B7-H3、葡萄糖6-磷酸脫氫酶及SET8 蛋白在腎透明細胞癌中的表達及與預(yù)后的關(guān)系分析

程波，黃連飴，張海芳

安陽市人民醫(yī)院泌尿外科，河南 安陽 455000

腎透明細胞癌是泌尿系統(tǒng)中有著較高致死率的一類惡性腫瘤。據(jù)相關(guān)研究表明，其發(fā)病率、病死率均呈逐年上升趨勢，全球每年新增腎透明細胞癌患者可達210 000 例，死亡人數(shù)也高達100 000 例。在透明細胞癌的臨床治療中，由于其具有早期轉(zhuǎn)移率高、病程進展快、術(shù)后復(fù)發(fā)率高等特點，導(dǎo)致患者生存率低，治療效果不理想，預(yù)后差，因此早期診斷和有效治療是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個多基因、多因素且多階段性的綜合過程，了解腎透明細胞癌發(fā)生的相關(guān)因素，闡明發(fā)病機制可為臨床有效的靶向治療提供參考。因此，本研究分析B7-H3、葡萄糖6-磷酸脫氫酶（glucose 6-phosphate dehydrogenase，G6PD）及SET8 在腎透明細胞癌中的表達及與預(yù)后的關(guān)系，旨在為臨床腎透明細胞癌的診治積累經(jīng)驗，提高其診療效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016 年1 月至2018 年3 月安陽市人民醫(yī)院收治的經(jīng)手術(shù)后病理檢查確診為腎透明細胞癌患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查、細胞學(xué)檢查或影像學(xué)檢查確診為腎透明細胞癌；②不存在其他影響本研究的疾?。虎叟R床資料、病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病理檢查前進行過放療、化療等治療；②存在免疫系統(tǒng)或血液系統(tǒng)疾病。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入81 例腎透明細胞癌患者，其中男57 例，女24 例；年齡30～70 歲，平均（44.59±8.77）歲；TNM 分期：Ⅰ～Ⅱ期51 例，Ⅲ～Ⅳ期30 例；腫瘤直徑：≥5 cm 34 例，＜5 cm 47 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移56 例；細胞分級：G級55 例，G級26 例。

1.2 蛋白檢測方法

B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白檢測采用免疫組織化學(xué)法和蘇木精-伊紅染色，抗體均購自美國R&D公司，二抗試劑盒、磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）、二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。檢驗流程按照相關(guān)SP 試劑盒說明書所規(guī)定流程進行操作，均以PBS 代替一抗作為陰性對照。G6PD 蛋白主要表達于細胞質(zhì)內(nèi)，以細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕褐色染色為陽性；B7-H3 蛋白以細胞膜及少量細胞質(zhì)呈淡黃色染色為陽性；SET8蛋白以細胞核或細胞膜上呈現(xiàn)出淡黃色到棕黃色不等的顆粒狀染色為陽性。每5個隨機高倍鏡視野下有≥10%的染色細胞為陽性表達，＜10%為陰性表達。另選取手術(shù)治療時切除的正常組織（距腫瘤病灶邊緣3 cm，病理證實無非典型增生及腫瘤細胞）作為對照。

1.3 觀察指標(biāo)

比較不同組織中B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白陽性表達情況，并分析B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白與腎透明細胞癌預(yù)后的關(guān)系。

1.4 隨訪

在所有患者手術(shù)結(jié)束后開始進行為期2 年的隨訪，包括電話隨訪和上門隨訪，記錄患者預(yù)后情況，預(yù)后不良包括復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡等。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白陽性表達情況的比較

腎透明細胞癌組織中B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白陽性表達率均明顯高于正常組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（

P

＜0.01）。（表1）

表1 腎透明細胞癌組織及正常組織中B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白陽性表達情況的比較[n（%）]

2.2 腎透明細胞癌患者預(yù)后影響因素的單因素分析

隨訪2 年后，根據(jù)患者預(yù)后情況分為預(yù)后良好60 例，預(yù)后不良21 例。不同TNM 分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、細胞分級及B7-H3、G6PD、SET8 蛋白表達情況的腎透明細胞癌患者預(yù)后情況比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（

P

＜0.05）。（表2）

表2 腎透明細胞癌患者預(yù)后影響因素的單因素分析（n=81）

2.3 腎透明細胞癌患者預(yù)后影響因素的多因素分析

多因素分析結(jié)果顯示，腫瘤直徑≥5 cm、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、細胞分級為G級、B7-H3 陽性、G6PD 陽性、SET8 陽性均為影響腎透明細胞癌患者預(yù)后的獨立危險因素（

P

＜0.05）。（表3）

表3 腎透明細胞癌患者預(yù)后影響因素的多因素分析

3 討論

在腎細胞癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，組蛋白甲基化修飾在其中起著重要的作用。組蛋白甲基化是由組蛋白甲基化酶和去甲基化酶調(diào)節(jié)的可逆過程，因此，在臨床中組蛋白甲基化與腫瘤之間的關(guān)系一直為臨床研究重點。SET8 屬于特異性單甲基化組蛋白H4 中的賴氨酸甲基化轉(zhuǎn)移酶，參與了基因的轉(zhuǎn)錄、調(diào)控、染色質(zhì)的形成、細胞周期進程等多種生理過程。在以往文獻研究中有發(fā)現(xiàn)，在食管癌患者中SET8 明顯高表達，與食管癌患者預(yù)后有著重要的聯(lián)系。在楊艷梅等的研究中發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中SET8 也高表達，且與預(yù)后存在相關(guān)性。在本研究中，在腎透明細胞癌組織中SET8 陽性表達率為82.72%，且在預(yù)后不良患者中，其陽性表達者居多，與以往文獻研究相符。

B7-H3 作為免疫球蛋白超家族的Ⅰ型跨膜蛋白，也屬于B7 家族的新成員。

B7

-

H3

mRNA 在健康心、肝臟、前列腺、子宮、胰腺、肺部等組織中廣泛表達，但B7-H3蛋白卻未表達。B7-H3在T細胞、單核細胞、樹突狀細胞表面呈可誘導(dǎo)性表達。B7-H3可刺激T細胞增殖和細胞毒性T細胞的活性，在B7-H3 共刺激后γ干擾素（interferon-γ，IFN-γ）、白細胞介素-8（interleukin-8，IL-8）、IFN-α?xí)置谠黾?，在使用樹突狀細胞的B7-H3 進行反義核苷酸處理后逆轉(zhuǎn)。在洪正東等的研究中提出B7-H3 可保護腫瘤細胞避免被自然殺傷細胞溶菌，在腫瘤的逃逸中有重大意義。在腎癌組織中存在著大量的浸潤性T淋巴細胞，與患者的生存率息息相關(guān)，因此可了解到，腎癌潛在地破壞了患者體內(nèi)抗腫瘤免疫機制。在本研究中，腎透明細胞癌組織中B7-H3 高表達，與張萌萌等報道的結(jié)果相符。且B7-H3 為影響腎透明細胞癌患者預(yù)后的獨立危險因素。G6PD 在腫瘤細胞中的表達及其活性一直是臨床研究的重點，在許多研究中均證明其與多種腫瘤惡性程度存在一定的聯(lián)系，其可刺激腫瘤組織生長。在以往文獻研究中，免疫組織化學(xué)法檢測結(jié)果顯示，在41 例腦膠質(zhì)瘤組織中G6PD 陽性表達率為56.10%，在正常組織中其陽性表達率為0%，二者比較存在明顯的差異；而其與腫瘤分級也存在明顯相關(guān)性，惡性程度越高的患者G6PD 表達越高。在肝癌、胃癌等多種腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移中G6PD 也有重要的作用。在白宏剛等研究中，通過分析腎透明細胞癌的分子代謝特征發(fā)現(xiàn)其代謝改變涉及多種途徑，其中戊糖磷酸途徑、三羧酸循環(huán)、脂肪酸合成等途徑均與G6PD 有關(guān)，同時也發(fā)現(xiàn)，在預(yù)后較差的腎透明細胞癌患者中

G6PD

等相關(guān)基因的表達明顯增加。在本研究中，腎透明細胞癌組織中G6PD 陽性表達率為72.84%，且其陽性表達為預(yù)后的獨立危險因素，與上述文獻研究結(jié)果相符。

Cui 等研究也指出，G6PD 在腎透明細胞癌中異常激活，可上調(diào)細胞周期蛋白D1 表達，有促進腫瘤細胞增殖的作用。在鞠林成等的研究中發(fā)現(xiàn)，B7-H3 與腎透明細胞癌的轉(zhuǎn)移和進展有關(guān)，提示其為幫助腫瘤細胞逃脫免疫的重要機制，對患者預(yù)后有著重要影響。SET8 可影響基因轉(zhuǎn)錄與細胞活動，與WNT 信號通路激活密切相關(guān)，并可能對腫瘤血管生成有重要影響。在本研究中三者均為預(yù)后的重要影響因素，結(jié)合以往文獻分析，提示以三者作為靶點進行干預(yù)性治療，可增加機體T細胞抗腫瘤免疫能力，增加免疫治療效果，對提高患者生存率有積極影響。

綜上所述，B7-H3、G6PD 及SET8 蛋白在腎透明細胞癌中均高表達，在臨床中檢測三者表達水平對患者預(yù)后評估有重要參考價值。