• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    哈蟆油與青蛙油蛋白質(zhì)組學(xué)差異分析

    2021-09-04 07:21:42董穎張鶴張玉堯潘黛安魏星華趙大慶魯西南醫(yī)院有限公司山東聊城5300長春中醫(yī)院大學(xué)附屬醫(yī)院長春300吉林省科普服務(wù)中心長春300
    中南藥學(xué) 2021年8期
    關(guān)鍵詞:林蛙青蛙蛋白質(zhì)

    董穎,張鶴,張玉堯,潘黛安,魏星華,趙大慶(.魯西南醫(yī)院有限公司,山東 聊城 5300;.長春中醫(yī)院大學(xué)附屬醫(yī)院,長春 300;3.吉林省科普服務(wù)中心,長春 300)

    哈蟆油為蛙科動物中國林蛙Rana temporaria chensinensisDavid 雌蛙的輸卵管,為滋補藥材,具有補腎益精、健脾益胃、滋陰補腎、潤肺生津等功效。中國林蛙的輸卵管呈不規(guī)則彎曲,位于腹腔中下位兩側(cè),全長呈現(xiàn)粗細不均勻,近肺根段較細,中段漸漸加粗,近子宮段輸卵管較粗且略扁,其長度一般為體長的4 ~8 倍,質(zhì)量為體質(zhì)量的20%~26%[1];呈現(xiàn)乳白色或黃白色,干品偶帶有灰白色薄膜狀的干皮,呈脂肪樣光澤,手摸有滑膩感,質(zhì)硬且易斷;有特殊的油脂氣味和腥味,味微甘,嚼之有黏滑感;膨脹度大于55;其主要成分為蛋白質(zhì),含量約占50%以上[2]。常見的偽品黑斑蛙的輸卵管(青蛙油)外觀性狀為不規(guī)則彎曲,中間灰黑色瓣膜,管徑均一,透明;白色或黃白色,有脂肪樣光澤;質(zhì)脆易碎,手摸之稍有油脂狀潤滑感;味辛辣,嚼之麻嘴、黏牙;膨脹度大于55;其主要成分為蛋白質(zhì),含量約為47.5%[3]。在目前的研究中,偽品青蛙油與正品哈蟆油性狀上相似,不易區(qū)別,但通過顯微、薄層色譜等方法可以進行鑒別[4]。至今研究顯示哈蟆油中特異性的成分僅有1-甲基海因,但目前在青蛙油中也發(fā)現(xiàn)含有該成分[5]。本研究采用iTRAQ技術(shù)和質(zhì)譜分別建立和比較哈蟆油和青蛙油的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫,篩選兩個種屬蛙在冬眠前輸卵管中蛋白組成的差異。

    1 材料

    1.1 樣品采集

    哈蟆油的基源動物為中國林蛙長白山亞種,保護地域為吉林省長白山區(qū)域。林蛙采于吉林省蛟河市前進鄉(xiāng)(東經(jīng)127°40′18.4′,北緯43°54′20.9′)、永吉縣北大湖鎮(zhèn)(東經(jīng)126°30′14′,北緯43°27′53′)、舒蘭市上營鎮(zhèn)(東經(jīng)127°15′43.9′,北緯44°8′25.2′)、樺甸市紅石砬子鎮(zhèn)(東經(jīng)127°6′26.5′,北緯42°57′17.7′)、集安市清河村(東經(jīng)125°55′58.2′,北緯41°25′59.5′)和安圖縣三道灣鎮(zhèn)(東經(jīng)129°10′19.5′,北緯43°9′29.2′),海拔在500 ~1000 米。黑斑蛙(青蛙)采自于吉林省永吉縣北大湖鎮(zhèn)(東經(jīng)126°30′14′,北緯43°27′53′)和吉林市(東經(jīng)126°25′17′,北緯44°4′40′)兩個地區(qū),海拔在100 ~300 米。中國林蛙和黑斑蛙均經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院肖井雷副教授鑒定為正品。

    1.2 儀器與試藥

    Q Exactive 質(zhì)譜儀(Thermo 公司);AKTA Purifier 100 蛋白純化儀、數(shù)控600V 電泳儀(通用GE Healthcare 公司);5430R 型低溫高速離心機、真空離心濃縮儀(德國Eppendorf 公司);胰蛋白酶(Promega 公司);iTRAQ Reagent-8plex Multiplex Kit(美國AB SCIEX 公司);丁香酚(Sigma,純度:98%,批號:E2069)。

    2 方法[6-7]

    2.1 林蛙和黑斑蛙的輸卵管(蛙油)摘取

    分別取活蛙,沿腹部正中線解剖,取出輸卵管,去除筋膜、肉、卵等雜物,用蒸餾水反復(fù)清洗至呈乳白色或黃白色,置于陰涼干燥處晾干,研缽研磨成粉末。哈蟆油樣品:5 個產(chǎn)地各取10 只混合后準(zhǔn)確稱量100 mg 后混勻;青蛙油樣品:兩個產(chǎn)地分別取10 只混合,準(zhǔn)確稱量100 mg,混勻。

    2.2 蛙油中蛋白質(zhì)的提取和含量測定

    兩個蛙油樣品各準(zhǔn)確稱取10.0 mg,分別加入1 mL SDT 裂解液,勻漿后沸水浴5 min,超聲破碎10 min,14 000 g 室溫離心45 min,取上清液,-80℃保存??捡R斯亮藍法測定兩個蛙油樣品中蛋白質(zhì)的含量,哈蟆油蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度分別為8.83 μg·μL-1和7.09 μg·μL-1,青蛙油蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度為6.59 μg·μL-1。

    2.3 iTRAQ 定量分析

    每份樣品各取250 μg,胰酶消化,酶解后的肽段用8 標(biāo)iTRAQ 試劑中的113、114 和115 進行標(biāo)記。采用二維液相(納升流速HPLC 液相系統(tǒng)Easy nLC 和強陽離子交換液相色譜)進行分離,每份樣品經(jīng)分離后用Q-Exactive 質(zhì)譜儀進行分析[8]。

    2.4 哈蟆油與青蛙油差異蛋白質(zhì)篩選

    對哈蟆油蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫中1220 個蛋白質(zhì)組在樣本哈蟆油113(A)/REF 和114(B)/REF與青蛙油115(C)/REF 中的定量信息進行差異分析,篩選條件為比值>1.5(或比值<0.67),且P<0.05。

    2.5 生物信息學(xué)分析

    2.5.1 Gene Ontology(GO)功能注釋分析 在GO 注釋過程中,Blast 2 GO 通過比較目標(biāo)序列和比對序列的相似性、GO 條目來源的可靠性和GO有向無環(huán)圖的結(jié)構(gòu),將map 過程中提取的GO 功能條目中符合條件的條目注釋給目標(biāo)蛋白質(zhì)。

    2.5.2 WEGO 注釋分析 利用WEGO 軟件對鑒定到的差異蛋白質(zhì)的細胞學(xué)組件、生物學(xué)途徑和分子功能完成GO 注釋,比較青蛙油(C/REF)與哈蟆油(/REF)差異蛋白質(zhì)進行WEGO 分析。對GO 2 層次進行匯總。

    2.5.3 KEGG 通路注釋 利用KAAS(KEGG automatic annotation server)數(shù)據(jù)庫將目標(biāo)蛋白質(zhì)序列與KEGG GENES 數(shù)據(jù)庫中的兩棲綱蛋白質(zhì)序列進行比對,通過同源/相似蛋白質(zhì)的KO 號注釋到相關(guān)KEGG 通路上。

    3 結(jié)果

    3.1 青蛙油與哈蟆油差異蛋質(zhì)白質(zhì)篩選結(jié)果

    對青蛙油與哈蟆油中蛋白質(zhì)定量的數(shù)據(jù)進行差異比較,篩選出差異表達蛋白質(zhì)總數(shù)為55 個,其中上調(diào)的蛋白質(zhì)數(shù)為40 個(見表1),下調(diào)的蛋白質(zhì)數(shù)為15 個(見表2)。

    表1 青蛙油與哈蟆油相比上調(diào)的蛋白質(zhì)Tab 1 Up-regulated proteins in the proteomics database of OCB compared with that of ORN

    表2 青蛙油與哈蟆油相比下調(diào)的蛋白質(zhì)Tab 2 Down-regulated proteins in the proteomics database of OCB compared with that of ORN

    3.2 青蛙油中含量較高的差異蛋白質(zhì)(上調(diào)蛋白)

    參與能量代謝過程的蛋白質(zhì)包括羥酰基輔酶A脫氫酶三官能多酶復(fù)合體亞基β(HADHB)、乙酰輔酶A 合成酶(AACS)、烏頭酸水合酶(ACO1)、煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶s 同源體(NAMPT)和羥酰輔酶A 脫氫酶Ⅱ型(HSD17B10)等。參與糖代謝的蛋白質(zhì)包括半乳糖-1-磷酸尿苷酰轉(zhuǎn)移酶(GALT)、血漿a-L-巖藻糖苷酶(FUCA2)和磷酸葡萄糖變位酶(PGM1)等。參與應(yīng)激反應(yīng)的蛋白質(zhì)包括鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白a 亞基14(GNA14)、L-乳酸脫氫酶A 鏈(LDHA)、血紅素結(jié)合蛋白(HPX)和蛋白酶體亞基α-3 型(PSMA3,PSMA5)等。參與生長發(fā)育相關(guān)的蛋白質(zhì)包括LUC7-like、核孔復(fù)合物蛋白(NUP93)和高速泳動族蛋白B2(HMGB2)等。參與生物合成的蛋白質(zhì)包括核糖體蛋白(RPS26)、不均一核核糖核蛋白質(zhì)A1 樣亞型1(HNMPA1)和絲氨酸轉(zhuǎn)運RNA 連接酶(SARS1)等。參與細胞骨架形成的蛋白質(zhì)包括細絲蛋白(FLNB)和驅(qū)動蛋白重鏈(KIF)等。參與氧化還原的蛋白質(zhì)包括1,2-二羥基-3-酮-5-甲基硫戊烯雙加氧酶(ADI1)和微粒體谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶3 S 同源體(MGST3)等。參與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的蛋白質(zhì)包括腺苷脫氨酶2(ADA2)。

    3.3 哈蟆油中含量較高的差異蛋白質(zhì)(下調(diào)蛋白)

    3.4 WEGO 注釋分析結(jié)果

    3.4.1 細胞組分分析 從圖1細胞組分中可以看出青蛙油與哈蟆油比較差異蛋白質(zhì)表達體現(xiàn)在細胞、細胞器、膜、大分子復(fù)合體、膜封閉腔和胞外區(qū),分別占所有差異蛋白質(zhì)的34%、23%、16%、16%、8%和3%。

    圖1 差異蛋白質(zhì)細胞組分分析Fig 1 Cellular components of differentially expressed proteins

    3.4.2 分子功能分析 從圖2分子功能中可以看出催化活性、結(jié)合功能、結(jié)構(gòu)分子活性、酶調(diào)節(jié)活性、化學(xué)引誘物活性、載體活性、核酸結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性、抗氧化活性和分子轉(zhuǎn)導(dǎo)活性是青蛙油與哈蟆油差異蛋白質(zhì)比較集中的9 類功能,其中催化活性和結(jié)合功能類蛋白質(zhì)最多,分別占所有差異蛋白質(zhì)的43%和42%。

    圖2 差異蛋白質(zhì)分子功能分析Fig 2 Molecular function of differentially expressed proteins

    3.4.3 生物學(xué)途徑分析 從圖3生物學(xué)途徑中可以看出繁殖、免疫系統(tǒng)過程、代謝過程、細胞過程、信號、多組織過程、發(fā)育過程、生長過程、位移運動、單組織過程、刺激反應(yīng)、定位、多生物過程、生物調(diào)節(jié)和細胞成分組織/生物合成是青蛙油與哈蟆油差異蛋白質(zhì)比較集中的15 個生物學(xué)途徑,其中參與代謝過程、細胞過程、單組織過程和生物調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)數(shù)量較多,分別占所有差異蛋白質(zhì)的21%、19%、12%和10%。

    圖3 差異蛋白質(zhì)生物學(xué)途徑分析Fig 3 Biological process of differentially expressed proteins

    3.5 青蛙油與哈蟆油差異蛋白質(zhì)KEGG 代謝通路分析

    青蛙油與哈蟆油的差異蛋白質(zhì)總數(shù)為55 個,其中29 個差異蛋白質(zhì)map 到77 條KEGG 信號/代謝通路中;在這29 個差異蛋白質(zhì)中,27 個上調(diào)蛋白map 到76 條KEGG 信號通路中,兩個下調(diào)蛋白map 到8 條KEGG 信號通路中。

    與哈蟆油蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)比,青蛙油中含量較高(即上調(diào))的27 個差異蛋白質(zhì)中鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運ATP 酶亞基α1 肽(ATP1A1)參與cGMP-PKG 信號通路(cGMP-PKG signaling pathway)、唾液分泌(salivary secretion)、心肌細胞腎上腺素能信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(adrenergic signaling in cardiomyocytes)、胰島素分泌(insulin secretion)、甲狀腺激素合成(thyroid hormone synthesis)等16 個代謝過程;PGM1 參與糖酵解/糖異生途徑(glycolysis/gluconeogenesis)、磷酸戊糖途徑(pentose phosphate pathway)、半乳糖代謝(galactose metabolism)、嘌呤代謝(purine metabolism)等7 個代謝過程;Ⅰ型膠原蛋白a1 鏈(COL1A1)參與焦點黏連(focal adhesion)、ECM 受體相互作用(ECM-receptor interaction)、血小板活化(platelet activation)等6 個代謝過程;ACO1 參與三羧酸循環(huán)(citrate cycle)、乙醛酸和二羧酸代謝(glyoxylate and dicarboxylate metabolism)、原核生物固碳過程(carbon fixation pathways in prokaryotes)、碳代謝(carbon metabolism)等6 個代謝過程;HADHB 參與脂肪酸降解(fatty acid degradation),脂肪酸伸長(fatty acid elongation),纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解(valine,leucine and isoleucine degradation),苯甲酸降解(benzoate degradation)和脂肪酸代謝(fatty acid metabolism)等5 個代謝過程;LDHA 參與糖酵解/糖異生途徑(glycolysis/gluconeogenesis)、半胱氨酸和甲硫氨酸代謝(cysteine and methionine metabolism)、丙酮酸代謝(pyruvate metabolism)、丙酸代謝(propanoate metabolism)等4 個代謝過程。

    在差異蛋白質(zhì)富集分析中發(fā)現(xiàn),半乳糖代謝、氨基糖和核苷酸糖代謝(amino sugar and nucleotide sugar metabolism)均富集到3 個差異蛋白質(zhì)(GALT、PGM1、UDP2)。糖酵解/糖異生途徑富集到兩個差異蛋白質(zhì)LDHA 和PGM1。嘌呤代謝(purine metabolism)富集到兩個差異蛋白質(zhì)PNP 和PGM1。半胱氨酸和甲硫氨酸代謝富集到兩個差異蛋白質(zhì)ADI1 和LDHA。纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解富集到兩個差異蛋白質(zhì)HADHB 和HSD17B10。

    哈蟆油中含量較高(即下調(diào))的兩個差異蛋白質(zhì)包括LOC398139 protein,CD63 antigen。其中LOC398139 protein 參與三羧酸循環(huán)(citrate cycle)、乙醛酸和二羧酸代謝(glyoxylate and dicarboxylate metabolism)、原核生物固碳過程(carbon fixation pathways in prokaryotes)、氧代羧酸代謝(2-oxocarboxylic acid metabolism)和氨基酸生物合成(biosynthesis of amino acids)等6 個代謝過程。CD63 antigen 參與溶酶體(lysosome)和癌癥過程蛋白聚糖(proteoglycans in cancer)等兩個代謝過程。

    其他差異蛋白質(zhì)在KEGG 代謝通路中未被注釋到。

    4 討論與結(jié)論

    4.1 青蛙油中含量較高的差異蛋白質(zhì)與環(huán)境、生長發(fā)育的關(guān)系

    成年黑斑蛙常棲息于稻田、池溏、湖澤、河濱、水溝內(nèi)或水域附近的草叢中。一般10月開始冬眠,鉆入向陽的坡地或離水域不遠的田地、溝埂、塘埂土層30 ~40 cm 深處穴居冬眠,次年4月后出蟄[9]。冬眠前青蛙油中含量較高的差異蛋白質(zhì)(即上調(diào)成分)與黑斑蛙平時的棲息環(huán)境、冬眠環(huán)境可能存在密切關(guān)系。

    鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白(GNA14)是在膜結(jié)合受體和細胞內(nèi)效應(yīng)器之間起信號傳遞作用,可水解GTP 生成GDP,具有GTP 酶活性,在哺乳動物細胞中G 蛋白和其受體形成一個最普遍的信號系統(tǒng),在哺乳動物的各種組織中均有表達,如腦、心臟、胚胎等組織。參與調(diào)節(jié)感官感知[10]、細胞生長、激素的分泌和釋放[11]、防御物質(zhì)的信號傳導(dǎo)[12]及脂肪體中能源物質(zhì)的使用[13]。有研究表明,在低氧或缺氧的胚胎中GNA14 高表達,可調(diào)節(jié)高血壓和內(nèi)皮細胞的功能[14-15]。因此認(rèn)為GNA14 在蛙冬眠過程中調(diào)節(jié)機體機能,適應(yīng)環(huán)境方面起到重要作用。

    血紅素結(jié)合蛋白(HPX)是肝臟合成的一種急性時相反應(yīng)蛋白,在血漿中與游離的血紅素結(jié)合能力最強,廣泛參與機體多種生理和病理過程。機體內(nèi)游離的血紅素是有害的,可以破壞脂質(zhì)雙分子層,促進低密度脂蛋白轉(zhuǎn)化成具有細胞毒性的氧化產(chǎn)物[16],還可以插入紅細胞膜,縮短紅細胞的壽命,加速溶血的發(fā)生[17],HPX 可以結(jié)合和轉(zhuǎn)運有毒的游離血紅素至肝臟而發(fā)揮解毒作用。Grinberg 等[18]研究發(fā)現(xiàn)HPX 與血紅素結(jié)合后,血紅素誘導(dǎo)的氧自由基明顯減少,過氧化活性下降80%~90%,脂質(zhì)過氧化活性也顯著降低,進而達到抗氧化的作用。目前研究結(jié)果顯示HPX 還具有維持體內(nèi)鐵的穩(wěn)態(tài)[19]、保護神經(jīng)[20]等功能。在黑斑蛙冬眠過程中,高含量的HPX降解機體產(chǎn)生的毒素-血紅素,同時起到抗氧化的作用。

    羥?;o酶A 脫氫酶三官能多酶復(fù)合體亞基β(HADHB)是一種具有多功能的膜結(jié)合型蛋白酶,可以催化3 種酶活性(長鏈烯酰輔酶A 水合酶、長鏈3-羥烷基輔酶A 脫氫酶和長鏈3-?;o酶A 硫解酶),參與脂肪酸和脂質(zhì)代謝過程,在線粒體中參與長鏈脂肪酸的β氧化過程產(chǎn)生能量[21-22]。ACO1 也稱烏頭酸酶,廣泛分布于動植物和微生物中,在肝臟、腎臟、肌肉、前列腺中含量特別高。在三羧酸循環(huán)中,ACO1 為催化檸檬酸和異檸檬酸之間相互轉(zhuǎn)換的輔酶[23]。GALT具有催化、連接活性,參與半乳糖代謝過程[24]。在KEGG 代謝通路中, 筆者發(fā)現(xiàn)ATP1A1、PGM1、ACO1、HADHB、GALT 和LDHA 是青蛙油中重要的差異蛋白質(zhì),主要參與體內(nèi)的各種糖代謝、糖異生、氨基酸代謝、脂肪代謝等代謝過程。

    綜合以上青蛙油中差異的蛋白結(jié)構(gòu)、活性特點可以看出,部分蛋白質(zhì)是參與胚胎細胞生長、發(fā)育的重要物質(zhì)基礎(chǔ),部分蛋白質(zhì)在蛙冬眠過程中提供能量,是維持生命活動的重要成分,為冬眠期和翌年的排卵期做準(zhǔn)備。

    4.2 哈蟆油中含量較高的差異蛋白質(zhì)的特點與環(huán)境、生長發(fā)育的關(guān)系

    中國林蛙冬眠期主要在水下,這個特點是中國林蛙所特有的,其他種類的蛙一般都在泥土中冬眠。同時在東北中國林蛙最早結(jié)束冬眠,比黑斑蛙、蟾蜍等蛙類早20 ~30 d。本文通過比較青蛙油與哈蟆油蛋白質(zhì)組學(xué)的差異,發(fā)現(xiàn)哈蟆油中蛋白成分差異主要為a-激酶錨定蛋白13 類似蛋白、免疫球蛋白Fc 段連接蛋白和黏蛋白,且此3 類成分在哈蟆油中表達量較高,對哈蟆油的功能活性起到至關(guān)重要的作用。

    a-激酶錨定蛋白13 類似蛋白(AKAP13-like),AKAP13 包含兩個重要的結(jié)構(gòu)域(PKA 結(jié)構(gòu)域和GEF 結(jié)構(gòu)域),在許多信號傳導(dǎo)中發(fā)揮著重要的作用,能激活GTP 酶Rho,水解GTP 為GDP。AKAP13 可將PKA、PKD、PKC 多蛋白復(fù)合物錨定于細胞骨架肌動蛋白[25-26],在PKD 和Rho 通路中起著整合cAMP 信號的作用;AKAP13將PKD 與其上游激活因子PKC 連接,PKC 磷酸化PKD,使其激活,而PKA 磷酸化AKAP13,促進激活的PKD 從AKAP 復(fù)合物平臺上游離出來。AKAP13 在多個器官和組織中高表達,如脾、胸腺、外周血白細胞、骨路肌和睪丸;胎盤和肺中適度表達;而在肝、腦、小腸、結(jié)腸和前列腺癌中沒有或者少量表達[27]。目前研究顯示AKAP13 通過GEF 作用,參與心肌肥大的形成[28]。邢修業(yè)[29]研究AKAP13 在小鼠卵泡發(fā)育中的作用,發(fā)現(xiàn)AKAP13 基因敲除雜合型小鼠的生殖能力降低,表明AKAP13 可能通過作用于FSHR 信號通路下游效應(yīng)分子參與并影響FSHR信號通路,進而在小鼠卵泡發(fā)育中起至關(guān)重要的作用。免疫球蛋白Fc 段連接蛋白(IgGFc binding protein,F(xiàn)cγBP)主要在胎盤和結(jié)腸的上皮細胞表達,作為黏膜的組成部分,維持黏膜的結(jié)構(gòu)。FcγBP 類似黏蛋白,具有黏蛋白的結(jié)構(gòu)特點,同時具有免疫球蛋白連接的活性,在黏膜免疫系統(tǒng)和炎癥中具有重要的作用[30]。Kobayashi 等[31]報道FcγBP 存在于血清中,在各種自身免疫性疾病的患者中高水平表達。黏蛋白(mucin)是分布在各種管腔內(nèi)表面的高分子量糖蛋白,對上皮細胞起到重要的保護和潤滑的作用,黏蛋白中的糖鏈在維持蛋白質(zhì)的穩(wěn)定、抵抗蛋白酶水解、防止抗體識別等方面發(fā)揮重要的作用[32]。近年來,發(fā)現(xiàn)黏蛋白還參與細胞增殖的調(diào)控、受精,上皮細胞的分化、更新,調(diào)節(jié)細胞黏附、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程[33]。Mucin2、Mucin-5AC 和Mucin-5B 屬于凝膠形成型的黏蛋白,具有形成凝膠的能力,結(jié)構(gòu)中包含半胱氨酸富含區(qū)域,經(jīng)二硫鍵連接形成二聚體,因此其分子量較高不溶于水[34]。人類Mucin2(包含5179aa)有超過100 個不同寡糖修飾后形成的糖蛋白[35],糖分子產(chǎn)生一個高度異構(gòu)的黏蛋白凝膠層,形成一個天然的防御機制,在腸道內(nèi),帶電的糖鏈能有效地控制水分子,形成一個穩(wěn)定的環(huán)境保護半透膜[36]。Mucin-5B 主要在呼吸道黏膜腺體的黏液細胞中表達,在舌下腺高度表達,在頜下腺、子宮內(nèi)膜、膽囊和胰腺也有表達,有助于唾液和宮頸黏液的潤滑和彈性的作用。在胃和呼吸道上皮細胞中Mucin-5AC 通過結(jié)合吸入的微生物和微粒,隨后被黏液系統(tǒng)清除,來保護黏膜,防止感染和化學(xué)損傷[36]。當(dāng)卵子通過輸卵管時即被腺體所分泌的膠狀物所包裹,為卵提供豐富的營養(yǎng)物質(zhì),此類膠狀物多為黏蛋白[37],因林蛙剛出蟄后,溫度較低、缺乏食物等為其提供營養(yǎng)物質(zhì),輸卵管作為重要的生殖器官,分泌大量的膠狀物質(zhì),達到保護卵子的作用。以上結(jié)果提示在哈蟆油中高表達的蛋白質(zhì)主要參與免疫調(diào)節(jié)、細胞骨架形成、生殖發(fā)育等過程。

    哈蟆油本身具有高的膨脹度與其含有大量的、多種類型的凝膠型黏蛋白密切相關(guān)。黏蛋白凝膠的程度會受到各種因素的影響,包括黏蛋白自身分子量大小、糖基側(cè)鏈長短、聚合度和濃度以及外界因素如pH、離子強度的變化等。由于黏蛋白和免疫球蛋白Fc 段連接蛋白都包含大量的糖鏈結(jié)構(gòu),對于哈蟆油膨脹的能力具有重要的影響。

    4.3 結(jié)論

    中國林蛙與黑斑蛙的生活習(xí)性不同導(dǎo)致哈蟆油與青蛙油中蛋白質(zhì)含量的差異,本研究通過比較青蛙油與哈蟆油蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫的差異,篩選到差異表達蛋白質(zhì)55 個,其中上調(diào)的蛋白質(zhì)數(shù)為40 個,下調(diào)的蛋白質(zhì)數(shù)為15 個。哈蟆油中含量較高的15 差異蛋白質(zhì)主要參與免疫調(diào)節(jié)、細胞骨架形成和生殖發(fā)育等過程;而青蛙油中含量較高的40 個差異蛋白質(zhì)主要參與能量代謝、糖代謝、應(yīng)激反應(yīng)、生長發(fā)育、生物合成、細胞骨架形成、氧化還原和免疫調(diào)節(jié)等過程;其中AKAP13-like、FcγBP、MUC5AC-like、MUC、MUC5B 等15 個高表達的蛋白質(zhì)可作為哈蟆油區(qū)別于青蛙油的重要蛋白質(zhì),同時哈蟆油的特異性膨脹度可能與含量較高的黏蛋白類密切相關(guān),本文的研究結(jié)果為進一步研究哈蟆油的功效成分奠定基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    林蛙青蛙蛋白質(zhì)
    蛋白質(zhì)自由
    肝博士(2022年3期)2022-06-30 02:48:48
    “八珍”哈士蟆傳記
    婦女(2021年12期)2021-12-25 01:45:30
    人工智能與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)
    海外星云(2021年9期)2021-10-14 07:26:10
    小青蛙捉蟲
    蛋白質(zhì)計算問題歸納
    誰能叫醒小青蛙?
    林蛙油逆轉(zhuǎn)大鼠酒精性肝纖維化的作用機制
    青蛙便簽夾
    基于線粒體Cyt b和COI基因的中國林蛙系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系
    驕傲的青蛙
    啪啪无遮挡十八禁网站| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产淫片久久久久久久久 | 中国美女看黄片| 一边摸一边抽搐一进一小说| 女警被强在线播放| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 啦啦啦韩国在线观看视频| 又黄又粗又硬又大视频| 国产午夜福利久久久久久| 全区人妻精品视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲美女黄片视频| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 51午夜福利影视在线观看| 久久九九热精品免费| 性欧美人与动物交配| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲国产欧美网| 亚洲专区国产一区二区| 村上凉子中文字幕在线| 色吧在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 最新美女视频免费是黄的| netflix在线观看网站| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 日韩免费av在线播放| 色综合亚洲欧美另类图片| 九九热线精品视视频播放| 啪啪无遮挡十八禁网站| 欧美日本视频| 国产毛片a区久久久久| 999久久久国产精品视频| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲av免费在线观看| 露出奶头的视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 美女高潮的动态| 淫妇啪啪啪对白视频| 天天一区二区日本电影三级| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲精品美女久久av网站| 老鸭窝网址在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 岛国在线观看网站| 国产精品影院久久| 久久久水蜜桃国产精品网| 69av精品久久久久久| av女优亚洲男人天堂 | 国产亚洲精品久久久com| 日本黄色片子视频| 看黄色毛片网站| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲精品在线观看二区| 久久精品国产清高在天天线| 后天国语完整版免费观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 免费在线观看日本一区| 黄色成人免费大全| av天堂在线播放| 久久久久久久久久黄片| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产单亲对白刺激| 久久久久免费精品人妻一区二区| 不卡一级毛片| 黄色女人牲交| 一本一本综合久久| 久久人妻av系列| 搞女人的毛片| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 精品一区二区三区视频在线 | 麻豆成人午夜福利视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧美黄色淫秽网站| 一级毛片女人18水好多| 国产精品99久久99久久久不卡| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲无线在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 成人性生交大片免费视频hd| 国产亚洲精品一区二区www| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 国产精品 欧美亚洲| 真实男女啪啪啪动态图| 小说图片视频综合网站| 亚洲中文字幕日韩| 91在线精品国自产拍蜜月 | 午夜福利在线在线| 亚洲18禁久久av| 国产成人精品久久二区二区91| bbb黄色大片| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 黑人操中国人逼视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲中文av在线| 十八禁人妻一区二区| 天堂√8在线中文| 国产高清有码在线观看视频| aaaaa片日本免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 精品电影一区二区在线| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 午夜激情福利司机影院| 成人精品一区二区免费| 亚洲电影在线观看av| 亚洲真实伦在线观看| 成人三级黄色视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 一本久久中文字幕| 老司机午夜十八禁免费视频| 两个人看的免费小视频| 全区人妻精品视频| 国产欧美日韩一区二区三| 99在线人妻在线中文字幕| 这个男人来自地球电影免费观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 91老司机精品| 久久精品人妻少妇| 九色成人免费人妻av| 青草久久国产| 国产精品一区二区免费欧美| 高潮久久久久久久久久久不卡| 看黄色毛片网站| 麻豆成人av在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产精品av久久久久免费| 毛片女人毛片| 亚洲 欧美一区二区三区| 国内精品一区二区在线观看| 一a级毛片在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲av免费在线观看| 国产美女午夜福利| 日日夜夜操网爽| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产高清激情床上av| 亚洲国产欧美人成| 国产亚洲av嫩草精品影院| 黑人欧美特级aaaaaa片| 又紧又爽又黄一区二区| 88av欧美| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产高清videossex| 不卡av一区二区三区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产亚洲欧美98| 国产成人啪精品午夜网站| 日本熟妇午夜| 国产精品久久久人人做人人爽| 51午夜福利影视在线观看| 国产69精品久久久久777片 | 神马国产精品三级电影在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 麻豆av在线久日| 欧美中文综合在线视频| 国产视频一区二区在线看| 丰满的人妻完整版| 给我免费播放毛片高清在线观看| 天堂网av新在线| 日韩人妻高清精品专区| av在线天堂中文字幕| 无人区码免费观看不卡| 中文字幕高清在线视频| 精品久久久久久,| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美色欧美亚洲另类二区| 99热精品在线国产| 99精品在免费线老司机午夜| 国产探花在线观看一区二区| 美女黄网站色视频| 午夜福利在线在线| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 少妇丰满av| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| av欧美777| 岛国视频午夜一区免费看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品国产美女av久久久久小说| 深夜精品福利| 久久香蕉国产精品| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久久久午夜电影| 极品教师在线免费播放| 啪啪无遮挡十八禁网站| av女优亚洲男人天堂 | 真人做人爱边吃奶动态| 日本熟妇午夜| 午夜福利高清视频| 黄片小视频在线播放| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 一二三四社区在线视频社区8| 国产成人系列免费观看| 午夜免费成人在线视频| 少妇丰满av| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲无线在线观看| 日本 欧美在线| 黄色片一级片一级黄色片| 久久午夜亚洲精品久久| aaaaa片日本免费| 黄色丝袜av网址大全| 中文字幕高清在线视频| 国产精品国产高清国产av| 老汉色∧v一级毛片| 欧美在线黄色| 亚洲真实伦在线观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 一区二区三区激情视频| 国产乱人视频| 午夜福利欧美成人| 免费av毛片视频| 久久香蕉国产精品| 国模一区二区三区四区视频 | 欧美一级毛片孕妇| 九色国产91popny在线| 一本综合久久免费| 国产伦在线观看视频一区| 在线a可以看的网站| 1000部很黄的大片| 一a级毛片在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲无线在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 国产成人精品久久二区二区91| 后天国语完整版免费观看| 午夜福利成人在线免费观看| 久久久精品大字幕| 99国产精品一区二区三区| 999久久久精品免费观看国产| av天堂在线播放| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久久久久久久久久黄片| 91av网站免费观看| 99riav亚洲国产免费| 在线免费观看不下载黄p国产 | 桃红色精品国产亚洲av| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 国产成人影院久久av| 色av中文字幕| 日本一本二区三区精品| 国产毛片a区久久久久| 亚洲精品一区av在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲国产欧美人成| 一个人免费在线观看的高清视频| 午夜亚洲福利在线播放| 操出白浆在线播放| 9191精品国产免费久久| 无遮挡黄片免费观看| 欧美在线一区亚洲| 精品久久蜜臀av无| 岛国在线观看网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 一本久久中文字幕| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产高潮美女av| 成年女人永久免费观看视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 中文资源天堂在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲精华国产精华精| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久欧美精品欧美久久欧美| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美成狂野欧美在线观看| 在线看三级毛片| 少妇的丰满在线观看| 99久久精品一区二区三区| 老司机在亚洲福利影院| 国产av在哪里看| 国产av不卡久久| 免费搜索国产男女视频| av视频在线观看入口| 很黄的视频免费| 久久国产精品人妻蜜桃| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲精品一区av在线观看| 长腿黑丝高跟| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲欧美激情综合另类| 成熟少妇高潮喷水视频| 99国产精品99久久久久| 国产1区2区3区精品| 免费无遮挡裸体视频| 成人国产一区最新在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲av熟女| 国产69精品久久久久777片 | 嫩草影视91久久| 国产成年人精品一区二区| 草草在线视频免费看| 国产成人福利小说| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 中出人妻视频一区二区| 亚洲成av人片在线播放无| 国产精品综合久久久久久久免费| 最新中文字幕久久久久 | 亚洲国产看品久久| 母亲3免费完整高清在线观看| 成人一区二区视频在线观看| av欧美777| 国产亚洲精品久久久com| 中文字幕高清在线视频| 欧美一区二区国产精品久久精品| 日韩欧美在线二视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲人成网站高清观看| 一级a爱片免费观看的视频| 精品欧美国产一区二区三| 一本综合久久免费| 97超视频在线观看视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产熟女xx| 亚洲无线在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 又粗又爽又猛毛片免费看| 男女视频在线观看网站免费| 99精品在免费线老司机午夜| av中文乱码字幕在线| 日韩有码中文字幕| 岛国在线观看网站| 欧美一区二区国产精品久久精品| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 在线观看午夜福利视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲成人久久性| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美日本视频| 亚洲精品色激情综合| 久久久国产成人免费| 婷婷亚洲欧美| 亚洲熟妇熟女久久| 怎么达到女性高潮| 婷婷六月久久综合丁香| x7x7x7水蜜桃| 成人永久免费在线观看视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 又爽又黄无遮挡网站| 身体一侧抽搐| 精品久久久久久久末码| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 1024手机看黄色片| 国产毛片a区久久久久| 久久久久久久午夜电影| 91老司机精品| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 在线免费观看不下载黄p国产 | 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲精品粉嫩美女一区| 制服人妻中文乱码| 色噜噜av男人的天堂激情| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 宅男免费午夜| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 岛国在线免费视频观看| 高清在线国产一区| 精华霜和精华液先用哪个| 日韩有码中文字幕| 久久香蕉精品热| 91麻豆精品激情在线观看国产| 热99re8久久精品国产| 日韩免费av在线播放| 性色avwww在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲中文av在线| 天堂影院成人在线观看| 欧美在线黄色| 亚洲人成伊人成综合网2020| 日韩欧美精品v在线| 国产淫片久久久久久久久 | 99国产精品一区二区蜜桃av| 99精品在免费线老司机午夜| 日韩欧美三级三区| 亚洲第一电影网av| 国产私拍福利视频在线观看| 中出人妻视频一区二区| 波多野结衣高清无吗| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 精品国产乱码久久久久久男人| 免费观看精品视频网站| 99久久精品热视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 国产精品自产拍在线观看55亚洲| xxx96com| 午夜福利欧美成人| 又爽又黄无遮挡网站| 国产乱人视频| av女优亚洲男人天堂 | 91av网一区二区| 精品日产1卡2卡| 亚洲真实伦在线观看| 久久久国产成人免费| 婷婷亚洲欧美| 久久久精品欧美日韩精品| 麻豆一二三区av精品| 九色成人免费人妻av| 亚洲天堂国产精品一区在线| www日本黄色视频网| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久国产精品影院| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产精品野战在线观看| 亚洲中文av在线| 亚洲在线自拍视频| 国产精品一及| 久久伊人香网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美激情在线99| 色综合婷婷激情| 亚洲熟妇熟女久久| 色视频www国产| 欧美在线黄色| 少妇的丰满在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产真实乱freesex| 精品不卡国产一区二区三区| 精品久久久久久久末码| 国产精品国产高清国产av| 午夜福利免费观看在线| 99热精品在线国产| 最近视频中文字幕2019在线8| 成人欧美大片| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 级片在线观看| 丰满的人妻完整版| www.熟女人妻精品国产| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产亚洲精品久久久com| 久久久久久人人人人人| 精品一区二区三区视频在线 | 日本五十路高清| 成人av在线播放网站| 国产一区二区三区视频了| 久久久久九九精品影院| 中文亚洲av片在线观看爽| 一夜夜www| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产不卡一卡二| 又爽又黄无遮挡网站| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美3d第一页| av黄色大香蕉| 国产成人系列免费观看| 欧美大码av| 久久久水蜜桃国产精品网| 韩国av一区二区三区四区| 欧美激情在线99| 欧美三级亚洲精品| av片东京热男人的天堂| 亚洲片人在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美乱妇无乱码| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美极品一区二区三区四区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产亚洲精品av在线| 久久亚洲真实| 999精品在线视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日本 av在线| 久久久久久久久免费视频了| a级毛片a级免费在线| 成人国产综合亚洲| 久久久色成人| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久热在线av| 嫩草影院精品99| 激情在线观看视频在线高清| 久久久国产成人免费| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产人伦9x9x在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 免费观看的影片在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 欧美日本视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲avbb在线观看| 国产av不卡久久| 日韩国内少妇激情av| 禁无遮挡网站| 国产男靠女视频免费网站| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲精品美女久久av网站| 99国产精品一区二区三区| 国产亚洲精品久久久com| 人人妻人人澡欧美一区二区| 级片在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 久久国产精品影院| 亚洲欧美激情综合另类| 1024香蕉在线观看| 香蕉久久夜色| 青草久久国产| 丁香欧美五月| 精品国内亚洲2022精品成人| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美一区二区精品小视频在线| 精品日产1卡2卡| АⅤ资源中文在线天堂| 超碰成人久久| 最近在线观看免费完整版| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 精品久久久久久久久久免费视频| 性色av乱码一区二区三区2| 熟女电影av网| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产免费男女视频| 国产亚洲精品久久久com| 精品久久久久久,| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美日韩乱码在线| 三级国产精品欧美在线观看 | 岛国视频午夜一区免费看| 成人永久免费在线观看视频| 香蕉国产在线看| av国产免费在线观看| 99热精品在线国产| 啦啦啦观看免费观看视频高清| а√天堂www在线а√下载| 人妻夜夜爽99麻豆av| 老司机福利观看| 久久香蕉国产精品| 免费av不卡在线播放| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久中文看片网| 欧美日韩国产亚洲二区| 成年人黄色毛片网站| 欧美在线黄色| 国产 一区 欧美 日韩| 91av网站免费观看| 1000部很黄的大片| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲中文av在线| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 免费在线观看成人毛片| 美女黄网站色视频| 天天一区二区日本电影三级| 欧美日韩福利视频一区二区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 成人一区二区视频在线观看| 嫩草影院入口| 波多野结衣高清无吗| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 999久久久精品免费观看国产| 欧美丝袜亚洲另类 | 搡老妇女老女人老熟妇| 一级毛片高清免费大全| 一二三四社区在线视频社区8| 看免费av毛片| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 看黄色毛片网站| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产亚洲av嫩草精品影院| 老汉色∧v一级毛片| aaaaa片日本免费| 少妇丰满av| 久久久久久久久免费视频了| 视频区欧美日本亚洲| 不卡av一区二区三区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美日韩黄片免| bbb黄色大片| 欧美在线黄色| xxx96com| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 一本久久中文字幕| 久久精品人妻少妇| 色综合欧美亚洲国产小说| 欧美午夜高清在线| 日韩大尺度精品在线看网址| av在线天堂中文字幕| h日本视频在线播放| 国产淫片久久久久久久久 | 精品无人区乱码1区二区| 国产不卡一卡二| 久久久精品大字幕| 极品教师在线免费播放| 亚洲av五月六月丁香网| 桃红色精品国产亚洲av| 午夜视频精品福利| 国产69精品久久久久777片 | 日本黄色片子视频|