功能基因篩選以及優(yōu)良地方品種選育提供了組織學理論依據。