中醫(yī)藥干預(yù)血管性癡呆的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

張 雙，馬重陽， 程發(fā)峰， 王雪茜， 李長香， 杜 欣，翟昌明，王慶國，呂 凱*

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，北京 100029；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京 100029）

血管性癡呆（VD）在臨床的表現(xiàn)多為持續(xù)性和獲得性的高級認(rèn)知功能受到嚴(yán)重?fù)p傷[1]。在我國，VD的患病率為1.1%～3.0%，年發(fā)病率在5～9/1 000人。近些年，中醫(yī)方法在干預(yù)VD實(shí)驗(yàn)方面展現(xiàn)出優(yōu)勢和特點(diǎn)。尤其在動物實(shí)驗(yàn)方面，研究許多內(nèi)治外治的方法并闡釋了發(fā)揮藥效的相關(guān)機(jī)制。本文旨在以多種VD動物模型的制備方法為線索，綜述近年來中醫(yī)藥干預(yù)不同VD動物模型的研究進(jìn)展。

1 實(shí)驗(yàn)動物選擇

在制備VD模型時，鼠類是最常被選用的動物。其中，大鼠和小鼠與人類腦血管生理結(jié)構(gòu)具有高度相似性。大鼠和小鼠在造模后具有便于智能測試、行為學(xué)觀察、影像學(xué)等優(yōu)勢，且具有較其他動物經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、來源明確、飼養(yǎng)簡便、便于操作、可控性和生命力強(qiáng)等諸多優(yōu)點(diǎn)[2]。但小鼠與大鼠相比，體型小、血管細(xì)、操作難度大，故大鼠在VD造模中更為適合。

2 VD大鼠模型制備方法

2.1 血管阻斷法

2.1.1 雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎VD模型（2-VO） 2-VO法是指將大鼠的雙側(cè)頸總動脈永久性的結(jié)扎。具體操作步驟為：將大鼠麻醉后仰臥位固定于鼠板，在頸正中切小口，鈍性分離肌肉，然后用絲線結(jié)扎分離出的雙側(cè)頸總動脈，最后將切口縫合即可[3]。2-VO造模法的優(yōu)點(diǎn)是簡單易操作，大鼠的認(rèn)知記憶能力在造模后有明顯降低。值得注意的是，該方法是對大鼠雙側(cè)頸總動脈的永久性結(jié)扎，對大鼠一次性打擊大，死亡率高。有研究者[4]針對此問題對本方法進(jìn)行改良，將一次手術(shù)中把大鼠雙側(cè)頸總動脈同時結(jié)扎改為間隔一周分2次結(jié)扎。

2.1.2 三血管阻斷再開放（3-VO） 3條血管阻斷再開放的模型首先由KAMEYAMA M等[5]報道。具體步驟為：先將大鼠的雙側(cè)頸總動脈和基底動脈血供進(jìn)行阻斷，在一段時間后，將雙側(cè)頸總動脈的夾閉解除使血流再通，形成再灌注損傷。3-VO法由于要暴露基底動脈，對周圍組織和神經(jīng)牽拉較重，因此模型的穩(wěn)定性差。HORECKY J等[6]對該造模方法進(jìn)一步改良：在結(jié)扎大鼠的基底動脈后，將雙側(cè)頸總動脈進(jìn)行反復(fù)夾閉和再通。

2.1.3 四血管結(jié)扎VD模型（4-VO）由PULSINELLI WA[7]發(fā)明，具體步驟：在大鼠第一頸椎水平切口，暴露雙側(cè)第一頸椎橫突翼小孔，然后用直徑為0.5 mm的電凝針灼燒雙側(cè)椎動脈以造成永久性閉塞。24 h后分離大鼠雙側(cè)頸總動脈，用手術(shù)線穿線結(jié)扎致全腦缺血。4-VO模型的優(yōu)點(diǎn)是能較高程度的模擬VD的發(fā)病機(jī)制。不足之處在于操作時間長[8]，存活率較低。楊曉妮等[9]研究者的在使雙側(cè)椎動脈永久的閉塞后，再用微動脈夾可逆地反復(fù)夾閉和再通雙側(cè)頸總動脈。

2.2 血管栓塞法

2.2.1 注入血栓法 該方法是在同種大鼠身上取血，經(jīng)無菌自然干燥后形成血凝塊，研碎、過篩后制成混懸液備用。將大鼠頸外動脈結(jié)扎，然后將栓子鹽水混懸液從大鼠雙側(cè)頸總動脈緩慢推注，使小栓子經(jīng)頸內(nèi)動脈進(jìn)入顱內(nèi)，到達(dá)大腦各動脈進(jìn)而造成多發(fā)性腦梗死[10]。還有研究者[11]采用熒光微球作為栓子從頸總動脈注入腦內(nèi)，能夠明確指示梗塞血管的部位。

2.2.2 注入石蠟法 自大鼠胸骨左緣心跳最明顯處（大約距離中線約0.5 cm）進(jìn)針0.5～1 cm，回抽見鮮血確認(rèn)進(jìn)針位置正確后，將一定量的液狀石蠟緩慢地注入大鼠左心室。液狀石蠟栓子將隨著血液循環(huán)運(yùn)動進(jìn)入顱內(nèi)，進(jìn)而制成多發(fā)性腦缺血的模型。該模型制備方法因其能夠避免在頸部手術(shù)，感染發(fā)生率低。

2.2.3 大腦中動脈線栓法（MCAO） 尹軍祥等[12]研究者制備MCAO的方法是將直徑為0.25 mm的將尼龍線，一端加熱成光滑球形，從頸內(nèi)動脈插入18～19 mm以阻塞大腦中動脈而致腦缺血。將尼龍線在外留1 cm左右，然后縫合皮膚。2 h后將所留線頭向外提拉，使大腦中動脈形成再灌注損傷，腦梗死模型制備完成。此種方法的優(yōu)點(diǎn)是缺血灶較為明確 、重復(fù)性強(qiáng)；但不足之處是受線栓種類、實(shí)驗(yàn)造模的人員的操作水平等因素的限制。

2.3 血管損傷模型 內(nèi)皮收縮因子局部注射[13]。目前所知，最強(qiáng)的縮血管物質(zhì)是內(nèi)皮素。經(jīng)小鼠皮質(zhì)下注射內(nèi)皮素-1，在MRI的顯示中病灶明顯[14]。還有研究者[15]采用顱內(nèi)注射內(nèi)皮素的方法，此種造模方法的優(yōu)點(diǎn)是梗塞部位明確，有較好的重復(fù)性。但由于需要進(jìn)行開顱，因此對實(shí)驗(yàn)者的操作技術(shù)水平要求高。

2.4 VD自發(fā)模型 自發(fā)性高血壓腦卒中傾向的大鼠，其腦出血發(fā)生后，對存活的大鼠進(jìn)行篩選。篩選出可作為模型的大鼠大多在穿通支動脈的地方形成微小動脈瘤和出現(xiàn)動脈缺血性壞死，并在此基礎(chǔ)上形成多發(fā)性血栓性腦梗死[16]。長期的高血壓可導(dǎo)致微栓塞或血管動脈粥樣硬化，引起腦血流動力學(xué)的改變，局部的腦組織缺血缺氧，造成神經(jīng)元丟失而發(fā)生癡呆[17]。

2.5 其他VD造模方法 VD模型的制備方法除上述外，尚有轉(zhuǎn)基因法、M－受體東莨菪堿顱內(nèi)注入法、輻射誘導(dǎo)血管性癡呆模型[18]和光化學(xué)誘導(dǎo)VD模型[19]等。但是由于費(fèi)用過高，外源性干擾難以排除等原因，在中醫(yī)藥研究的應(yīng)用時受到限制。

3 中醫(yī)藥干預(yù)實(shí)驗(yàn)性VD進(jìn)展

3.1 行為學(xué)改善 VD模型制成后，動物的學(xué)習(xí)記憶能力障礙會明顯的表現(xiàn)出來。近年來的研究表明，采用中醫(yī)藥方法能夠有效改善或提高VD大鼠模型的學(xué)習(xí)記憶能力。王清碧等[20]經(jīng)給藥益肺宣肺降濁湯方治療后，VD大鼠的學(xué)習(xí)能力得到明顯提高，并且在一定的劑量范圍內(nèi)，其學(xué)習(xí)成績與中藥劑量呈正相關(guān)關(guān)系。王洲羿等[21]通過研究丹紅注射液，經(jīng)Morris水迷宮觀察其對VD大鼠的行為學(xué)影響。結(jié)果顯示，與VD模型組相較而言，治療組VD大鼠穿越目標(biāo)象限的時間明顯延長，且逃避潛伏期明顯縮短。

3.2 調(diào)節(jié)腦血流量 研究[22]發(fā)現(xiàn)，血液流變學(xué)指標(biāo)的異常與血管性癡呆的發(fā)生有密切關(guān)系。王宏英等[23]的研究表明，經(jīng)給藥養(yǎng)血清腦顆粒后，大鼠海馬局部的腦血流量增加，大腦微循環(huán)得到改善，有降低血黏度和抑制血小板聚集等的功能。任瑩等[24]的實(shí)驗(yàn)研究顯示，醒腦再造膠囊能有效提高腦部的血流速度，從而改善腦部血氧不足等問題。

3.3 影響腦組織形態(tài)學(xué) 動物的海馬CA1區(qū)細(xì)胞損傷時，記憶力會出現(xiàn)明顯下降[22]。孫紅旭等[25]的實(shí)驗(yàn)研究表明：通過給藥通絡(luò)益智散這一中藥復(fù)方合劑，海馬部位水腫神經(jīng)元的變性能夠有效減輕，膠質(zhì)細(xì)胞的增生也受到抑制。戴頌陽等[26]對姜黃素在血管性癡呆青年鼠和老年鼠中的作用及差異比較的研究表明，姜黃素能使得老年及青年血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)的病理形態(tài)學(xué)改變顯著減輕。由此提出姜黃素改善VD大鼠認(rèn)知功能障礙的可能機(jī)制之一是減輕了海馬組織的病理性損傷。

3.4 影響膽堿能系統(tǒng) 在學(xué)習(xí)記憶中，中樞膽堿功能系統(tǒng)有著十分重要的作用。吳曉光等[27]研究發(fā)現(xiàn)山楂葉總黃酮可通過降低海馬神經(jīng)元乙酰膽堿酯酶的活性、增強(qiáng)乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶的活性來增加腦組織中乙酰膽堿的含量，進(jìn)而恢復(fù)膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的功能。楊瓊等[28]采用穴位埋線聯(lián)合鹽酸甲氯芬酯的方法對血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)幾種重要蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行研究。結(jié)果提示，在缺血缺氧狀態(tài)下，該方法對海馬膽堿能神經(jīng)元具有良好的保護(hù)作用。

4 小結(jié)

綜上所述，近年來對VD動物模型的制備和改良方法的研究取得了較大進(jìn)步。但目前尚無標(biāo)準(zhǔn)動物模型應(yīng)用于血管性癡呆的實(shí)驗(yàn)研究。中醫(yī)藥在干預(yù)血管性癡呆的動物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)研究方面成果頗豐，主要從腦血流量變化、行為學(xué)、腦組織形態(tài)學(xué)及影響膽堿能系統(tǒng)等相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測。在中醫(yī)藥內(nèi)外治法、單味中藥提取、中藥復(fù)方中成藥、注射液、穴位與西藥相結(jié)合等方面均有建樹。應(yīng)積極利用現(xiàn)代科研手段和先進(jìn)的科學(xué)儀器，使中醫(yī)藥的優(yōu)勢得到充分發(fā)揮，加速其現(xiàn)代化的步伐，為服務(wù)于臨床做出更大貢獻(xiàn)，實(shí)現(xiàn)基礎(chǔ)與臨床、中醫(yī)藥與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的完美結(jié)合。

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