ALDH2基因G487A位點(diǎn)多態(tài)性與2型糖尿病患者腦梗死風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系*

王少津，許麗娃，吉家釵

（海口市人民醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)，海南?？?70208）

2 型糖尿病是由胰島素分泌不足或胰島素抵抗引起的血糖升高疾病，若血糖濃度長(zhǎng)期無(wú)法控制，會(huì)引起心、腦、腎的嚴(yán)重并發(fā)癥[1]。2 型糖尿病有很多慢性并發(fā)癥，其中腦梗死較常見(jiàn)[2]，嚴(yán)重影響患者身心健康。ALDH2 是一種ALDH 同工酶，位于線(xiàn)粒體內(nèi)，是催化乙醛等多種醛類(lèi)物質(zhì)氧化代謝的關(guān)鍵酶[3]。而乙醇作為一種神經(jīng)麻醉劑，可引發(fā)心率失常，降低腦血流量，與腦梗死的發(fā)生有關(guān)。有報(bào)道稱(chēng)，ALDH2基因多態(tài)性是急性腦梗死的危險(xiǎn)因素之一[4]，但ALDH2基因多態(tài)性與2 型糖尿病患者腦梗死風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系研究較少。本研究探討2 型糖尿病患者腦梗死風(fēng)險(xiǎn)與ALDH2基因多態(tài)性的關(guān)系，旨在對(duì)其發(fā)生腦梗死的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月—2020年1月?？谑腥嗣襻t(yī)院收治的116 例2 型糖尿病患者為研究對(duì)象，根據(jù)是否發(fā)生腦梗死分為腦梗死組71例和非腦梗死組45例。腦梗死組男性42 例，女性29 例；年齡50～79 歲，平均（64.16±6.82）歲。非腦梗死組男性24 例，女性21 例；年齡50～78 歲，平均（63.24±7.36）歲。兩組患者性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批，患者及家屬知情并簽訂知情同意書(shū)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)①符合2 型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②符合腦梗死相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，并經(jīng)CT 證實(shí)。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)①合并惡性腫瘤；②自身免疫性疾?。虎壑囟雀?、腎功能異常；④冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ㄒ韵潞?jiǎn)稱(chēng)冠心?。⑿募」Ｋ赖燃膊　?/p>

1.3 主要試劑與儀器

DNA 快速抽提試劑盒（上海喬羽生物科技有限公司，貨號(hào)：QY-MY296J），基因組DNA 擴(kuò)增試劑盒（上海機(jī)純實(shí)業(yè)有限公司，貨號(hào)：JC-A78139）。ExF24086V 和分光光度儀（Nanodrop 2000）購(gòu)自美國(guó)賽默飛世爾科技有限公司，CFX96 qRT-PCR 儀（德國(guó)Bio-Rad 公司）。

1.4 觀察指標(biāo)

記錄所有研究對(duì)象的吸煙史、飲酒史等資料，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)患者血清甘油三酯（Triglyceride, TG）、總膽固醇（total cholesterol, TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoproteincholesterol, LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（highdensity lipoprotein-cholesterol,HDL-C）水平。

1.5 基因組DNA提取及擴(kuò)增

收集所有患者抗凝血液標(biāo)本，常溫解凍，嚴(yán)格按血液基因組DNA 快速抽提試劑盒說(shuō)明操作，提取外周血基因組DNA。ALDH2基因多態(tài)性位點(diǎn)G487A 引物根據(jù)Gen bank 公布序列用Primer 5.0 生物軟件設(shè)計(jì)。采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-RELP） 對(duì)ALDH2基因進(jìn)行分型。PCR 反應(yīng)體系：滅菌雙蒸水14.2 μl，10×PCR 緩沖液2 μl，dNTP 1.6 μl，Taq 酶0.2 μl，DNA 模板1 μl，正反向引物各0.5 μl。PCR 反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性3 min，95℃變性30 s，60℃退火45 s、72℃延伸30 s，共計(jì)35 次循環(huán)，72℃繼續(xù)延伸10 min。結(jié)束后離心并純化產(chǎn)物。G487A正向引物序列：5′-GTCAACTGCTATGATGTGTTTGG-3′；反向引物序列：5′-CCACCAGCAGACCCTCAAG-3′，長(zhǎng)度200 bp。由蘇州吉瑪生物技術(shù)有限公司提供目的因片段測(cè)序，判斷ALDH2基因的多態(tài)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比或率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)；影響因素的分析用多因素Logistic 回歸模型。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

腦梗死組與非腦梗死組性別、年齡、飲酒及吸煙比例、HDL-C 水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；兩組TC、TG、LDL-C 水平比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），腦梗死組高于非腦梗死組。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者一般資料比較

2.2 Hardy-Weinberg平衡定律檢驗(yàn)

根據(jù)Hardy-Weinberg 平衡定律，非腦梗死組與腦梗死組ALDH2基因G487A 位點(diǎn)基因型的期望值和觀察值均符合遺傳平衡定律（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)結(jié)果

2.3 ALDH2基因G487A位點(diǎn)多態(tài)性分析

兩組ALDH2基因G487A 位點(diǎn)GG 型比例比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），腦梗死組低于非腦梗死組；兩組AG 型、AA 型比例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），腦梗死組高于非腦梗死組。兩組ALDH2基因G487A 位點(diǎn)A 等位基因頻率分布比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），腦梗死組高于非腦梗死組。見(jiàn)表3。

表3 ALDH2基因G487A位點(diǎn)多態(tài)性分析 例（%）

2.4 2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死的影響因素分析

以2 型糖尿病患者是否發(fā)生腦梗死為因變量，以TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALDH2基因G487A位點(diǎn)野生GG 型、雜合子AG 型、純合子突變AA型為自變量，進(jìn)行多因素Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示：TG[=2.396（95%CI：1.029，5.531）]、LDL-C[=2.512（95% CI：1.012，3.238）]、ALDH2基因G487A 位點(diǎn)（以野生GG 型為參照）雜合子AG 型[=3.107（95% CI：1.456，6.634）]、純合子突變AA型[=3.464（95% CI：1.594，7.528）]是2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 2型糖尿病患者發(fā)生腦梗死的多因素Logistic回歸分析參數(shù)

續(xù)表4

3 討論

腦梗死發(fā)病率近年來(lái)不斷攀升，其發(fā)生與遺傳、環(huán)境等因素相關(guān)[7]。2 型糖尿病患者腦部出現(xiàn)明顯的血液循環(huán)障礙，腦組織缺血性壞死是發(fā)生腦梗死的病變基礎(chǔ)[8]。ALDH2與心肌缺血性損傷和腦缺血性損傷有關(guān)。已有研究發(fā)現(xiàn)，ALDH2基因多態(tài)性是2 型糖尿病患者并發(fā)冠心病的影響因素[9]。但ALDH2基因多態(tài)性是否影響2 型糖尿病發(fā)生腦梗死仍未有定論。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，ALDH2基因及其基因突變與2 型糖尿病發(fā)生腦梗死風(fēng)險(xiǎn)越來(lái)越受到關(guān)注。

ALDH2是乙醛脫氫酶家族的重要成員，位于人類(lèi)第12 號(hào)染色體上（12q24.2），其有13 個(gè)外顯子，在外顯子12 中有一個(gè)突變位點(diǎn)，G→A，可使整個(gè)分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，導(dǎo)致ALDH2 喪失催化活性。ALDH2 是乙醇的重要代謝酶，主要分布在線(xiàn)粒體中，在乙醛氧化成乙酸的過(guò)程中起非常重要的作用，ALDH2等位基因的突變使第504 位谷氨酸變?yōu)橘?lài)氨酸[10]。機(jī)體無(wú)法降解乙醇是心、腦血管疾病的主要誘因之一，其在血管疾病的發(fā)生中扮演著重要角色，隨著全球飲酒人數(shù)不斷增加，酒精相關(guān)性疾病發(fā)生率逐年提升[11]。乙醇在人體代謝存在個(gè)體差異。有研究發(fā)現(xiàn)，ALDH2基因多態(tài)性與肝炎、肝硬化、酒精性心肌病及其他酒精相關(guān)疾病有關(guān)[12-14]。有研究發(fā)現(xiàn)，ALDH2基因多態(tài)性與心血管疾病相關(guān)[15]。吳和弟等[16]研究發(fā)現(xiàn)，ALDH2基因型多態(tài)性與老年2 型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄及其嚴(yán)重程度均有密切關(guān)系。侯經(jīng)遠(yuǎn)等[17]調(diào)查中國(guó)南方客家人群發(fā)現(xiàn)ALDH2基因AG/AA 基因型可增加該群體急性心肌梗死發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)性。劉春苗等[18]研究發(fā)現(xiàn)ALDH2基因檢測(cè)結(jié)果分為3 種，GG 型、AG型和AA 型，H 型高血壓腦梗死組患者AA/AG 型及A 等位基因的頻率明顯高于H 型高血壓患者的非腦梗死組患者，說(shuō)明A 等位基因可能增加H 型高血壓腦梗死的危險(xiǎn)。Hardy-Weinberg 平衡定律分析顯示本研究樣本具有群體遺傳學(xué)代表性。本研究結(jié)果顯示，2 型糖尿病腦梗死組患者AA/AG 型及A 等位基因的頻率高于2 型糖尿病非腦梗死組患者，提示2 型糖尿病患者腦梗死與ALDH2基因多態(tài)性有關(guān)。鐘偉清等[4]研究發(fā)現(xiàn)腦梗死患者血清TC、TG、LDL-C 水平顯著高于非腦梗死者。本研究結(jié)果表明，腦梗死組2 型糖尿病患者TC、TG、LDL-C 水平高于非腦梗死組，提示TC、TG、LDL-C 可能參與2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死。多因素Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，TG、LDL-C、ALDH2基因G487A位點(diǎn)雜合子AG 型、純合子AA 型突變是2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示A 等位基因可能是2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死的危險(xiǎn)因素。

綜上所述，ALDH2基因?qū)Χ鄳B(tài)性與2 型糖尿病患者發(fā)生腦梗死有關(guān)。但本研究是小樣本量研究，可能結(jié)果存一定的偏倚性，仍需進(jìn)一步擴(kuò)大地區(qū)和樣本進(jìn)行深入探討。