不同儲(chǔ)存時(shí)間血液制備的洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量分析

李軍娥，周麗，招淑文

（1.佛山市中心血站成分科，廣東 佛山 528000；2.佛山市中心血站質(zhì)控科，廣東 佛山 528000）

臨床治療各類疾病的方法中，輸血治療是常用手段之一，隨著醫(yī)療技術(shù)不斷發(fā)展和進(jìn)步，成分輸血被廣泛應(yīng)用于臨床[1]。洗滌紅細(xì)胞指的是采取氯化鈉溶液洗滌血液后，清除血漿中血小板、白細(xì)胞等成分，有利于預(yù)防非溶血性的高熱情況發(fā)生，同時(shí)，也可預(yù)防過(guò)敏情況發(fā)生，進(jìn)而減少或避免輸血過(guò)程中發(fā)生的病毒傳播事件，提高輸血治療的臨床安全性，主要應(yīng)用于高鉀血癥、自身免疫性溶血性貧血和血漿蛋白過(guò)敏反應(yīng)等疾病治療。在洗滌紅細(xì)胞中，原紅細(xì)胞組織具有較高保存率，可達(dá)70.0%，而保存時(shí)間較短，有研究顯示，不同儲(chǔ)存時(shí)間的血液制備洗滌紅細(xì)胞的效果具有一定差異[2]。本研究隨機(jī)采取CPDA-1 保養(yǎng)液處方制備的60 袋去白懸浮紅細(xì)胞，研究不同儲(chǔ)存時(shí)間對(duì)血液制備洗滌血細(xì)胞的效果差異，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年6月至2020年5月本院制備的400 mL CPDA-1 保養(yǎng)液的全血制備的60 袋2 U 去白懸浮紅細(xì)胞。

1.2 方法

1.2.1 儀器及試劑 0.9%氯化鈉溶液[費(fèi)森尤斯卡比（廣州）醫(yī)療用品有限公司，批號(hào)：85PE11AC00，規(guī)格：250 mL∶2.25 g]，LX112054全自動(dòng)血液成分分離機(jī)（深圳普特生物股份有限公司）、一次性使用塑料血袋（四川南格爾生物科技有限公司，批號(hào)：200401）、PC203型分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）、HITACHR7大容量低溫離心機(jī)（日本）、無(wú)菌接駁機(jī)、高頻熱合機(jī)、全自動(dòng)血液分析儀、血漿游離血紅蛋白試劑盒、微量總蛋白測(cè)定試劑盒、電子天秤。

1.2.2 制備及洗滌紅細(xì)胞 隨機(jī)采集CPDA-1 保養(yǎng)液劑量為400 mL的全血制備為2 U去白懸浮紅細(xì)胞60袋放置于儲(chǔ)血專用冰箱中，設(shè)置溫度為（4±2）℃，取存儲(chǔ)期第1、2、3、4、5周的去白懸浮紅細(xì)胞并確保未出現(xiàn)破損等情況，各12 袋。待用洗滌溶液聯(lián)袋提前冷凝放置保存，確保溶液外觀正常，且未出現(xiàn)破損或滲漏情況，并處于有效期內(nèi)。采用無(wú)菌接合機(jī)進(jìn)行無(wú)菌接合聯(lián)通待洗滌的去白懸液紅細(xì)胞袋導(dǎo)管以及洗滌溶液聯(lián)袋，再將其轉(zhuǎn)移至紅細(xì)胞袋內(nèi)，液體劑量約200 mL，將導(dǎo)管夾緊進(jìn)行混勻操作，按照制備洗滌紅細(xì)胞的離心程序操作，設(shè)置轉(zhuǎn)速為3 500 r/min，保持一定溫度。緩慢且平穩(wěn)的取出血袋，將其垂直放入分漿夾中，再向空袋裝上清液并夾緊導(dǎo)管。經(jīng)上述步驟離心處理洗滌3 次后加入約100 mL 紅細(xì)胞保存液和0.9%氯化鈉溶液即可。混勻洗滌后紅細(xì)胞，注滿配血管，熱合留后取40 cm配血管進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 檢測(cè)方法 將洗滌后的紅細(xì)胞樣本置于冰箱中儲(chǔ)存，設(shè)置溫度為4 ℃，為避免留取的血樣存儲(chǔ)時(shí)間差異而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不同，均于洗滌1 h后檢測(cè)；采用全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)計(jì)算各項(xiàng)指標(biāo)；應(yīng)用相關(guān)試劑盒檢測(cè)游離血紅蛋白（FHb）濃度，后測(cè)定上清液蛋白質(zhì)濃度，并檢測(cè)不同存儲(chǔ)時(shí)間的制備原料去白懸浮紅細(xì)胞的溶血率。

1.3 觀察指標(biāo) 比較不同儲(chǔ)存時(shí)間血液制備的洗滌紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果，包括蛋白質(zhì)、血紅蛋白、溶血率和原料血溶血率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“”表示，行t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

第5周血紅蛋白含量明顯低于第1、2、4周（P＜0.05），其他各時(shí)間點(diǎn)血紅蛋白含量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；第3周和第4周的上清蛋白質(zhì)含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他各時(shí)間點(diǎn)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；第1周與第2周溶血率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，第1周、第2周與其他各時(shí)間點(diǎn)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），第3周、第4周和第5周溶血率兩兩比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；第5周出現(xiàn)1例洗滌紅細(xì)胞溶血率為0.85%，超出質(zhì)量控制要求；第1周與第2周原料血溶血率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，第1 周、第2 周原料血溶血率與其他各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同儲(chǔ)存時(shí)間血液制備的洗滌紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果（）

表1 不同儲(chǔ)存時(shí)間血液制備的洗滌紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果（）

注：Hb，血紅蛋白。與第1周比較，aP＜0.05；與第2周比較，bP＜0.05；與第3周比較，cP＜0.05；與第4周比較，dP＜0.05

檢測(cè)項(xiàng)目上清蛋白質(zhì)含量（g）Hb含量（g）溶血率（%）原料血溶血率（%）第5周0.72±0.30abcd 40.05±4.54ad 0.43±0.19ab 0.42±0.20abcd第1周0.39±0.21 44.02±6.10 0.10±0.08 0.05±0.06第2周0.51±0.19a 45.02±9.25 0.12±0.09 0.04±0.05第3周0.52±0.21ab 40.63±12.09 0.21±0.12ab 0.19±0.08ab第4周0.62±0.28ab 43.22±4.16 0.25±0.13ab 0.27±0.17ab

3 討論

輸血治療的臨床應(yīng)用率較高，成分輸血更被廣泛推廣，洗滌紅細(xì)胞在臨床上主要應(yīng)用于陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、高鉀血癥、新生兒溶血病和肝腎功能障礙需輸血等疾病治療，療效顯著[3]。但有研究顯示，洗滌紅細(xì)胞的質(zhì)量極易受到儲(chǔ)存時(shí)間差異的影響，應(yīng)選取最佳的儲(chǔ)存時(shí)間，以最大限度保障洗滌紅細(xì)胞的質(zhì)量[4]。在保養(yǎng)液內(nèi)儲(chǔ)存血液的過(guò)程中，可能會(huì)出現(xiàn)紅細(xì)胞受損情況，導(dǎo)致洗滌紅細(xì)胞制備可能受到一定程度的影響。有研究顯示，當(dāng)血液保存時(shí)間超過(guò)14 d 后，應(yīng)用全血制備的洗滌紅細(xì)胞就會(huì)發(fā)生異常形態(tài)改變，產(chǎn)生一種棘形紅細(xì)胞，進(jìn)而發(fā)生溶血情況，影響洗滌紅細(xì)胞的臨床治療效果[5]。

本研究結(jié)果顯示，隨著血液儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，其制備的洗滌紅細(xì)胞溶血率呈上升趨勢(shì)，其中第1周和第2周的溶血率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而第1周、第2周與其他各時(shí)間點(diǎn)溶血率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；第1周和第2周的原料血溶血率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而第1周、第2周與其他各時(shí)間點(diǎn)原料血溶血率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；第5周溶血率相較于第4周明顯上升，且出現(xiàn)1例溶血率高達(dá)0.85%，超過(guò)國(guó)家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)為＜RBC 總量的0.8%。FHb 含量上升提示血管內(nèi)溶血情況的發(fā)生或發(fā)展，因此，該項(xiàng)指標(biāo)有利于反映紅細(xì)胞制品質(zhì)量，血液制品中尤其是洗滌紅細(xì)胞中FHb含量過(guò)高，可導(dǎo)致患者出現(xiàn)急性腎功能衰竭，提高病死率[6-7]。有研究證實(shí)，不同儲(chǔ)存時(shí)間血液對(duì)其制備洗滌紅細(xì)胞的FHb含量具有較大影響，但對(duì)K+并無(wú)明顯影響，原因可能是洗滌紅細(xì)胞制備過(guò)程中對(duì)紅細(xì)胞滲透壓產(chǎn)生影響，進(jìn)而導(dǎo)致紅細(xì)胞溶血增加[8]。本研究結(jié)果還顯示，除第4周和第5 周、第1 周和第5 周的血紅蛋白含量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其他各時(shí)間點(diǎn)血紅蛋白含量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示紅細(xì)胞洗滌應(yīng)用0.9%的氯化鈉溶液并未對(duì)其Hb含量產(chǎn)生重要影響。此外，除第3周和第4周的上清蛋白質(zhì)含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他各時(shí)間點(diǎn)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。采取雙縮脲發(fā)對(duì)上清蛋白質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，若想達(dá)到要求需使用非常靈敏的儀器；因此，檢測(cè)上清液中的微量蛋白質(zhì)應(yīng)用鄰苯三酚紅鉬絡(luò)合顯色法具有良好效果，可提高結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性[9-10]。

綜上所述，血液制備洗滌紅細(xì)胞過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)格把握血液儲(chǔ)存時(shí)間，應(yīng)＜14 d。