探討煤工塵肺合并非小細(xì)胞肺癌患者中P53基因蛋白的表達(dá)

張建紅，化靜

（北京京煤集團(tuán)總醫(yī)院，北京 102300）

煤工塵肺是一種由于過量吸入塵土而形成的肺部疾病，多發(fā)于長時(shí)間處于多灰塵環(huán)境的人群中。煤工塵肺持續(xù)發(fā)展極易引發(fā)多種并發(fā)癥，其中肺癌是最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，嚴(yán)重威脅患者的生命健康和安全[1]。臨床表明，多種腫瘤疾病發(fā)生時(shí)，機(jī)體內(nèi)的P53 基因會(huì)出現(xiàn)突變、缺失或者失活情況，形成肺癌時(shí)，機(jī)體內(nèi)具有較高的P53 基因蛋白表達(dá)陽性率，普遍超過50%[2]。因此，檢測P53基因蛋白表達(dá)情況是臨床診斷煤工塵肺合并非小細(xì)胞肺癌疾病的重要依據(jù)，同時(shí)，為臨床制定具有針對性的治療方案提供科學(xué)依據(jù)[3]。由于現(xiàn)階段臨床上關(guān)于P53 基因蛋白表達(dá)報(bào)道較少，基于此，本研究旨在分析煤工塵肺合并非小細(xì)胞肺癌患者中P53 基因蛋白的表達(dá)情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017 年1 月至2019 年1 月本院收治的煤工塵肺合并非小細(xì)胞肺癌患者64 例作為研究組，其中患者的煤工塵肺符合《GBZ 70-2015 職業(yè)性塵肺病的診斷》中的煤工塵肺診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)過專業(yè)的煤工塵肺鑒定小組確診。另選取同期本院收治的按確診時(shí)間順序符合入組條件的前64 例非職業(yè)病相關(guān)的男性非小細(xì)胞肺癌患者作為對照組。研究組年齡50～75 歲，平均年齡（62.5±1.8）歲；接塵時(shí)間 4～30 年，平均接塵時(shí)間（16.0±1.7）年；煤工塵肺分期：Ⅰ期29 例，Ⅱ期21 例，Ⅲ期14 例；并發(fā)肺癌病理組織學(xué)類型：鱗狀細(xì)胞癌35 例，腺癌29 例。對照組年齡49～74 歲，平均年齡（61.5±1.6）歲；肺癌病理組織學(xué)類型：鱗狀細(xì)胞癌34 例，腺癌30 例；全部為無接塵史，且無肺部職業(yè)病。兩組臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性?；颊呒凹覍倬炇鹬橥鈺?，本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法 腫瘤個(gè)體化基因檢測采用高通量測序技術(shù)對患者的樣本（組織）進(jìn)行DNA 分子序列深度測序，將研究組與對照組肺癌組織標(biāo)本的蠟塊組織切成10 μm 的薄片5～10片，取樣品加入反應(yīng)體系中，94 ℃預(yù)變性5 min，擴(kuò)增條件為94 ℃ 45 s，55 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，擴(kuò)增35個(gè)循環(huán)后72 ℃延伸5 min。取擴(kuò)增產(chǎn)物5μL加入5μL上樣緩沖液，在94 ℃保溫5 min 后滿上將其置于冰浴中5 min。將處理好的標(biāo)本加樣于8%非變性聚丙烯酰胺凝膠中，200 V電壓電泳4 h。電泳結(jié)束后用P53 即用型SABC 試劑盒（武漢博士德公司）實(shí)施染色，DAB顯色，利用Harris蘇木素進(jìn)行復(fù)染。檢測結(jié)果為：細(xì)胞核內(nèi)存在棕黃色顆粒。顯色情況，陰性：腫瘤細(xì)胞顯色低于10%；陽性：腫瘤細(xì)胞核顯色超過10%。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組患者P53基因蛋白表達(dá)、不同病理類型中P53基因蛋白表達(dá)情況；兩組患者P53基因蛋白表達(dá)情況與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系；兩組P53基因蛋白表達(dá)情況與術(shù)后生存期的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以“”表示，行t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組P53 基因蛋白表達(dá)陽性率比較 研究組P53 基因蛋白表達(dá)陽性率明顯高于對照組（χ2=5.165，P＜0.05），見表1。

表1 P53基因蛋白表達(dá)結(jié)果Table 1 P53 gene protein expression results

2.2 不同病理類型中P53 基因蛋白表達(dá)情況 研究組的鱗狀細(xì)胞癌的P53 基因蛋白表達(dá)陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），而研究組的腺癌P53基因蛋白表達(dá)陽性率明顯低于對照組（P＜0.05），見表2

表2 不同病理類型中P53基因蛋白表達(dá)情況（%）Table 2 Expression of P53 gene protein in different pathological types(%)

2.3 P53 基因蛋白表達(dá)情況與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 研究組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），研究組無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率明顯低于對照組（P＜0.05）；兩組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率（P＜0.05），見表3。

表3 P53基因蛋白表達(dá)情況與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系Table 3 Relationship between P53 gene protein expression and lymph node metastasis

2.4 P53基因蛋白表達(dá)情況與生存期的關(guān)系 治療后，機(jī)體內(nèi)P53 基因發(fā)生突變的陽性率持續(xù)降低。手術(shù)治療的生存期明顯長于放化療、靶向、免疫等治療方式的生存時(shí)間。研究組生存時(shí)間≤18個(gè)月的陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），研究組生存時(shí)間＞18 個(gè)月的陽性率明顯高于對照組（P＜0.05）；兩組患生存時(shí)間≤18 個(gè)月的陽性率明顯高于生存時(shí)間＞18個(gè)月的陽性率（P＜0.05），見表4。

表4 P53基因蛋白表達(dá)情況與生存期的關(guān)系（%）Table 4 Relationship between p53 gene protein expression and survival time(%)

3 討論

野生型P53是一類特殊的抑癌基因，突變型P53則喪失了抑癌功能，同時(shí)，對野生型P53 活性進(jìn)行抑制或使其徹底喪失活性，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)的細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化和癌變[4]。煤工塵肺組病理組織學(xué)類型可依據(jù)P53 基因蛋白陽性表達(dá)情況分為鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、小細(xì)胞癌和細(xì)支氣管肺泡癌等多種類型。大量臨床研究表明，煤工塵肺合并肺癌生存期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與P53基因蛋白陽性表達(dá)均密切相關(guān)，因?yàn)槊汗m肺普遍合并其他疾病發(fā)生，造成患者機(jī)體的抵抗力持續(xù)降低，同時(shí)機(jī)體自身的肺呼吸功能不斷降低，實(shí)施肺葉手術(shù)切除后，患者的呼吸代償功能得到較大程度的限制，同時(shí)基因蛋白陽性表達(dá)過高[5-6]。有研究表明，P53基因突變對患者的生存時(shí)間有較大影響，基因蛋白突變陽性患者的生存期較短，因此，臨床上檢測P53基因蛋白的表達(dá)具有重要意義[7]。

長期處于粉塵環(huán)境下可增加多種致癌物質(zhì)的產(chǎn)生，促進(jìn)SiO物質(zhì)處于游離狀態(tài)并造成致癌物質(zhì)大量聚集，進(jìn)一步發(fā)展為肺癌[8]。本研究結(jié)果顯示，研究組P53 基因蛋白表達(dá)陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），且研究組鱗狀細(xì)胞癌的P53基因蛋白表達(dá)陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），而研究組腺癌P53 基因蛋白表達(dá)陽性率明顯低于對照組（P＜0.05），說明長期接受粉塵以及多種化學(xué)物質(zhì)的局部刺激可以明顯增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。另外，說明不同病理類型中P53基因蛋白表達(dá)存在明顯差異，為區(qū)分是否存在塵肺病提供重要的參考依據(jù)。煤工塵肺合并肺癌組患者長時(shí)間處于礦區(qū)井下環(huán)境中，其氡氣含量和內(nèi)照射劑量持續(xù)增加，臨床研究表明，氡及其子體可以明顯提高患者肺癌的發(fā)生率。本研究結(jié)果顯示，研究組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），研究組無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率明顯低于對照組（P＜0.05）；兩組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率（P＜0.05）；研究組生存時(shí)間≤18 個(gè)月的陽性率明顯高于對照組（P＜0.05），研究組生存時(shí)間＞18 個(gè)月的陽性率明顯高于對照組（P＜0.05）；兩組生存時(shí)間≤18個(gè)月的陽性率明顯高于生存時(shí)間＞18 個(gè)月的陽性率（P＜0.05），說明機(jī)體內(nèi)P53 陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存期呈正相關(guān)，P53 基因蛋白表達(dá)是促使肺癌轉(zhuǎn)移、決定患者預(yù)后中的重要因素。

綜上所述，檢測煤工塵肺合并NSCLC 肺癌患者機(jī)體內(nèi)的P53基因蛋白表達(dá)，其檢測結(jié)果可反映機(jī)體內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系以及生存期，為煤工塵肺合并NSCLC 肺癌的臨床綜合診斷和臨床治療提供重要的參考依據(jù)。