某豬場(chǎng)沙門氏菌和豬繁殖與呼吸綜合征病毒混合感染病例的診斷

楊志剛 湯德元 張森 韓超逸 晏仁潭 陳閶崢 羅柳

摘 要：2020年8月貴州省某豬場(chǎng)出現(xiàn)了大量仔豬發(fā)病死亡的現(xiàn)象，為查出該豬場(chǎng)仔豬發(fā)病及死亡原因，本研究采用臨床癥狀觀察、病理解剖診斷、細(xì)菌分離培養(yǎng)、病毒分子生物學(xué)檢測(cè)等檢測(cè)方法進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果顯示：發(fā)病仔豬為沙門氏菌和豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）混合感染，并根據(jù)診斷結(jié)果和豬場(chǎng)實(shí)際情況給出了相應(yīng)的防控建議。

關(guān)鍵詞：沙門氏菌;豬繁殖與呼吸綜合征;混合感染;診斷

中圖分類號(hào)：S858.9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1008-0457（2021）03-0079-04

國(guó)際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2021.03.013

Diagnosis of a Case of Mixed Infection of Salmonella and Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus on a Pig Farm

YANG Zhigang，TANG Deyuan*，ZHANG Sen，HAN Chaoyi，YAN Rentan，CHEN Changzheng，LUO Liu

（College of Animal Science，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025，China）

Abstract：

A large number of piglets morbidity and death occurred in a pig farm in Guizhou Province in August 2020. In order to find out the causes of morbidity and death of piglets in this pig farm，etiological testing was carried out in this study by clinical symptom observation，pathological anatomy diagnosis，bacterial isolation and culture，virus molecular biological detection and other detection methods. The results showed that the dieseaed piglets were infected with mixture of salmonella and porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV），and the corresponding prevention and control suggestions were given bsaed on the diagnosis results and the actual situation of the pig farm.

Keywords：

salmonella;porcine reproductive and respiratory syndrome;mixed infection;diagnosis

豬沙門氏菌?。╯wine salmonellosis） 又稱豬副傷寒（paratyphus suum） ，是由沙門氏菌屬細(xì)菌引起的仔豬的一種傳染病，致病菌主要是豬霍亂沙門氏菌、豬傷寒沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌等，常發(fā)于6月齡以下的仔豬，多發(fā)于1～4月齡，臨床上可分為急性、亞急性和慢性3種類型，急性病死率高達(dá)90%，慢性型病死率達(dá)25%～50% [1-2]。急性型呈敗血癥經(jīng)過(guò)而亡，剖檢見(jiàn)脾臟腫大硬化，腸系膜淋巴結(jié)腫大;亞急性和慢性病例多發(fā)壞死性腸炎，死亡動(dòng)物尸體消瘦，剖檢見(jiàn)腸黏膜附有糜爛壞死物，脾臟稍有腫大，肺部常伴有卡他性肺炎病灶[3]。對(duì)該病的控制大部分通過(guò)抗菌藥物，因此豬群沙門氏菌產(chǎn)生耐藥性也屢見(jiàn)報(bào)道[4]。豬殖繁與呼吸綜合征（ porcine repro-ductive and respiratory syndrome，PRRS） 又稱豬“藍(lán)耳病”，病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV），以種豬群繁殖障礙和仔豬、生長(zhǎng)育肥豬群呼吸道問(wèn)題為特點(diǎn)，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，給全世界的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[5]，哺乳仔豬主要有腹瀉、呼吸困難等癥狀，個(gè)別仔豬還會(huì)出現(xiàn)精神癥狀，如震顫、后肢癱瘓等[6]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)廣泛流行的PRRSV變異毒株引起的豬殖繁與呼吸綜合征，發(fā)病和死亡率均比較高[7]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料

貴州省某規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)800多頭仔豬有400多頭出現(xiàn)腹瀉，糞便惡臭，耳部發(fā)紫，一個(gè)月內(nèi)30多頭小豬出現(xiàn)死亡，于是該豬場(chǎng)將2只瀕死仔豬送檢。使用高壓滅菌的器械剖檢對(duì)仔豬進(jìn)行解剖，無(wú)菌采集心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟等，并記錄病理變化。

1.1.2 主要試劑和培養(yǎng)基

LB培養(yǎng)基和SS培養(yǎng)基培購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司;藥敏紙片購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司;DL2000 DNA Maker購(gòu)自索萊寶（北京）生物有限公司。

1.1.3 主要儀器

梯度PCR 擴(kuò)增儀和Gel DOC XR凝膠成像系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD有限公司;恒溫培養(yǎng)箱購(gòu)自寧波江南儀器廠;電泳儀購(gòu)自北京君意東方電泳設(shè)備有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌分離與純培養(yǎng)

在無(wú)菌環(huán)境下使用接種環(huán)，無(wú)菌采集心臟、肝臟、脾臟、腸容物分別進(jìn)行LB培養(yǎng)基和SS培養(yǎng)基培養(yǎng)1～2 d。然后觀察菌落，根據(jù)其顏色、形態(tài)和數(shù)目，記錄并選取各個(gè)不同類型菌落進(jìn)行純化和革蘭氏染色鏡檢。

1.2.2 細(xì)菌的生化特性鑒定

將分離純化的細(xì)菌在無(wú)菌的條件下分別進(jìn)行半固體培瓊脂、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶肉湯、賴氨酸脫羧酶肉湯、西蒙氏枸櫞酸鹽、硫化氫、尿素酶、色氨酸肉湯、MR-VP、苯丙氨酸、甘露醇、肌醇、山梨醇、蜜二糖、核糖醇、棉子糖試驗(yàn)。37℃培養(yǎng)1 d后觀察結(jié)果。

1.2.3 藥敏試驗(yàn)

無(wú)菌操作將純化培養(yǎng)的菌落接種于培養(yǎng)基中并涂勻，選用頭孢曲松、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、紅霉素、氨芐西林、阿莫西林、慶大霉素、鏈霉素、卡那霉素、多西環(huán)素、磺胺噁唑、林可霉素和青霉素共13種常用藥敏片貼在培養(yǎng)基中，于37℃下厭氧培養(yǎng)1～2 d后觀察結(jié)果，并測(cè)定抑菌圈直徑，判斷其藥敏性。

1.2.4 相關(guān)病毒分子生物學(xué)檢測(cè)

無(wú)菌采集送檢豬的血液、心臟、淋巴結(jié)、肺臟、肝臟和脾臟混合研磨，反復(fù)凍融3次，使用TaKaRa Min BEST Viral DNA＼RNA Extraction Kit Ver.5.0 試劑盒提取總的DNA/RNA，進(jìn)行豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬偽狂犬?。≒RV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）和日本乙型腦炎病毒（JEV）的PCR擴(kuò)增。反應(yīng)結(jié)束后取6 μL PCR產(chǎn)物于1.5%的1×TAE瓊脂糖凝膠中電泳檢測(cè)（90 V，35 min），用凝膠成像系統(tǒng)拍照記錄。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀及病理變化

發(fā)病豬精神沉郁，體溫升高，寒戰(zhàn)，喜鉆墊草，堆疊在一起，食欲減退，拉水樣黃黑色糞便，糞便惡臭，脫水消瘦，耳部發(fā)紫及軀體末端皮膚發(fā)紺，四肢無(wú)力呈俯臥姿勢(shì)或犬坐姿勢(shì)，肛門周圍被毛被糞便污染。經(jīng)過(guò)剖檢可見(jiàn)病豬腸系膜淋巴結(jié)腫大，大理石樣，其他淋巴結(jié)也腫大，肺臟質(zhì)地變軟（圖1）;胃脹氣、腸壁變?。▓D2）;心臟變軟（圖3）;脾腫大，堅(jiān)實(shí)似橡皮;全身各個(gè)粘膜和漿膜均有不同程度的出血斑點(diǎn)，胃腸粘膜常見(jiàn)急性卡他性炎癥;其中糞便呈黃色。

2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)及染色

接種小腸內(nèi)容物的SS培養(yǎng)基上有大量黑色菌落生長(zhǎng)（圖4），然后挑取單菌落進(jìn)行純培養(yǎng)并對(duì)其革蘭氏染色鏡檢，油鏡視野下可見(jiàn)大量革蘭氏陰性菌（圖 5），初步鑒定為沙門氏菌。

2.3 細(xì)菌的生化特性鑒定

細(xì)菌的生化特性鑒定結(jié)果與沙門氏菌生化特征吻合度較高，具體結(jié)果如下：

2.4 藥敏試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示該菌對(duì)頭孢曲松、環(huán)丙沙星、氧氟沙星敏感性較高，對(duì)紅霉素、氨芐西林、阿莫西林、慶大霉素、鏈霉素、卡那霉素、多西環(huán)素、磺胺噁唑、林可霉素、青霉素耐藥。

2.5 相關(guān)病毒分子生物學(xué)檢測(cè)

相關(guān)病毒分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，病料中檢測(cè)出PRRSVORF6 224 bp特異性條帶，測(cè)序結(jié)果與預(yù)期相符。未見(jiàn)CSFV、PRV、PCV2、JEV特異性條帶檢出（圖6）。

3 結(jié)論與討論

隨著集約化和規(guī)模化養(yǎng)殖的發(fā)展，豬的疫病混合感染感染現(xiàn)象增多。豬沙門氏菌與其他豬疫病混合感染的病例經(jīng)常被報(bào)道[9-10]。因此應(yīng)根據(jù)臨床癥狀以及實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果及時(shí)進(jìn)行確診，避免誤診而延誤治療時(shí)機(jī)并影響治療效果，給生產(chǎn)者造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失 [11]。

綜合分析該豬場(chǎng)出現(xiàn)的疫病，提出以下建議：首先對(duì)病死豬及污染物進(jìn)行無(wú)害化處理，隔離病豬，對(duì)飼養(yǎng)用具、豬舍、飼養(yǎng)用水進(jìn)行嚴(yán)格消毒;病豬治療時(shí)選擇使用經(jīng)過(guò)藥敏試驗(yàn)確定的有效抗生素，比如頭孢曲松、環(huán)丙沙星、氧氟沙星，當(dāng)發(fā)生嚴(yán)重脫水時(shí)，還要采取對(duì)癥治療，即使用止瀉劑和補(bǔ)液等;對(duì)其健康豬進(jìn)行疫苗接種，做好防疫工作。

參 考 文 獻(xiàn)：

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