2017—2018年甘肅省外環(huán)境禽流感病毒監(jiān)測分析

李保娣，李紅育，徐叢杉，張慧，王雪瑩，趙哲，汪鵬，于德山

甘肅省疾病預(yù)防控制中心，甘肅 蘭州 730000

禽流感(avian influenza，AI)是由正黏病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的一種禽類感染征或疾病綜合征，家禽感染禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)后，病死率可達100%。病毒在復(fù)制過程中發(fā)生基因重配，致使基因組結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，獲得感染人的能力，可造成人感染致病性禽流感，嚴重威脅人類的健康[1]。目前，引起人類感染和發(fā)病的禽流感病毒主要有H5、H7和H9亞型[2]。接觸感染病毒的活禽及其分泌物、排泄物或暴露于活禽市場是人類感染禽流感最主要的危險因素[3]，因此，加強涉禽外環(huán)境禽流感監(jiān)測非常重要。甘肅省位于我國西部地區(qū)，地處黃河中上游，是“一帶一路”沿線重要地區(qū)，加強全省禽流感病毒監(jiān)測具有特別重要的意義。本研究對2017—2018年度甘肅省涉禽外環(huán)境禽流感病毒監(jiān)測及H5、H7、H9亞型的分布狀況進行分析，結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1樣本收集 根據(jù)《職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境高致病性禽流感監(jiān)測方案》要求，在甘肅省14個市(州)的活禽批發(fā)市場、城鄉(xiāng)農(nóng)貿(mào)市場或菜市場、家禽規(guī)模養(yǎng)殖場(戶)和家禽散養(yǎng)戶等禽流感監(jiān)測點采集禽類飲水、籠具內(nèi)部表面涂布物、禽類糞便和清洗禽類的污水等環(huán)境樣本，要求各市(州)每月采集10～20份。樣本采樣管內(nèi)要求有3 mL病毒保存液，樣本采集后于4 ℃條件下48 h內(nèi)送至所在市(州)疾病預(yù)防控制中心國家流感/禽流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室，實驗室收到樣本后一式三份進行分裝，其中一份及時進行禽流感病毒檢測，其余兩份置于-70 ℃冰箱保存。

1.2病原學(xué)檢測

1.2.1病毒RNA提取 樣本核酸提取采用Rneasy Mini Kit(德國Qiagen公司)試劑盒，操作嚴格按說明書進行。

1.2.2禽流感病毒核酸檢測 用Real-time RT-PCR方法進行甲型流感病毒(Influenza A virus，F(xiàn)luA)核酸檢測，F(xiàn)luA陽性的樣本進一步檢測H5、H7、H9亞型核酸。部分市(州)使用的商品化試劑盒由上海之江生物科技股份有限公司、江蘇碩世生物科技股份有限公司提供，PCR擴增引物探針由中國疾病預(yù)防控制中心國家流感中心提供，擴增試劑盒為德國Qiagen公司生產(chǎn)，所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用Excel 2010 和SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計分析，率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1外環(huán)境禽流感病毒檢出情況 2017—2018年甘肅省共檢測活禽市場不同類型的外環(huán)境樣本7 038份，經(jīng)過甘肅省疾病預(yù)防控制中心病原生物實驗室Real-time RT-PCR復(fù)核檢測，F(xiàn)luA核酸陽性1 510份，陽性率為21.45%。其中H9亞型陽性1 444份，占總陽性數(shù)的95.63%，陽性率為20.52%；H7亞型陽性84份，陽性率為1.19%；H5亞型陽性4份，陽性率為0.06%。共檢出H5、H9混合感染樣本2份，H7、H9混合感染樣本20份，見表1。

表1 2017—2018年甘肅省活禽市場外環(huán)境禽流感病毒分布

全省不同類型樣本中均檢出禽流感病毒FluA核酸，其中FluA和H9陽性率最高的均為宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭樣本(36.04%、35.39%)，F(xiàn)luA陽性率最低的為禽類飲水(13.27%)。不同類型樣本中均檢出H7陽性，其中糞便樣本中檢出最多，共檢出28份，其中5份為H7、H9混合感染。宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭樣本和禽類飲水中各檢出1份H5陽性，其中宰殺或擺放禽肉案板表面擦拭樣本為H5、H9混合感染；清洗禽類的污水中檢出2份H5陽性，其中1份為H5、H9混合感染，其余樣本中均未檢出，見表2。

表2 2017—2018年甘肅省活禽市場外環(huán)境不同樣本禽流感病毒核酸檢測情況

不同類型樣本中FluA核酸陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=50.232，P<0.01)。宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭樣本FluA核酸陽性率高于糞便樣本、籠具表面擦拭樣本、禽類飲水、清洗禽類的污水和其他樣本(χ2=185.113、29.200、122.542、7.386和12.174，P均<0.05)；清洗禽類的污水的FluA陽性率高于糞便樣本、禽類飲水、籠具表面擦拭樣本和其他樣本(χ2=5.405、6.512、79.153和120.341，P均<0.05)。

2.2分布特征

2.2.1時間分布 2017和2018年全省分別檢測外環(huán)境樣本4 278和2 760份，分別檢出FluA陽性樣本857和653份，陽性率為20.03%和23.66%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=12.339，P<0.05)。2018年1月FluA陽性率最高(36.64%)，2017年6月最低(5.60%)；不同季度FluA陽性率依次在12.88%～36.64%、5.60%～33.12%、9.71%～25.12%和19.23%～32.55%波動，F(xiàn)luA陽性率在二、三季度總體上顯著低于一、四季度(χ2=8.125，P<0.05)，混合感染樣本均在2017年檢出，見圖1。

圖1 2017—2018年甘肅省活禽市場外環(huán)境禽流感監(jiān)測結(jié)果

2.2.2地區(qū)分布 全省14個市(州)均檢出FluA核酸陽性樣本，其中河?xùn)|9市(州)FluA陽性率由高到低依次為定西市、隴南市、白銀市、蘭州市、天水市、慶陽市、臨夏州、甘南州和平?jīng)鍪校缓游?市FluA陽性率由高到低依次為武威市、嘉峪關(guān)市、金昌市、酒泉市和張掖市，定西市FluA核酸陽性率最高。河?xùn)|9市(州)FluA平均陽性率(20.78%)和河西5市FluA平均陽性率(24.40%)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.159，P<0.05)。見表3。

表3 2017—2018年甘肅省不同地區(qū)活禽市場外環(huán)境禽流感病毒核酸檢測情況

3 討 論

甘肅省近10年來持續(xù)對外環(huán)境禽流感病毒進行監(jiān)測，基本掌握了全省禽流感病毒感染和流行情況，并對人感染禽流感病毒進行了積極主動防控。2017—2018年監(jiān)測結(jié)果顯示，全省外環(huán)境禽流感病毒以H9亞型為主，同時檢出H7及H5亞型，并且存在H5、H9混合感染和H7、H9混合感染的情況，提示存在禽流感病毒亞型重配的風(fēng)險。甘肅省外環(huán)境樣本禽流感病毒陽性率由高到低依次為宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭樣本、清洗禽類的污水、籠具表面擦拭樣本、其他樣本、糞便樣本和禽類飲水，表明在禽類宰殺、銷售等環(huán)節(jié)極易造成外環(huán)境污染，尤其宰殺環(huán)節(jié)所用的案板和水等更容易被禽流感病毒污染[4]。提示從事禽類養(yǎng)殖、屠宰等職業(yè)的人群應(yīng)該做好個人防護，減少暴露機會，普通民眾日常生活中不接觸帶病禽類，盡量少接觸禽類宰殺環(huán)境，廚房中生熟案板分開使用，盡可能降低感染發(fā)病的風(fēng)險。

H9亞型禽流感病毒在歐亞大陸多個國家的陸生家禽中演化為不同亞型，導(dǎo)致家禽產(chǎn)蛋量降低或合并其他病原體感染引發(fā)高致死率，造成巨大的經(jīng)濟損失[1]。研究表明，人感染H7N9的部分內(nèi)部基因來自H9N2禽流感病毒[5]。同時血清學(xué)結(jié)果也提示H9N2的抗體陽性率遠高于H5N1禽流感病毒，因此，H9N2禽流感病毒極有可能成為流感大流行的潛在威脅[6]。2016年甘肅省嘉峪關(guān)市已經(jīng)有人感染H9N2病例出現(xiàn)[7]，2017年酒泉市、張掖市出現(xiàn)人感染H7N9病例[8]，比鄰的新疆也報告了人感染H7N9、H5N1的病例，因此甘肅省人感染禽流感防控形勢非常嚴峻。

監(jiān)測結(jié)果表明，禽流感病毒一年四季均可污染外環(huán)境，但具有明顯的季節(jié)性特征，以冬春季較為嚴重，與其適合在低溫高濕環(huán)境下存活的特點有關(guān)，這與我國部分省市研究結(jié)果相符[9-11]。甘肅省14個市(州)中定西市和隴南市禽流感病毒陽性率較高，這與前幾年研究結(jié)果相一致[12]，可能與其活禽市場多、流動攤販和禽類來源復(fù)雜以及平時的監(jiān)管和消毒措施不到位有關(guān)[13]。河西5市中嘉峪關(guān)市、酒泉市和張掖市曾出現(xiàn)人感染禽流感病例，此次監(jiān)測中嘉峪關(guān)市和武威市FluA核酸陽性率較高，提醒河西地區(qū)要持續(xù)警惕人感染禽流感病例的發(fā)生。2018年甘肅省涉禽外環(huán)境樣本中H7陽性率從2017年的9.8%降到0，可能與禽類普遍接種H7N9疫苗有關(guān)，接種H7N9流感疫苗是目前預(yù)防禽流感的有效措施，應(yīng)繼續(xù)推廣該疫苗的接種工作。

禽流感的暴發(fā)和流行，增加了禽流感病毒與人流感病毒發(fā)生基因重排的機會，嚴重威脅人類健康，是值得關(guān)注的重大公共衛(wèi)生問題[14-16]。提示全省各市(州)均應(yīng)加強涉禽外環(huán)境禽流感監(jiān)測工作，動態(tài)掌握本地禽流感病毒變異特征，積極防范隨時可能發(fā)生的人感染禽流感風(fēng)險。

志謝感謝甘肅省各市(州)同仁在全省禽流感防治過程中付出的辛勤勞動