精甲霜靈與嘧菌酯復(fù)配對馬鈴薯晚疫病的室內(nèi)活性及田間藥效試驗研究

金 立，李 文

(安徽豐樂農(nóng)化有限責任公司，合肥 231604)

馬鈴薯作為當今世界第四大糧食作物，在世界糧食生產(chǎn)體系中占據(jù)重要地位。我國是馬鈴薯生產(chǎn)大國，種植面積和產(chǎn)量占到世界25%左右，均為世界第一[1-2]。2015年國家正式提出馬鈴薯主糧化戰(zhàn)略[3]，故馬鈴薯增產(chǎn)和病蟲草害防控對保障我國糧食安全具有重要意義[4]。馬鈴薯晚疫病由疫霉菌引起，是馬鈴薯生產(chǎn)中危害嚴重的真菌病害，發(fā)病一般年份，可造成馬鈴薯減產(chǎn)20%～30%，發(fā)病嚴重時，馬鈴薯減產(chǎn)達50%以上[5-8]。由于馬鈴薯晚疫病抗藥性的產(chǎn)生及農(nóng)民施藥的隨機性，目前尚無完全有效的防治措施。

精甲霜靈(metalaxyl-M)屬于苯基酰胺類，為高效、低毒、低殘留、持效期長、施藥方式多樣化、保護與治療效果均優(yōu)異的廣譜內(nèi)吸殺菌劑，可以作莖葉處理、種子處理和土壤處理，對霜霉菌、疫霉菌、腐霉菌等引起的作物病害有顯著的防治效果。嘧菌酯(azoxystrobin)是線粒體呼吸抑制劑，即通過抑制細胞色素b和C1間電子轉(zhuǎn)移而抑制線粒體的呼吸。其殺菌譜廣，對晚疫病等真菌病害有良好的活性[9-10]。精甲霜靈和醚菌酯的作用機制不同，二者混配可延緩抗藥性的產(chǎn)生。

為進一步明確精甲霜靈和嘧菌酯聯(lián)合對馬鈴薯晚疫病作用效果和復(fù)配后的田間應(yīng)用效果，作者采用室內(nèi)生物測定方法開展了精甲霜靈與嘧菌酯及其不同配比組合對馬鈴薯晚疫病病原菌的聯(lián)合毒力以及田間藥效試驗，為藥劑開發(fā)提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 室內(nèi)配方篩選試驗

1.1.1 供試靶標

馬鈴薯晚疫病病原菌(Phytophthora infestans)，由安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理研究室分離、純化、保存并提供。

1.1.2 試驗藥劑

95%嘧菌酯原藥，河北威遠生物化工有限公司提供；92%精甲霜靈原藥，浙江禾本科技有限公司提供。

1.1.3 儀器設(shè)備

FA1004A型電子天平(上海力辰儀器科技有限公司)；生物培養(yǎng)箱(常州金壇良友儀器有限公司)；可控日光溫室(12 h/12 h光暗交替、光照強度8 000～30 000 lx、溫度 15～26 ℃，相對濕度 65%～80%)，系青州暉耀溫室工程有限公司建。

1.1.4 試驗方法[11-12]

參照中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準則推薦的平皿法(NY/T 1156.2—2006)。步驟如下：⑴ 室內(nèi)用黑麥培養(yǎng)基(黑麥50 g，瓊脂20 g，去離子水1 000 mL )培養(yǎng)馬鈴薯晚疫病病原菌。⑵ 藥劑配置：在預(yù)備試驗的基礎(chǔ)上，稱取0.105 3 g嘧菌酯原藥，用丙酮溶解后再用無菌水溶液在100 mL容量瓶中定容，配制成1 000 mg/L嘧菌酯母液；稱取0.108 7 g精甲霜靈原藥，用丙酮溶解后再用無菌水溶液在100 mL容量瓶中定容，配制成10 00 mg/L精甲霜靈母液。⑶ 藥劑處理：制作黑麥培養(yǎng)基，按照倍比稀釋法制成含藥平板。在無菌操作條件下，量取150 mL預(yù)先融化的滅菌培養(yǎng)基加入無菌錐形瓶中，待培養(yǎng)基冷卻至50～60 ℃后量取0.96 mL精甲霜靈母液加入培養(yǎng)基中，充分搖勻后量取75 mL含藥培養(yǎng)基等量倒入4個直徑為9 cm的培養(yǎng)皿中，制成濃度為6.4 mg/L的含藥平板，然后再量取75 mL培養(yǎng)基加入剩余的75 mL含藥培養(yǎng)基中，搖勻后量取75 mL含藥培養(yǎng)基倒入4個培養(yǎng)皿中，制成濃度為3.2 mg/L的含藥平板，然后按同樣方法制成濃度為1.6、0.8、0.4 mg/L的含藥平板。同樣，量取0.6 mL嘧菌酯母液加入培養(yǎng)基中配制成4、2、1.0、0.5、0.25 mg/L梯度濃度的含藥平板。另外，按照嘧菌酯與精甲霜靈的有效成分之比為1∶2、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1的配比分別配制成藥劑濃度為4、2、1.0、0.5、0.25 mg/L的含藥平板。每個處理4次重復(fù)，設(shè)無菌水溶液對照。⑷ 接種與培養(yǎng)：將培養(yǎng)好的晚疫病病原菌在無菌條件下，用直徑為5 mm的滅菌打孔器自菌落邊緣截取菌餅，用接種器接種于含藥平板中央，菌絲面朝上。接種后蓋上蓋子，置于培養(yǎng)箱中，在培養(yǎng)溫度為(25±2) ℃，相對濕度 85%～95%的條件下培養(yǎng)。⑸ 調(diào)查：視空白對照中菌絲生長情況，用卡尺測量并記錄每個接種點菌落長度和寬度，以長、寬平均值表示病斑直徑(單位mm)。相關(guān)計算公式為：

式中：I為菌絲生長抑制率；D0為空白對照菌落增長直徑；Dt為藥劑處理菌落增長直徑。然后用DPS軟件統(tǒng)計求毒力回歸方程、各藥劑的EC50、EC90及95%的置信限及混配劑的共毒系數(shù)(CTC)，選擇最佳比例。

復(fù)配劑的共毒系數(shù)(CTC)≥120表現(xiàn)為增效作用；CTC≤80表現(xiàn)為拮抗作用；80＜CTC＜120表現(xiàn)為相加作用。

1.2 田間藥效試驗

根據(jù)室內(nèi)配方篩選的結(jié)果，選取增效系數(shù)最高的配比配制成30%精甲霜靈·嘧菌酯懸乳劑。用精甲霜靈、嘧菌酯單劑作為對照開展田間藥效試驗驗證。

1.2.1 試驗用地概況

試驗設(shè)在甘肅省靖遠縣北灘鎮(zhèn)東寧村，屬黃灌區(qū)，海拔1 682 m，地膜覆蓋高壟栽培，前茬作物為玉米，馬鈴薯種植時間為2017年4月18日，穴距30 cm，壟上行距45 cm，壟間行距75 cm，種植前施農(nóng)家肥30 t/hm2、過磷酸鈣0.60 t/hm2、復(fù)合肥0.45 t/hm2。施藥時馬鈴薯處于開花結(jié)薯期，周圍作物為馬鈴薯及玉米。

1.2.2 作物和試驗對象

試驗對象為馬鈴薯晚疫病。試驗作物為馬鈴薯，品種為克新6號。

1.2.3 試驗藥劑

30%精甲霜靈·嘧菌酯懸乳劑、50%嘧菌酯水分散粒劑都為安徽豐樂農(nóng)化有限責任公司生產(chǎn)；35%精甲霜靈乳油，安徽豐樂農(nóng)化有限責任公司自配。以噴清水為空白對照。

1.2.4 藥劑試驗設(shè)計

試驗共設(shè)6個處理，分別為30%精甲霜靈·嘧菌酯懸乳劑 300、450、600 mL/hm2(有效成分用量90、135、180 g/hm2)，對照藥劑35%精甲霜靈乳油129 mL/hm2(有效成分用量45.15 g/hm2)、50%嘧菌酯水分散粒劑180 mL/hm2(有效成分用量90 g/hm2)，清水對照。每個處理4個小區(qū)，小區(qū)面積30 m2，各個小區(qū)隨機排列。

1.2.5 藥劑施用

馬鈴薯晚疫病發(fā)病初期分小區(qū)均勻噴霧，每公頃每次用藥液量為 900 L。試驗藥劑 30%精甲霜靈·嘧菌酯懸乳劑各處理小區(qū)每次用藥量依次為1.08、1.62、2.16 mL，對照藥劑50%嘧菌酯水分散粒劑 0.65 g，35%精甲霜靈乳油各小區(qū)用藥量為0.46 mL，每小區(qū)用水量2.7 kg。分別于2017年7月17日、7月24日上午9:00～10:30點各施藥1次。施藥時馬鈴薯處于開花結(jié)薯期，馬鈴薯晚疫病為發(fā)生初期。

1.2.6 藥效調(diào)查

第1次施藥前(7月17日)調(diào)查病情基數(shù)，第2次藥前(7月24日，即第1次藥后7 d)，第2次藥后7 d (7月31日)、第2次藥后10 d (8月3日)分別進行第2次、第3次、第4次調(diào)查。每小區(qū)對角線5點取樣，每點選2株，調(diào)查主莖上全部葉片馬鈴薯晚疫病發(fā)生情況，確定發(fā)病等級。

馬鈴薯晚疫病分級標準：0級：無病斑；1級：病斑面積占整個葉面積的5%以下；3級：病斑面積占整個葉面積的 6%～10%；5級：病斑面積占整個葉面積的11%～20%；7級：病斑面積占整個葉面積的21%～50%；9級：病斑面積占整個葉面積的50%以上。

1.2.7 藥效計算方法[13]

用下式計算病指和防效：

式中：CK0為空白對照區(qū)施藥前病情指數(shù)；CK1為空白對照區(qū)施藥后病情指數(shù)；PT0為藥劑處理區(qū)施藥前病情指數(shù)；PT1為藥劑處理區(qū)施藥后病情指數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)配方篩選試驗結(jié)果

分別將嘧菌酯、精甲霜靈及其混配采用上述方法對馬鈴薯晚疫病病原菌進行毒力測定并進行統(tǒng)計分析，其結(jié)果見表1。由表1中數(shù)據(jù)可見，嘧菌酯、精甲霜靈 5個不同的配比混用的共毒系數(shù)在113.97～143.55，配比4∶1的混用表現(xiàn)相加作用，其余配比混用對馬鈴薯晚疫病具有增效作用。其中，嘧菌酯與精甲霜靈以有效成分質(zhì)量比為 2∶1混用時，共毒系數(shù)最高，為143.55，增效作用最大。

表1 精甲霜靈、嘧菌酯及其不同配比混用對馬鈴薯晚疫病病原菌毒力測定結(jié)果

室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，兩藥劑復(fù)配用于防治馬鈴薯晚疫病是可行的，也是必要的。

2.2 田間藥效試驗結(jié)果

試驗結(jié)果如表 2所示，試驗藥劑 30%精甲霜靈·嘧菌酯懸乳劑制劑用量300、450、600 mL/hm2第1次藥后7 d防效分別為72.8%、76.5%和78.8%，第2次藥后7 d防效分別為81.0%、84.6%和86.7%，第2次藥后10 d防效仍分別達到79.7%、83.4%和85.3%。試驗藥劑 30%精甲霜靈·嘧菌酯懸乳劑300 mL/hm2與450 mL/hm2處理間防效差異極顯著，450 mL/hm2與600 mL/hm2處理間防效差異顯著；試驗藥劑 30%精甲霜靈·嘧菌酯懸乳劑 600 mL/hm2處理防效高于對照藥劑 50%嘧菌酯水分散粒劑180 g/hm2且差異極顯著，試驗藥劑450 mL/hm2處理防效略高于對照藥劑 50%嘧菌酯水分散粒劑180 g/hm2但差異不顯著，試驗藥劑300 mL/hm2處理防效則顯著低于對照藥劑50%嘧菌酯水分散粒劑180 g/hm2。試驗藥劑30%精甲霜靈·嘧菌酯懸乳劑制劑量450 mL/hm2和600 mL/hm2處理防效高于對照藥劑 35%精甲霜靈乳油 129 mL/hm2且差異極顯著，試驗藥劑制劑量300 mL/hm2處理防效略高于對照藥劑35%精甲霜靈乳油129 mL/hm2但差異不顯著。

表2 30%精甲霜靈·嘧菌酯懸乳劑防治馬鈴薯晚疫病藥效試驗結(jié)果

3 小結(jié)與討論

室內(nèi)藥效配方篩選測定結(jié)果表明，精甲霜靈與嘧菌酯按1∶2比例混配時，對馬鈴薯晚疫病病原菌增效系數(shù)在所有配比中最高，且其生產(chǎn)成本也較低，可大大降低勞動力成本，在田間推廣具有較好的市場前景。

田間試驗結(jié)果說明30%精甲霜靈·嘧菌酯懸乳劑對馬鈴薯晚疫病具有良好的防效，制劑用量300、450、600 mL/hm2處理第2次藥后10 d的防效均達到79%以上。該藥劑在試驗劑量范圍內(nèi)對馬鈴薯安全，可在生產(chǎn)中大面積推廣使用。此藥劑應(yīng)在晚疫病發(fā)病初期以 450～600 mL/hm2噴霧，施藥間隔期7～10 d，連續(xù)2～3次，對馬鈴薯晚疫病有較好的防治效果。