12 種殺菌劑對(duì)花生褐斑病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

謝瑾卉,裴 雪,林 英,臧超群,劉曉舟,梁春浩

(遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所,遼寧 沈陽 110161)

花生(ArachishypogaeaL.)富含豐富的油脂與蛋白質(zhì),是全球最主要的5 大油料作物之一,也是我國(guó)最主要的油料作物、經(jīng)濟(jì)作物。近年來,由于種植結(jié)構(gòu)調(diào)整及花生在國(guó)際貿(mào)易中的優(yōu)勢(shì)地位,我國(guó)花生種植面積不斷擴(kuò)大,農(nóng)民對(duì)花生種植的積極性不斷提高,2019 年我國(guó)花生種植面積為465 萬hm2[1～2]。我國(guó)花生7 大主產(chǎn)區(qū)分別位于黃河流域、長(zhǎng)江流域、東南沿海、云貴高原、黃土高原、東北和西北。東北地區(qū)的花生種植主要分布于遼寧省與吉林省,東北產(chǎn)區(qū)的花生因質(zhì)量好、黃曲霉毒素含量遠(yuǎn)低于其他產(chǎn)區(qū)而受到國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)的認(rèn)可[3～4]。然而,花生葉部病害的連年發(fā)生與流行對(duì)遼寧地區(qū)花生產(chǎn)業(yè)的發(fā)展造成嚴(yán)重的制約及巨大的經(jīng)濟(jì)損失,由落花生尾孢(CercosporaarachidicolaHori)引起的花生褐斑病是遼寧花生生產(chǎn)上最主要的葉部病害之一,受害花生一般可減產(chǎn)10%～20%,嚴(yán)重地塊可減產(chǎn)40%以上。

目前,使用化學(xué)藥劑進(jìn)行花生褐斑病的防治是最常用且有效的方法。沈一等通過對(duì)采集自泰興地區(qū)的花生葉斑病病原菌進(jìn)行室內(nèi)抑菌試驗(yàn),篩選出多菌靈、苯醚甲環(huán)唑等殺菌劑對(duì)花生褐斑病菌具有較強(qiáng)的抑制效果[5]。溫少華等對(duì)采集自江西的花生褐斑病菌進(jìn)行了室內(nèi)毒力測(cè)定及田間藥效試驗(yàn),認(rèn)為咪酰胺具有更好的田間防治效果,適用于花生褐斑病發(fā)生嚴(yán)重的地區(qū)[6]。朱茂山等對(duì)遼寧地區(qū)花生褐斑病的田間防治進(jìn)行了研究,結(jié)果表明己唑醇對(duì)褐斑病的防治效果最好且經(jīng)過該藥劑處理后花生增產(chǎn)作用明顯[7]。結(jié)合以上室內(nèi)毒力測(cè)定及田間防效試驗(yàn)結(jié)果,本試驗(yàn)首次選取12 種不同類型及作用方式的殺菌劑原藥對(duì)遼寧地區(qū)花生褐斑病菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定,對(duì)殺菌劑合理、交替使用可能性進(jìn)行研究,避免過量使用某種殺菌劑對(duì)環(huán)境造成污染,防止因連續(xù)使用同種殺菌劑造成病原菌耐藥性的產(chǎn)生,為花生褐斑病的綠色高效防治奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

花生褐斑病病原菌采自遼寧地區(qū)田間自然發(fā)病的花生葉片,從具有典型癥狀的花生葉片病斑處挑取花生褐斑病菌分生孢子器置于無菌水中震蕩3 min,將分生孢子懸浮液涂布于水瓊脂平板上,用接種針挑取單孢置于馬鈴薯葡萄糖(PDA)培養(yǎng)基上,26 ℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng),經(jīng)觀察菌落和孢子形態(tài)結(jié)合ITS 序列比對(duì),鑒定為落花生尾孢,采用科赫氏法則進(jìn)行回接驗(yàn)證。將該病原菌轉(zhuǎn)接于PDA 平板上,待其長(zhǎng)出菌絲后,用接種針挑取菌落轉(zhuǎn)接于PDA 斜面上,4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 供試藥劑

供試12 種藥劑見表1。

1.3 藥劑濃度設(shè)置

根據(jù)前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果設(shè)置本試驗(yàn)12 種殺菌劑濃度(表2)。

表2 供試藥劑室內(nèi)毒力測(cè)定濃度設(shè)置

1.4 毒力測(cè)定

采用紙碟法,依據(jù)抑菌圈的大小測(cè)定殺菌劑的殺菌效果。用解剖針挑取花生褐斑病菌菌落,置于2 ml 離心管中,加入無菌水1.5 ml,充分震蕩混勻,用移液器吸取菌懸液500 μl 置于燕麥培養(yǎng)基(OA)中央,用涂布棒均勻涂布整個(gè)平板,以上操作重復(fù)3 次,將1 500 μl 菌懸液均勻涂布于整個(gè)平板,25 ℃恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)15 d。用無菌解剖刀于超凈工作臺(tái)中刮取病菌的分生孢子,置于裝有少量無菌水的50 ml 無菌燒杯中,靜置20 min,配制成濃度為1×105個(gè)/ml 孢子懸浮液。取孢子懸浮液150 μl 滴于PDA 平板中央,用涂布棒均勻涂布至整個(gè)培養(yǎng)基表面。殺菌劑藥碟為直徑為5 mm 的滅菌濾紙片,每片吸取藥液量為10 μl。將藥碟置于涂滿孢子懸浮液的PDA 平板中央,每處理3 次重復(fù),以加入10 μl 無菌水的紙碟為對(duì)照,置于26 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d。采用十字交叉法測(cè)量抑菌圈的直徑。利用SPSS23.0 軟件計(jì)算毒力回歸曲線方程,EC50以及相關(guān)系數(shù)R2。

2 結(jié)果與分析

12 種殺菌劑對(duì)花生褐斑病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果見表3。95%咯菌腈的抑制效果最好,EC50為0.211 μg/ml,其次為95%己唑醇、95%丙環(huán)唑、97%戊唑醇、97%咪鮮胺,EC50均<1 μg/ml,97.5%吡唑醚菌酯、98.6%嘧菌酯、95% 苯醚甲環(huán)唑的抑菌效果較好 EC50為 1.047～2.649 μg/ml。95%甲基硫菌靈、98%百菌清、96%代森錳鋅的抑菌效果略低,EC50為12.25～25.53 μg/ml。

表3 供試藥劑室內(nèi)毒力測(cè)定濃度設(shè)置

3 結(jié)論與討論

本研究采用菌碟法測(cè)定了花生褐斑病菌對(duì)三唑類殺菌劑(戊唑醇、丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、己唑醇)、苯丙咪唑類殺菌劑(甲基硫菌靈)、有機(jī)硫類殺菌劑(代森聯(lián)、代森錳鋅)、鄰苯二甲腈類有機(jī)合成殺菌劑(百菌清)、甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑(嘧菌酯、吡唑醚菌酯)、吡咯類殺菌劑(咯菌腈)、咪唑類殺菌劑(咪鮮胺)7 類型12 種殺菌劑的室內(nèi)毒力,結(jié)果表明,試驗(yàn)選取的12 種殺菌劑均對(duì)花生褐斑病菌具有一定的毒力。95%咯菌腈>95%己唑醇>95%丙環(huán)唑>97%戊唑醇>97%咪鮮胺>97.5%吡唑醚菌酯>98.6%嘧菌酯>95%苯醚甲環(huán)唑>95%甲基硫菌靈>98%百菌清>96%代森錳鋅>87%代森聯(lián)。其中,吡咯類殺菌劑95%咯菌腈的抑菌能力最強(qiáng),EC50為0.211 μg/ml;三唑類殺菌劑的抑菌能力較強(qiáng),95%己唑醇、95%丙環(huán)唑、97%戊唑醇的EC50分別為0.264、0.369、0.428 μg/ml。

花生褐斑病也稱花生早斑病,遼寧地區(qū)該病害通常于6 月中旬開始發(fā)生,高溫高濕天氣有利于該病害的發(fā)生和蔓延。7～8 月如遇連續(xù)陰雨潮濕高溫天氣,則病情發(fā)展迅速。通常在花生連作重插地塊,該病害發(fā)生較為嚴(yán)重,過量施用氮肥、土壤肥力不足、種植密度過大、病殘?bào)w清除不及時(shí)的地塊發(fā)病均較重[8～10],此外花生品種間對(duì)褐斑病的抗性也存在一定差異[11]。因此,花生褐斑病的田間防治應(yīng)采取農(nóng)業(yè)防治與化學(xué)防治相結(jié)合的手段,既選取抗病品種、適時(shí)播種、合理密植、與其他作物輪作、增施磷鉀肥、及時(shí)清除病殘?bào)w等,開花初期,花生褐斑病輕微發(fā)病階段,應(yīng)及時(shí)噴施殺菌劑。加強(qiáng)田間管理、及時(shí)噴施殺菌劑是花生褐斑病防治的關(guān)鍵。本試驗(yàn)選取的殺菌劑原藥為花生褐斑病的田間防治提供了一定依據(jù),下一步將對(duì)各藥劑的田間防效進(jìn)行驗(yàn)證。