孕婦地中海貧血篩查以及基因檢測(cè)結(jié)果分析與臨床意義

莊建全，姜 玲（通訊作者）

（重慶市萬(wàn)盛經(jīng)開區(qū)人民醫(yī)院 重慶 400800）

地中海貧血（簡(jiǎn)稱地貧），也被稱作珠蛋白生成障礙性貧血，主要是突變或者缺失珠蛋白基因引起的肽鏈合成障礙所致，也是一種遺傳性溶血性貧血，主要有β 地貧和α 地貧。相關(guān)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，世界范圍內(nèi)β 地貧或者α 地貧基因攜帶者占比1.7%，新生兒中有4.4/10 000 地貧[1]?，F(xiàn)階段臨床針對(duì)該疾病仍未有根治方案，主要進(jìn)行產(chǎn)前基因診斷和篩查，是控制地貧發(fā)生的主要手段，進(jìn)而降低此類缺陷胎兒出生率。本次研究選擇本院2019 年3 月—2020 年2 月進(jìn)行地貧篩查的1 083 例孕婦，針對(duì)地貧篩查以及基因檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，內(nèi)容報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年3 月—2020 年2 月本院進(jìn)行地貧篩查的1 083 例孕婦，對(duì)其臨床資料進(jìn)行回顧性分析，孕婦年齡20 ～40 歲，平均年齡（31.25±3.69）歲，孕周14 ～29 周，平均孕周（21.36±2.31）周。

1.2 方法

（1）初篩查方法：選擇β-地貧、α-地貧基因檢測(cè)試劑，能夠檢測(cè)突變型β-地貧19 種（17 個(gè)位點(diǎn)）、突變型α-地貧3 種、缺失型α-地貧3 種。對(duì)β-珠蛋白基因突變區(qū)、α-珠蛋白基因突變區(qū)、α-珠蛋白缺失區(qū)使用生物素標(biāo)記引物開展特異性擴(kuò)增操作，選擇標(biāo)記不同突變類型或者與缺失型地貧探針尼龍膜與擴(kuò)增產(chǎn)物開展導(dǎo)流雜交，之后根據(jù)化學(xué)顯色詳情進(jìn)行結(jié)果評(píng)估。

（2）基因檢測(cè)：對(duì)初篩陽(yáng)性孕婦血液標(biāo)本進(jìn)行DNA提取，開展基因檢測(cè)確定基因型，包括缺失型α 地貧有3 種：--SEA、-α3.7、-α4.2；突變型α 地貧有3 種：CS、QS、WS；β 地貧突變型有17 種：CD41-42、CD43、I V S-∥-654、C D17、C D14-15、-28、-29、C D71-72、βE、IVS-I-1、CD27-28、IVS-I-5、CAP、Int、CD31、-30、-32。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

選用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 21.0 處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x-± s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率[n（%）]表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 孕婦地貧篩查結(jié)果

對(duì)1 083 例孕婦開展MCH 以及MCV 檢查結(jié)果顯示，73 例表型陽(yáng)性患者，占比6.74%。開展PCR+導(dǎo)流雜交法分析結(jié)果顯示，46 例擬確診α-地貧患者，占比4.25%；25 例擬確診β-地貧患者，占比2.31%；2 例α/β 地貧患者，占比0.18%。3 種不同類型的地貧患者篩查結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在確診率上，β 地貧、α 地貧高于α/β 地貧，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 孕婦地貧篩查結(jié)果

2.2 地貧孕婦基因分布詳情

46 例α 地貧患者中，占比最高的為36.96%-SEA/αα；25 例β 地貧患者中占比最高的為48.00%17M突變雜合子；2 例α/β 地貧患者中，α3.7 復(fù)合654M雜合子與SEA復(fù)合CS復(fù)合17M雜合子各占50.00%，見(jiàn)表2。

表2 地貧孕婦基因分布詳情

3.討論

地貧屬于一種單基因先天性遺傳性疾病，可按照缺少不同的珠蛋白肽鏈分成多種類型，其中α、β 地貧占比最高，該疾病臨床表現(xiàn)以貧血為主，在國(guó)內(nèi)南方南海區(qū)域發(fā)病率較高。該疾病發(fā)病后因長(zhǎng)時(shí)間貧血而引起機(jī)體缺乏營(yíng)養(yǎng)，進(jìn)而降低免疫力，增加感染性疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。此外地貧患者紅細(xì)胞自身能力較差，無(wú)法大量輸送氧氣，情況嚴(yán)重時(shí)影響正常生活。常染色體隱性基因是該疾病致病基因，紅細(xì)胞體積低于健康人，且一些血紅素水平較低。該疾病對(duì)機(jī)體產(chǎn)生最嚴(yán)重的影響則為貧血，主要長(zhǎng)時(shí)間貧血會(huì)影響部分臟器，使其功能出現(xiàn)衰退情況，此外還會(huì)影響骨髓造血功能，增加造血量以減少骨板厚度，產(chǎn)生骨質(zhì)疏松等異常情況。與此同時(shí)，還會(huì)過(guò)度吸收鐵而產(chǎn)生肝脾腫大、心功能衰竭等嚴(yán)重疾病，不利于機(jī)體正常運(yùn)作。目前該疾病仍未有有效根治治療手段，僅通過(guò)輸血以延續(xù)生命。造血干細(xì)胞移植是現(xiàn)階段該疾病最有效治療手段，其治療成功率在70%左右，然而治療費(fèi)用昂貴，大多數(shù)患者經(jīng)濟(jì)有限無(wú)法承擔(dān)。

相關(guān)流行病學(xué)研究數(shù)據(jù)顯示，南方海南、廣西等發(fā)病率較高，有20%以上人群存在致病基因，云南、四川等區(qū)域人群有6%的致病基因攜帶率[2]。如果夫妻2 人攜帶相同類型致病基因，子女致病基因攜帶率為50%、正常率為25%，重型率為25%[3]。現(xiàn)今國(guó)際上認(rèn)為預(yù)防地貧的最有效方式為淘汰重型患兒。而該疾病篩查方案為基因診斷以及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，如脆性試驗(yàn)、血紅蛋白電泳、PCR+導(dǎo)流雜交法等。目前本院產(chǎn)科產(chǎn)前常用的篩查方案為PCR+導(dǎo)流雜交法。本結(jié)果顯示，1 083 例孕婦開展PCR+導(dǎo)流雜交法檢查結(jié)果顯示，73 例表型陽(yáng)性患者，占比6.74%。開展PCR+導(dǎo)流雜交法分析結(jié)果顯示，46 例擬確診α-地貧患者，占比4.25%；25 例擬確診β-地貧患者，占比2.31%；2 例α/β 地貧患者，占比0.18%。3 種不同類型的地貧患者篩查結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=40.723，P＜0.05）。在確診率上，β 地貧、α地貧高于α/β 地貧，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這就說(shuō)明PCR+導(dǎo)流雜交法聯(lián)合應(yīng)用有助于孕婦地貧篩查，是篩查α、β 地貧的有效血液學(xué)指標(biāo)，但由于極易漏診靜止型α-地貧，還需進(jìn)行基因檢測(cè)。

β-地貧患兒與新生兒出生時(shí)無(wú)明顯異常，然而3 個(gè)月后則會(huì)逐漸產(chǎn)生貧血現(xiàn)象，此外還會(huì)合并面色蒼白、智力遲鈍、肝脾腫大等現(xiàn)象，如不治療多數(shù)患兒會(huì)在5 歲之前死亡；α-地貧患兒一般會(huì)出現(xiàn)早產(chǎn)或者妊娠期死亡，且早產(chǎn)后病死率較高；α-地貧復(fù)合β-地貧或者單一地貧患兒需終生輸血治療，以延續(xù)生命。此外，還要定期對(duì)血清鐵蛋白進(jìn)行檢測(cè)，預(yù)防缺鐵性貧血的發(fā)生。血清鐵蛋白檢測(cè)費(fèi)用低、操作簡(jiǎn)單，然而誤診和漏診率較高。而血紅蛋白電泳也是常用檢測(cè)手段之一，但是重復(fù)性檢測(cè)難度大、準(zhǔn)確率較低。還有部分患者脆性試驗(yàn)以及MCV 檢測(cè)均正常，其漏診率為3%左右[4]。本研究對(duì)擬確診患者進(jìn)行基因檢查顯示，46 例α 地貧患者中，占比最高的為36.96%-SEA/αα；25 例β 地貧患者中占比最高的為48.00%17M 突變雜合子；2 例α/β 地貧患者中，α3.7 復(fù)合654M 雜合子與SEA 復(fù)合CS 復(fù)合17M 雜合子各占50.00%。這就說(shuō)明本地區(qū)以α 地貧為主，其中標(biāo)準(zhǔn)型-SEA/αα 基因型最多，和其他地區(qū)研究結(jié)果相似，但是其他基因型占比部分研究結(jié)果有一定差異性，可能是不同人群和不同區(qū)域地貧構(gòu)成基因突變譜也有顯著差異[5]。由于該疾病治療難度大、無(wú)根治方法等，需有效預(yù)防，其預(yù)防方案則是婚前篩查、產(chǎn)前基因診斷和篩查，避免地貧患兒出生，減少致病基因攜帶率，提高人口質(zhì)量，確保優(yōu)生優(yōu)育。

綜上所述，孕婦地貧篩查以及基因檢測(cè)意義重大，能夠及早發(fā)現(xiàn)胎兒是否攜帶疾病基因和基因分型，預(yù)防中重型地貧患兒的出生，減少地貧基因攜帶率。