氣相色譜法測定大米中多種有機磷農(nóng)藥殘留量

孟慶順

（淮安市食品藥品檢驗所，江蘇 淮安 223300）

中國是世界上稻谷種植歷史最悠久、水稻遺傳資源最豐富的國家之一，是世界上已知栽培稻起源地，水稻是中國最主要的糧食作物之一，由于其生長周期短，生長環(huán)境高溫多濕，易生蟲害，噴灑殺蟲劑是必不可少的。有機磷具有殺蟲譜較寬、殺蟲方式多樣化，可滿足多方面需要、抗性產(chǎn)生較慢，對作物較安全等優(yōu)點，是目前中國使用最廣泛、用量最大的一類殺蟲劑，例如甲基嘧啶磷和甲基毒死蜱都是廣譜性速效有機磷殺蟲劑，兼有熏蒸作用，既能噴灑，也能作糧庫熏蒸劑用，防治糧谷害蟲，對玉米象、赤擬谷盜和谷蠹成蟲等均有效［1-5］。而甲基嘧啶磷的熏蒸活力至少與四氯化碳相等，能消滅隱蔽性儲糧害蟲的幼蟲，這點是其他谷物保護劑做不到的。

農(nóng)藥是水稻種植過程中必不可少的投入品，對農(nóng)藥制造者和使用者來說，毒性大、見效快的農(nóng)藥就是好藥［6］。隨著農(nóng)藥的廣泛使用、超量使用甚至濫用引發(fā)的食品安全、環(huán)境污染等諸多問題已引起社會公眾的高度關(guān)注和政府的高度重視。中國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2019年11月發(fā)布了最新的禁限用農(nóng)藥名錄。目前，甲胺磷、克線磷、甲基硫環(huán)磷、治螟磷、特丁硫磷等農(nóng)藥被列入禁用名錄，預(yù)計未來一段時間內(nèi)，隨著風險評估的引入和國家對安全、高效、經(jīng)濟農(nóng)藥的鼓勵和支持，會有越來越多高風險農(nóng)藥產(chǎn)品被列為禁限用農(nóng)藥［7，8］。對于農(nóng)藥殘留檢測人員來說，禁限用農(nóng)藥名錄的發(fā)布有可能導致禁限用農(nóng)藥替代品的超范圍超限量使用，所以在日常檢測中要格外注意，農(nóng)藥殘留是食品安全中比較敏感且備受關(guān)注的因素。農(nóng)藥禁限用的提出，不但能夠推進中國種植技術(shù)的發(fā)展，而且能提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全水平。

大米中有機磷主要來源于水稻種植時噴灑的農(nóng)藥和糧庫熏蒸殺蟲時的農(nóng)藥殘留，有機磷農(nóng)藥通過生物富集和食物鏈進入人體和動物體，對人的危害作用主要是抑制乙酰膽堿酯酶，使乙酰膽堿積聚，引起毒蕈堿樣癥狀、煙堿樣癥狀以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，嚴重時可因肺水腫、腦水腫、呼吸麻痹而死亡［9-11］。因此，為了從源頭上保證食品安全，預(yù)防可能存在的風險，讓老百姓吃上放心糧，建立大米中多成分有機磷農(nóng)藥殘留的高效檢測方法很有必要。根據(jù)GB 2763-2019《食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》［1］標準規(guī)定，敵敵畏、滅線磷、硫線磷、治螟磷、特丁硫磷、二嗪磷、除線磷、甲胺磷、甲基毒死蜱、甲基嘧啶磷、嘧啶磷、喹硫磷、甲基硫環(huán)磷、硫環(huán)磷、苯線磷15種有機磷農(nóng)藥殘留量涉及到10個檢測標準如GB/T 5009.20-2003《食品中有機磷農(nóng)藥殘留量的測定》、GB 23200.113-2018《食品安全國家標準植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》、SN/T 2324-2008《進出口食品中抑草磷、毒死蜱、甲基毒死蜱等33種有機磷農(nóng)藥殘留量的檢測方法》，除線磷和嘧啶磷在GB 2763-2019標準中沒有相應(yīng)的限量規(guī)定，無對應(yīng)的檢測方法，特丁硫磷、甲基硫環(huán)磷和哇硫磷在GB 2763-2019標準中都是臨時限量值，但特丁硫磷無相應(yīng)的檢測方法，喹硫磷有相應(yīng)的檢測方法，甲基硫環(huán)磷參照NY/T 761-2008標準。原國家質(zhì)檢總局發(fā)布的《2014版國家食品安全監(jiān)督抽檢實施細則》規(guī)定了大米中喹硫磷殘留量作為必檢項目和原國家食藥總局發(fā)布的《2018版國家食品安全監(jiān)督抽檢實施細則》規(guī)定了大米中甲基嘧啶磷殘留量作為必檢項目。所以對大米中有機磷檢測方法進一步研究探討很有必要。筆者在試驗中利用安捷倫7890B氣相色譜FPD+檢測器，不僅檢測結(jié)果重現(xiàn)性好，而且樣品前期處理簡單，樣品直接用二氯甲烷溶解，過濾，濃縮，丙酮定容，用氣相專用小柱凈化，干擾物質(zhì)少，分析時間短，15種有機磷農(nóng)藥分離效果很好，實際應(yīng)用效果良好，是定量檢測大米中15種有機磷農(nóng)藥殘留量的理想方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

安捷倫7890B氣相色譜儀，配有FPD+檢測器（磷濾光片，7693液體自動進樣器和150位進樣盤）。

丙酮、二氯甲烷（色譜純）；15種有機磷農(nóng)藥標樣濃度均為100μg/mL，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；有機相針式濾器（尼龍），100只/罐，13 mm，0.22 μm，上海安譜實驗科技有限公司；中性氧化鋁，層析用，200～300目，300℃活化4 h備用。

1.2 色譜條件

色譜柱為DB-1701毛細管柱（30 m×0.32 mm×0.25μm）；FPD+檢測器300℃，進樣口溫度220℃，柱溫箱100℃保持0 min，5℃/min升溫至220℃保持18 min；后升溫至250℃運行，載氣為高純氮；柱流速1.0 mL/min。不分流進樣，進樣量1μL。

1.3 標準曲線

用移液槍分別準確移取敵敵畏、滅線磷、硫線磷、治螟磷、特丁硫磷、二嗪磷、除線磷（0.01、0.02、0.04、0.06、0.10 mL）、甲胺磷、甲基毒死蜱、甲基嘧啶磷、嘧啶磷、喹硫磷（0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mL）、甲基硫環(huán)磷、硫環(huán)磷、克線磷（0.06、0.10、0.15、0.20、0.24 mL）標準溶液于10 mL容量瓶中，以丙酮稀釋定容，配成敵敵畏、滅線磷、硫線磷、治螟磷、特丁硫磷、二嗪磷、除線磷標準溶液濃度為0.1、0.2、0.4、0.6、1.0μg/mL和甲胺磷、甲基毒死蜱、甲基嘧啶磷、嘧啶磷、喹硫磷標準溶液為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/mL及甲基硫環(huán)磷、硫環(huán)磷、克線磷0.6、1.0、1.5、2.0、2.4μg/mL混標溶液，有機磷濃度與峰面積成正比，利用安捷倫7890B脫機狀態(tài)工作站，完成15種有機磷農(nóng)藥的標準曲線繪制。

1.4 試樣制備及測定

準確稱取混合均勻樣品10.00 g（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入20 mL二氯甲烷和0.5 g中性氧化鋁，常溫下振蕩提取30 min，高速離心5 min（8 000 r/min），樣液用濾紙過濾于蒸發(fā)皿中，殘渣再用20 mL二氯甲烷沖選，一并過濾于同一蒸發(fā)皿中，在40℃水浴鍋上濃縮至近干，用丙酮定容至1 mL，用0.22μm氣相濾頭過濾于進樣瓶中，待測。同時做空白試驗，樣品的提取操作均在通風櫥中進行。

在試驗條件下，標準品和樣品色譜圖見圖1、圖2。

圖2 樣品色譜

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線、相關(guān)性和檢出限

按試驗方法測定標準系列溶液，在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)呈線性。從工作站可以得出，0.1μg/mL敵敵畏、0.2μg/mL甲胺磷、0.10μg/mL滅線磷、0.1μg/mL硫線磷、0.10μg/mL治螟磷、0.10μg/mL特丁硫磷、0.10μg/mL二嗪磷、0.10μg/mL除線磷、0.20μg/mL甲基毒死蜱、0.20μg/mL甲基嘧啶磷、0.20μg/mL嘧啶磷、0.20μg/mL喹硫磷、0.60μg/mL甲基硫環(huán)磷、0.60μg/mL苯線磷、0.60μg/mL硫環(huán)磷信號噪聲比分別為15.5、40.5、28.2、16.8、70.9、22.0、32.1、14.2、15.0、10.7、12.0、10.8、14.5、13.6、12.5，逐級稀釋相應(yīng)的標準濃度分別至0.02、0.015、0.015、0.02、0.005、0.015、0.01、0.025、0.04、0.07、0.05、0.07、0.15、0.15、0.15μg/mL時工作站得出的信號噪聲比為3.0左右，此時濃度是15種有機磷相對應(yīng)的最低檢測濃度，在10 g大米中進樣量1μL時15種有機磷相對應(yīng)的檢測限（3S/N）分別為2、1.5、1.5、2、0.5、1.5、1、2.5、4、7、5、7、15、15、15μg/kg?；旌蠘艘河脷庀嗌V進行分析，以峰面積對質(zhì)量濃度作線性回歸分析，工作站中的校正表得出有機磷的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)結(jié)果見表1。表明該方法靈敏度高、線性良好，完全滿足標準規(guī)定的要求。

9.746 min—0.1μg/mL敵敵畏；11.779 min—0.2μg/mL甲胺磷；18.354 min—0.10μg/mL滅線磷；19.095 min—0.1μg/mL硫線磷；19.744 min—0.10μg/mL治螟磷；21.159 min—0.10μg/mL特丁硫磷；21.388 min—0.10μg/mL二嗪磷；23.299 min—0.10μg/mL除線磷；23.958 min—0.20μg/mL甲基毒死蜱；24.992 min—0.20μg/mL甲基嘧啶磷；26.671 min—0.20μg/mL嘧啶磷；29.116 min—0.20μg/mL喹硫磷；31.758 min—0.60μg/mL甲基硫環(huán)磷；33.983 min—0.60μg/mL克線磷；34.690 min—0.60μg/mL硫環(huán)磷

2.2 方法的回收率和精密度

準確稱量大米（已測得此大米樣的有機磷殘留是硫線磷、治螟磷、特丁硫磷、除線磷，其余本底值為空白）10 g共5份于50 mL離心管中，迅速加入0.1、0.2、0.5 mL混合標樣（最高濃度）。按“1.4”方法進行測試，平行測定5次，被測樣品加標回收率和精密度見表2，表明測定結(jié)果準確可靠。若將溶劑濃縮至干后再定容或水浴鍋溫度過高（高于50℃），則回收率偏低，可能是有機磷蒸發(fā)所致，因此需注意濃縮時液體體積和水浴時的溫度。

表2 回收率測定結(jié)果（n=5）

3 結(jié)論

采用該方法對大米中15種有機磷農(nóng)藥殘留量進行測定，采用外標法，濃縮定容時采用了分離度較好的試劑丙酮，取得了理想的回收率；檢測時程序升溫縮短了檢測時間，并且處理步驟簡單，試劑用量小。農(nóng)藥殘留檢測是一種微量檢測，該方法檢出限低，能滿足樣品中待檢成分濃度方面的要求；通過對樣品的加標回收和樣品中目標物質(zhì)的反復(fù)多次驗證，測試結(jié)果表明，該方法精密度和準確度高、靈敏度好，完全滿足標準GB2763-2019《食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》要求。