基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接研究苦參治療慢性乙型肝炎的作用機(jī)制＊

李曉斌，曹 旭，糟小賓，李 碩，陳賀寧，朱 順，李小科＊＊，葉永安＊＊

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 北京100700；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院 北京100700）

乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus，HBV）感染是全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。HBV感染相關(guān)疾病，如肝硬化（Cirrhosis）、肝癌（Hepatocellular carcinoma，HCC），嚴(yán)重威脅人類(lèi)的生命[1]。據(jù)估計(jì)，目前我國(guó)慢性HBV感染者約7000萬(wàn)例，其中慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）患 者 約2000萬(wàn)-3000萬(wàn)例[2]。當(dāng)前尚缺乏根除HBV共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）的方法，因此CHB的治療以達(dá)到“功能性治愈”為目標(biāo)?？共《救詾槟壳爸委烠HB的有效手段，常用藥物包括核苷/核苷酸類(lèi)似物（NAs）及聚乙二醇化干擾素（PEG-IFN），但因耐藥風(fēng)險(xiǎn)及嚴(yán)重副反應(yīng)的存在限制其臨床療效[3]。中醫(yī)藥以其整體觀念、辨證論治的特點(diǎn)在CHB治療上顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，可發(fā)揮抑制病毒復(fù)制、抗纖維化、調(diào)節(jié)免疫等諸多療效。本團(tuán)隊(duì)前期的研究觀察到中藥聯(lián)合恩替卡韋可提高HBeAg陽(yáng)性CHB患者的HBeAg清除率[4]，并降低其N(xiāo)As停藥后臨床復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)[5]，充分證明中藥治療CHB的潛在療效，具有極大的研究空間。

中藥苦參（Radix Sophorae Flavescentis），味苦性寒，具有清熱燥濕，殺蟲(chóng)，利尿之功效?？鄥⒌幕钚猿煞秩缈鄥⑺?、氧化苦參堿等可抗病毒、抗炎、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，從多方面發(fā)揮治療CHB的作用[6]。目前關(guān)于苦參類(lèi)制劑治療CHB已開(kāi)展大量研究，基于臨床癥狀及體征、血清學(xué)指標(biāo)[7]和免疫學(xué)指標(biāo)[8]的觀察均提示苦參的活性成分可有效干預(yù)CHB的發(fā)生發(fā)展。然而，目前的研究多局限于通過(guò)某單一活性成分作用于某靶點(diǎn)或通路來(lái)論述其機(jī)制，未體現(xiàn)多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn)，也未從整體角度闡釋苦參治療CHB的作用機(jī)制。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)由Hopkins提出[9]，具有整體性、系統(tǒng)性的特點(diǎn)，與中醫(yī)“整體觀”一致。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與中醫(yī)藥研究相結(jié)合，科學(xué)地闡明“藥物-靶點(diǎn)-疾病”關(guān)系，有助于中藥的系統(tǒng)研發(fā)[10]。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，采用分子對(duì)接技術(shù)，篩選苦參治療CHB的活性成分，預(yù)測(cè)其潛在分子機(jī)制，初步闡釋苦參治療CHB的有效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制，為系統(tǒng)研究開(kāi)發(fā)苦參提供參考。

1 材料與方法

1.1 苦參活性成分與潛在靶點(diǎn)篩選

通過(guò)中醫(yī)藥系統(tǒng)藥理學(xué)平臺(tái)（TCMSP）（https://tcmspw.com/tcmsp.php）檢索苦參的活性成分，根據(jù)口服利用度（oral bioavailability，OB）≥30%且類(lèi)藥性（drug-likeness，DL）≥0.18的2個(gè)藥物吸收、分布、代謝、排泄屬性值（ADME）進(jìn)行活性成分初步篩選，獲得活性化合物及其作用靶點(diǎn)。將所得靶點(diǎn)在Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.uniprot.org）進(jìn)行規(guī)范。

1.2 慢性乙型肝炎的相關(guān)靶點(diǎn)篩選

以“chronic hepatitis B”為關(guān)鍵詞，檢索Gene Cards數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.genecards.org）、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.omim.org）中與慢性乙型肝炎相關(guān)的靶點(diǎn)，合并后刪除重復(fù)值。

1.3 成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

獲得苦參活性成分靶點(diǎn)及疾病相關(guān)靶點(diǎn)后，取兩者交集并進(jìn)行藥物成分靶點(diǎn)-CHB疾病靶點(diǎn)映射得到苦參治療CHB的潛在作用靶點(diǎn)。用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建“相關(guān)活性成分-潛在作用靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行可視化。利用Cytoscape的內(nèi)置工具“network analyze”插件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)分析，獲得有效成分及靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，包括連接度（Degree）、介度（Betweenness）及緊密度（Closenesss）等。選取連接度≥中位數(shù)為關(guān)鍵活性成分，連接度≥2倍中位數(shù)為關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.4 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

將苦參治療CHB的潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)定種屬為“Homo sapiens”，蛋白互作評(píng)分≧0.04，獲取其相互作用關(guān)系，刪去無(wú)相互作用的靶點(diǎn)。R軟件可進(jìn)行生物信息分析并對(duì)結(jié)果可視化。通過(guò)R 3.6.2，計(jì)算PPI網(wǎng)絡(luò)中各靶點(diǎn)的連接度，連接度越大，與其相互作用的靶點(diǎn)個(gè)數(shù)越多，選取連接度≥2倍中位數(shù)的靶點(diǎn)進(jìn)行可視化。將其與1.3所得關(guān)鍵靶點(diǎn)取交集得到苦參治療CHB的核心靶點(diǎn)[11]。核心靶點(diǎn)具有同時(shí)與活性成分及其他靶點(diǎn)互作關(guān)系密切的特點(diǎn)。

1.5 基因富集分析

在R 3.6.2中，通過(guò)“org.Hs.eg.db”包獲取潛在作用靶點(diǎn)的entrezID，利用“ClusterProfile”包對(duì)其進(jìn)行GO注釋分析及KEGG通路分析。設(shè)置p value Cutoff=0.05,q value Cut off=0.05，選取GO分析結(jié)果中富集程度最高的前10條及KEGG分析中富集程度最高的前20條通路進(jìn)行可視化。

1.6 分子對(duì)接驗(yàn)證

將關(guān)鍵活性成分導(dǎo)入Pubchem數(shù)據(jù)庫(kù)（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov）獲得其2D結(jié)構(gòu)，將核心靶點(diǎn)導(dǎo)入PDB數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.rcsb.org），選擇合適的蛋白結(jié)構(gòu)。用PyMol軟件對(duì)靶蛋白結(jié)構(gòu)去水，分離配體和受體。以靶蛋白作為受體，以藥物活性成分作為配體，根據(jù)靶蛋白復(fù)合物中配體的坐標(biāo)確定分子對(duì)接的活性位點(diǎn)，根據(jù)靶蛋白活性口袋設(shè)置Gridbox坐標(biāo)及大小，采用AutoDock vina進(jìn)行分子對(duì)接，選取自由結(jié)合能最低的結(jié)合構(gòu)象，使用PyMol軟件進(jìn)行可視化處理。

2 結(jié)果

2.1 苦參治療慢性乙型肝炎的活性成分與靶點(diǎn)

在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)共檢索得到苦參活性成分（OB≥30%，DL≥0.18）45個(gè)，包括槲皮素、苦參堿、苦參素等，活性成分作用靶點(diǎn)共113個(gè)。合并Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)及OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索結(jié)果，共獲得人類(lèi)CHB相關(guān)靶點(diǎn)基因8287個(gè)。將苦參的作用靶點(diǎn)和CHB相關(guān)靶點(diǎn)取交集后，得到苦參治療CHB的潛在作用靶點(diǎn)97個(gè)，具有治療CHB作用的相關(guān)活性成分23個(gè)，詳見(jiàn)表1。

表1 苦參治療CHB的相關(guān)活性成分

2.2 成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析

將苦參的相關(guān)活性成分及潛在作用靶點(diǎn)信息導(dǎo)入Cytoscape3.7.2，構(gòu)建苦參治療CHB的“相關(guān)活性成分-潛在作用靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。采用Cytoscape 3.7.2的內(nèi)置“network analyze”插件分析網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)鋵傩?，得到活性成分及靶點(diǎn)基因的連接度、介度、緊密度。連接度越大，圖中節(jié)點(diǎn)的面積越大，則該節(jié)點(diǎn)發(fā)揮作用的可能性越大（圖1）。經(jīng)計(jì)算，活性成分的連接度中位數(shù)為5，故選取連接度≥5為關(guān)鍵活性成分，包括槲皮素（quercetin）、木 樨 草 素（uteolin）、芒 柄 花 黃 素（formononetin）等，關(guān)鍵活性成分的拓?fù)鋮?shù)見(jiàn)表2。關(guān)鍵活性成分作用的靶點(diǎn)個(gè)數(shù)較多，可能為苦參治療CHB的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。靶點(diǎn)的連接度中位數(shù)為2，故選取連接度≥4（2倍中位數(shù)）為關(guān)鍵靶點(diǎn)，共18個(gè)，包括PTGS1、ESR1、PRSS1、PPARG、AR、NCOA2、NCOA1、GSK3B、IL6、ESR2、ICAM1、CHRM3、CHRM1、CHEK1、F7、GABRA1、RELA、CASP3。由圖1可知，苦參的一種活性成分可對(duì)應(yīng)一個(gè)或多個(gè)疾病靶標(biāo)，多種活性成分可對(duì)應(yīng)相同的疾病靶標(biāo)，提示苦參治療CHB具有多成分、多靶標(biāo)的特點(diǎn)。

圖1 苦參治療CHB的“相關(guān)活性成分-潛在作用靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖

表2 關(guān)鍵活性成分拓?fù)鋮?shù)

2.3 靶蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)（PPI）的構(gòu)建

將苦參治療CHB的97個(gè)潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)。通過(guò)R 3.6.2計(jì)算可得PPI網(wǎng)絡(luò)連接度中位數(shù)為16，選取連接度≥32（2倍中位數(shù)）的靶點(diǎn)進(jìn)行可視化，共13個(gè)（圖2）。前面經(jīng)靶點(diǎn)映射，共獲得苦參治療CHB的關(guān)鍵靶點(diǎn)18個(gè)，將其與PPI網(wǎng)絡(luò)中篩選所得13個(gè)靶點(diǎn)取交集，可得到6個(gè)核心靶點(diǎn)，分別為IL6、ESR1、PPARG、AR、RELA、CASP3。核心靶點(diǎn)具有與活性成分及其他靶點(diǎn)互作關(guān)系均密切的特點(diǎn)，在苦參針對(duì)CHB的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中可能起到關(guān)鍵作用。將6個(gè)核心治療靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得其相互作用網(wǎng)絡(luò)（圖3）。

圖2 PPI網(wǎng)絡(luò)連接度≥2倍中位數(shù)的治療靶點(diǎn)柱狀圖

圖3 核心治療靶點(diǎn)蛋白互作關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 基因富集分析

使用R 3.6.2對(duì)97個(gè)潛在作用靶點(diǎn)進(jìn)行GO注釋分析及KEGG通路分析。GO注釋分析包括生物學(xué)過(guò)程（biological process，BP）、細(xì) 胞 組 成（celluar component，CC）、分子功能（molecular function，MF）3個(gè)部分。GO注釋分析結(jié)果顯示潛在作用靶點(diǎn)主要參與的生物學(xué)過(guò)程（p value≤0.05）1282條，前三條為response to steroid hormone、response to xenobiotic stimulus、response to radiation；參與細(xì)胞成分（p value≤0.05）59個(gè)，以membrane raft、membrane microdomain、membrane region為主；參與分子功能（p value≤0.05）104條，以DNA-binding transcription activator activity、ubiquitin（-like）protein ligase binding、ubiquitin protein ligase binding的作用較為突出。分別選取富集最顯著的前10條進(jìn)行可視化（圖4（A）、（B）、（C））。KEGG通路分析可知，苦參治療CHB涉及的通路主要有PI3KAkt信號(hào)通路、乙型肝炎病毒信號(hào)通路，TNF信號(hào)通路，細(xì)胞凋亡信號(hào)通路等（p value≤0.05），涉及病毒感染、炎癥、免疫等方面，提示苦參可能通過(guò)調(diào)節(jié)免疫、介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、干預(yù)細(xì)胞凋亡等途徑來(lái)治療CHB。選取富集程度高的前20條通路進(jìn)行可視化（圖4（D））。

圖4 生物學(xué)過(guò)程（A）、細(xì)胞成分（B）、分子功能（C）及KEGG通路（D）富集結(jié)果

2.5 分子對(duì)接結(jié)果

將“相關(guān)活性成分-潛在作用靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖中連接度最高的成分槲皮素與6個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)行對(duì)接，即受體為IL6（PDB ID：5FUC）、CASP3（PDB ID：3DEH）、PPARG（PDB ID：3SZ1）、RELA（PDB ID：3QXY）、AR（PDB ID：2HVC）、ESR1（PDB ID：2QA8），配體為槲皮素。結(jié)合自由能可評(píng)價(jià)受體和配體之間的結(jié)合能力，結(jié)合能小于0時(shí)，認(rèn)為配體和受體可以自由結(jié)合，且結(jié)合自由能越低，二者結(jié)合能力越強(qiáng)。結(jié)果顯示AR、CASP3、RELA、IL6、PPARG可與槲皮素穩(wěn)定結(jié)合，提示槲皮素與上述靶點(diǎn)之間的相互作用可能為苦參治療CHB的重要機(jī)制之一，值得進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。ESR1與槲皮素雖未顯示有結(jié)合力，但作為核心靶點(diǎn)，ESR1可能通過(guò)與其他活性成分穩(wěn)定結(jié)合發(fā)揮治療CHB的作用，有待于進(jìn)一步研究。對(duì)接結(jié)果見(jiàn)表3、圖5（A）、（B）、（C）、（D）、（E）。

表3 槲皮素與核心靶點(diǎn)分子對(duì)接結(jié)合自由能（kcal/mol）

圖5 AR-quercetin結(jié)合圖（A）、CASP3-quercetin結(jié)合圖（B）、RELA-quercetin結(jié)合圖（C）、IL6-quercetin結(jié)合圖（D）及PPARG-quercetin結(jié)合圖（E）

3 討論

苦參出自《神農(nóng)本草經(jīng)》，傳統(tǒng)中醫(yī)取其清熱燥濕、殺蟲(chóng)、利尿之功，主要用于治療濕熱黃疸、瀉痢、皮膚瘙癢等病癥。隨著有關(guān)苦參活性物質(zhì)及其藥理作用的研究不斷推進(jìn)，發(fā)現(xiàn)苦參的主要活性成分有生物堿、黃酮、三萜皂苷、木脂素、酚酸和少量苯丙素類(lèi)成分[12]，具有抗病毒、抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫的作用。近年來(lái)，苦參治療CHB的研究不斷深入，提示苦參在CHB的臨床治療及藥物研發(fā)等方面有較大的應(yīng)用價(jià)值。本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，以中藥成分、疾病靶點(diǎn)為研究對(duì)象，系統(tǒng)探索了苦參治療CHB的活性成分、潛在靶點(diǎn)基因和分子機(jī)制，預(yù)測(cè)苦參治療CHB的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制，為苦參的后續(xù)研究提供科學(xué)依據(jù)。

3.1 關(guān)鍵活性成分分析

本研究發(fā)現(xiàn)苦參具有治療CHB作用的活性成分共23個(gè)，其中關(guān)鍵活性成分有槲皮素、木犀草素、芒柄花黃素、菜豆素、8-異戊烯基-山柰酚、苦參堿、苦參素等。既往大量研究表明上述活性成分具有良好抗CHB的功效，其中以槲皮素、木犀草素、苦參堿、苦參素的研究較深入。槲皮素為黃酮類(lèi)化合物，實(shí)驗(yàn)研究顯示槲皮素通過(guò)影響亞基因組RNA的轉(zhuǎn)錄以及調(diào)控?zé)嵝菘说鞍讈?lái)干擾病毒的轉(zhuǎn)錄及復(fù)制，減少HBsAg、HBeAg的分泌，降低HBV DNA的水平[13]；降低促炎細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的產(chǎn)生，抑制NF-κB的激活，進(jìn)而減輕炎癥反應(yīng)造成的肝臟損傷[14,15]。木犀草素屬天然黃酮類(lèi)化合物，體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)木犀草素可有效抑制HepG2.2.15細(xì)胞中細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）介導(dǎo)的肝細(xì)胞核因子4（HNF 4）的表達(dá)及其與HBV PrC/C啟動(dòng)子的結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄水平上抑制HBV的復(fù)制[16]。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)苦參堿可抑制HepG 2.2.15細(xì)胞中HBV DNA的復(fù)制及HBsAg的分泌[17]。臨床研究證實(shí)，苦參堿可提高HBeAg的血清學(xué)轉(zhuǎn)換率及HBV DNA的陰轉(zhuǎn)率，改善肝功能，緩解臨床癥狀，且不良反應(yīng)少見(jiàn)[18]。研究發(fā)現(xiàn)苦參素具有抗炎、保肝降酶、抗病毒、抗肝纖維化、免疫調(diào)節(jié)等作用[19]。FENG等人通過(guò)研究苦參素聯(lián)合阿德福韋酯（ADV）治療CHB發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組（ADV）相比，觀察組（苦參素聯(lián)合ADV）血清HBV DNA載量明顯減少，透明質(zhì)酸、Ⅲ型前膠原水平降低，CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞水平升高，IgM、IgG、IgA水平升高，血清內(nèi)毒素水平降低。由此可知，與單用ADV相比，聯(lián)合苦參素可有效減低患者血清中病毒載量，提高機(jī)體免疫力，改善肝功能，延緩肝纖維化的進(jìn)展，改善預(yù)后[20]。此外，一項(xiàng)薈萃分析顯示，苦參素與NAs聯(lián)合使用可有效提高HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換率、HBV DNA陰轉(zhuǎn)率及ALT復(fù)常率[21]。因此，槲皮素、木犀草素、苦參堿、苦參素或?yàn)橹委烠HB的重要活性成分，具有極大的研究空間，可能為抗CHB藥物的研發(fā)提供物質(zhì)基礎(chǔ)。

3.2 核心靶點(diǎn)及相關(guān)通路分析

本研究顯示，苦參有效活性成分參與治療CHB的核心靶點(diǎn)為IL-6、ESR1、AR、RELA、PPARG、CASP3，這6個(gè)核心靶點(diǎn)之間存在顯著的相互作用關(guān)系。IL-6屬TNF信號(hào)通路的重要因子，介導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)、炎癥誘導(dǎo)等。研究發(fā)現(xiàn)，IL-6既可增強(qiáng)淋巴細(xì)胞功能，又作為炎癥介質(zhì)參與HBV誘導(dǎo)的肝損傷，對(duì)于HBV感染具有雙向調(diào)節(jié)作用[22]。IL-6通過(guò)抑制轉(zhuǎn)錄因子如HNF-1α、HNF-4α、STAT3與cccDNA的 結(jié)合，抑 制HBV DNA轉(zhuǎn) 錄[23]。ESR1和AR都 與 性 激 素 相 關(guān)。ESR1編碼雌激素受體α。雌激素受體α在肝臟的表達(dá)上調(diào)，與HNF-4α相互作用，可改變其與HBV增強(qiáng)子的結(jié)合，進(jìn)而抑制HBV DNA的轉(zhuǎn)錄[24]。AR編碼雄激素受體，肝臟的雄激素受體通過(guò)直接與病毒核心啟動(dòng)子附近的雄激素響應(yīng)元件結(jié)合來(lái)增強(qiáng)HBV RNA轉(zhuǎn)錄[25]，該活性受HBx的調(diào)節(jié)。RELA編碼RelA蛋白（p65），屬NF-κB/Rel蛋白家族的成員。NF-κB/RelA的激活可誘導(dǎo)多種活性靶基因反式激活，包括炎癥細(xì)胞因子，趨化因子和凋亡介質(zhì)，在炎癥反應(yīng)中起到重要的作用[26]。PPARG編碼過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ，可調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)的基因表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，CHB患者外周血PPARG啟動(dòng)子甲基化增強(qiáng)，該甲基化強(qiáng)度與肝臟炎癥和纖維化呈正相關(guān)，提示PPARG與HBV的相互作用影響CHB的進(jìn)展[27]。CASP3編碼半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶，在氧化應(yīng)激的條件下，HBx通過(guò)觸發(fā)CASP3介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，降低抗凋亡因子Mcl-1的水平，可能與HBV相關(guān)HCC的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[28]，由此推測(cè)，苦參或可延緩HCC的進(jìn)展。由KEGG富集結(jié)果可知，上述核心靶點(diǎn)主要富集在PI3K-Akt及TNF信號(hào)通路，這兩條通路均與CHB的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在體外培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞模型及HepG2細(xì)胞模型中均發(fā)現(xiàn)HBX通過(guò)激活PI3K-Akt信號(hào)通路抑制HBV DNA的復(fù)制及細(xì)胞凋亡[29-30]。TNF-α作為重要的細(xì)胞因子，可通過(guò)激活TNF信號(hào)通路，參與炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答等生物學(xué)過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)在早期感染階段，TNFα可抑制HBV進(jìn)入肝細(xì)胞及其在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制[31]；還可使HBV的核衣殼失穩(wěn)，降低cccDNA的水平[32]。上述研究結(jié)果表明，苦參的有效活性成分可能通過(guò)以上核心靶點(diǎn)來(lái)干預(yù)PI3K-Akt及TNF等信號(hào)通路，進(jìn)而起到治療CHB的作用，進(jìn)一步證實(shí)苦參抗CHB的潛在臨床價(jià)值，其機(jī)制有待于深入研究。

綜上所述，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，采用分子對(duì)接技術(shù)，應(yīng)用多種生物信息學(xué)工具，對(duì)苦參多成分、多靶點(diǎn)、多途徑治療CHB的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)關(guān)系進(jìn)行研究。根據(jù)研究結(jié)果可推測(cè)，苦參可能主要通過(guò)干預(yù)病毒復(fù)制、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡及腫瘤發(fā)生等生物學(xué)過(guò)程，起到治療CHB的作用，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步 驗(yàn)證其作用機(jī)制提供了依據(jù)。