新生抗原癌癥疫苗研究進(jìn)展

許銀銀，顧宙輝，錢 海*

1 中國藥科大學(xué) 藥物科學(xué)研究院，南京 211198；2 上海復(fù)星星泰醫(yī)藥科技有限公司，上海200120

癌癥疫苗利用腫瘤抗原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生持久和特異性免疫應(yīng)答。腫瘤抗原根據(jù)特異性又可分為腫瘤相關(guān)抗原和新生抗原[1，2]。腫瘤相關(guān)抗原是指在腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞中都可能存在的抗原分子，因此容易引發(fā)中樞和外周耐受反應(yīng)[3～6]，導(dǎo)致疫苗的接種效率變低，且有可能造成自身免疫性（autoimmunity）疾病。新生抗原是僅存在于癌細(xì)胞上的蛋白質(zhì)片段，是腫瘤的特異性，在正常細(xì)胞中不表達(dá)，因此安全性高，能最大限度地降低不良反應(yīng)和毒副作用，且新生抗原不會(huì)引發(fā)中樞耐受反應(yīng)[7，8]。這些特性使新生抗原成為免疫療法中的有效靶標(biāo)[9～12]。因此，開發(fā)靶向新生抗原的癌癥疫苗意義重大。本文對(duì)新生抗原癌癥疫苗的發(fā)展歷程、常見劑型、制備過程、遞送策略及臨床應(yīng)用進(jìn)行概述，以期為后續(xù)的研究提供參考。

1 發(fā)展歷程

新生抗原癌癥疫苗的研發(fā)歷時(shí)數(shù)十年，但是發(fā)展緩慢。1988 年，Plaen D 等利用cDNA 文庫篩選，在小鼠腫瘤模型中發(fā)現(xiàn)了第一個(gè)可被T 細(xì)胞識(shí)別的新生抗原；1991 年，van der Bruggen P 等用基因克隆技術(shù)發(fā)現(xiàn)人類第一個(gè)黑色素瘤特異性抗原MAGE-1；2015 年，Rose-nberg 團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)KRAS（其是一類鼠類肉瘤病毒癌基因,是人體最難攻克的致癌突變）突變也能產(chǎn)生新抗原；2017 年3 月，Khodadoust M 等發(fā)現(xiàn)人類B 淋巴瘤中存在豐富的MHC Ⅱ類新生抗原，抗原肽可與MHC Ⅱ新抗原結(jié)合形成MHC Ⅱ——抗原肽復(fù)合物，然后被免疫細(xì)胞識(shí)別以引發(fā)免疫反應(yīng)；2017 年7 月，德國Loquai C 教授利用新抗原制備了RNA 疫苗，發(fā)現(xiàn)患者全部能產(chǎn)生免疫反應(yīng)；哈佛大學(xué)Catherine J.Wu 教授制備了新抗原的肽疫苗，成功治愈了黑色素瘤；2020 年武漢華大吉諾因生產(chǎn)的靶向新抗原自身免疫T 細(xì)胞的注射液（NEO-T 注射液）獲國家藥監(jiān)局臨床實(shí)驗(yàn)許可。疫苗發(fā)展歷程見圖1。

圖1 新生抗原癌癥疫苗發(fā)展歷程

2 新生抗原制備的疫苗形式

新生抗原疫苗的主要?jiǎng)┬椭饕兴姆N：樹突狀細(xì)胞（DC細(xì)胞）疫苗、病毒載體疫苗、肽疫苗和核酸疫苗[13，14]。

2.1 DC 細(xì)胞疫苗

DC 細(xì)胞有兩種類型：未成熟DC 和成熟DC，在腫瘤抗原的刺激下，未成熟的DC 細(xì)胞會(huì)吸收抗原轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓腄C 細(xì)胞（見圖2）。成熟的DC 細(xì)胞的特征在于趨化因子受體（例如CCR7）、促炎細(xì)胞因子、共刺激分子（CD54，CD80 和CD86）、免疫蛋白體、MHC Ⅰ類和MHC Ⅱ類分子的上調(diào)，吞噬能力降低，抗原加工和呈遞能力增強(qiáng)，向淋巴組織遷移能力增強(qiáng)，刺激B 和T 細(xì)胞能力的增加，從而引發(fā)免疫反應(yīng)，更好地發(fā)揮抗腫瘤的作用。新抗原DC 疫苗以誘導(dǎo)和增強(qiáng)DC 細(xì)胞的這種強(qiáng)免疫特性為出發(fā)點(diǎn)，旨在通過激活機(jī)體的免疫反應(yīng)達(dá)到殺死腫瘤的目的。

圖2 DC 細(xì)胞抗腫瘤機(jī)制

新生抗原DC 疫苗制備思路：①新生抗原篩選；②體外分離、純化DC 細(xì)胞；③新生抗原刺激DC 細(xì)胞；④未成熟的DC 細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓腄C 細(xì)胞；⑤成熟的DC 細(xì)胞回輸?shù)交颊唧w內(nèi)。新生抗原DC 疫苗能夠安全有效地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，能明顯地改善患者的總體存活率[15]。德國Frank Gansauge 的團(tuán)隊(duì)制備了LANEX-DC 疫苗，已有治愈肺癌、膠質(zhì)瘤患者的實(shí)例。但是，DC 細(xì)胞疫苗的發(fā)展也面臨一些障礙：首先，DC 細(xì)胞在血液中存在濃度較低，所以DC細(xì)胞的分離與純化存在困難；其次，DC 細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基極為敏感，培養(yǎng)的DC 細(xì)胞存在較大的差異性。

2.2 病毒載體疫苗

病毒樣顆粒（Virus-like particle，VLP）因具有與天然病毒相似的結(jié)構(gòu)（見圖3、圖4）而具有抗原性，因缺乏遺傳物質(zhì)而不具有感染性；因此可有效交聯(lián)B 細(xì)胞上的特異性受體，即使在沒有佐劑的情況下也能有效誘導(dǎo)B 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)；還可以觸發(fā)T 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，以刺激免疫應(yīng)答增強(qiáng)疫苗功效[16]。腺病毒是最常用的病毒疫苗載體。目前腺病毒使用較多的為E1 或E3 基因缺失的第一代腺病毒。

圖3 病毒的結(jié)構(gòu)

圖4 病毒樣顆粒的結(jié)構(gòu)

病毒載體疫苗的制備：①新生抗原篩選；②病毒載體的制備；③新生抗原使用佐劑加載到病毒樣顆粒內(nèi)部；④病毒載體疫苗回輸?shù)襟w內(nèi)。由于病毒載體疫苗缺乏靶向性且易被吞噬清除，大大限制了病毒載體疫苗的發(fā)展。目前，研究較多的針對(duì)新型冠狀病毒的重組病毒載體疫苗，它是以病毒作為載體，將抗原基因重組到病毒基因組中，借助病毒將抗原導(dǎo)入到人體內(nèi)。在Ⅰ期/Ⅱ期臨床實(shí)驗(yàn)中，中國研制的非復(fù)制型5 型腺病毒（Ad5）與英國研制的AZD1222 腺病毒載體疫苗（ChAdOx1）均表現(xiàn)出較高的安全性與較強(qiáng)的免疫反應(yīng)活性。

2.3 DNA 疫苗

DNA 疫苗的免疫機(jī)理是把編碼抗原蛋白的基因插入到含真核表達(dá)系統(tǒng)的載體上，再將載有外源基因的載體導(dǎo)入到動(dòng)物或人體內(nèi)，來引發(fā)機(jī)體內(nèi)的抗腫瘤免疫反應(yīng)。DNA 疫苗具有許多優(yōu)點(diǎn)：能夠有效誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答、生產(chǎn)相對(duì)簡單、生產(chǎn)成本低[17]。利用同一載體即可表達(dá)多種抗原。但是，DNA 疫苗存在中樞和外周免疫耐受的問題。

Duperret EK 等[18]報(bào)道了一種能夠靶向多種抗原的DNA 疫苗，這種疫苗主要通過電穿孔的方式遞送，可以誘導(dǎo)MHC-Ⅰ類限制性CD8+T 細(xì)胞的免疫應(yīng)答，能產(chǎn)生強(qiáng)大的免疫激活能力，從而使腫瘤特異性T 細(xì)胞殺死腫瘤細(xì)胞。在一項(xiàng)臨床試驗(yàn)中，Norell 及其同事使用了DNA 質(zhì)粒疫苗與低劑量的IL-2（白細(xì)胞介素-2）和GM-CSF（粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子）一起給藥，以治療乳腺癌患者，發(fā)現(xiàn)疫苗能夠誘導(dǎo)長期的免疫應(yīng)答反應(yīng)。Vaccibody 公司研制的DNA 疫苗（VB10.NEO），通過利用患者自身的腫瘤特異性新抗原對(duì)患者進(jìn)行個(gè)性化治療，能夠誘導(dǎo)強(qiáng)烈的新抗原特異性免疫應(yīng)答。

2.4 mRNA 疫苗

mRNA 疫苗主要有兩種類型：常規(guī)的mRNA 疫苗和自擴(kuò)增的mRNA 疫苗。mRNA 疫苗具有許多優(yōu)勢：安全性高，不存在感染或插入誘變風(fēng)險(xiǎn)；可在體內(nèi)降解；可通過使用各種修飾途徑和不同的遞送方法來調(diào)節(jié)其體內(nèi)半衰期；生產(chǎn)速度快，是最有前途的疫苗平臺(tái)[19]。但是，mRNA 疫苗也存在一些缺陷：mRNA 疫苗不穩(wěn)定，注射之后很容易被代謝清除；mRNA 具有較大的尺寸、較強(qiáng)的親水性、較多的負(fù)電荷，造成了其在細(xì)胞膜上難以被動(dòng)擴(kuò)散，因此需要有效的策略將mRNA 遞送至靶細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)[20]。

Wolff 等，使用mRNA 疫苗平臺(tái)，證明小鼠肌肉注射編碼基因的mRNA 疫苗能夠誘導(dǎo)免疫應(yīng)答；5 年后，Conryet RM等[21]，用編碼癌胚抗原（CEA）的mRNA 注射到小鼠體內(nèi)，其表現(xiàn)明顯的抗CEA 抗體反應(yīng)，由此而開發(fā)了第一種mRNA癌癥疫苗；德國Loquai C 教授，利用新生抗原制備了RNA疫苗，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)13 名患者均在接種疫苗后有了免疫反應(yīng)。

2.5 肽疫苗

與其他種類的抗原疫苗相比，肽疫苗具有幾個(gè)優(yōu)勢：穩(wěn)定性較好、容易合成、成本效率高[22]、副作用較小[23]。最重要的是，肽抗原不易誘發(fā)過敏或者自身免疫反應(yīng)。已有幾例有關(guān)肽疫苗的報(bào)道：Schumacher T 等合成了含有IDHI（R132H）的新抗原多肽疫苗，與小鼠的神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的MHC Ⅱ分子結(jié)合，發(fā)現(xiàn)肽疫苗能夠有效的誘導(dǎo)免疫反應(yīng)[24]。奧特等合成了多達(dá)20 種新抗原的長肽疫苗，在黑色素瘤患者臨床試驗(yàn)中取得了較好的效果。哈佛大學(xué)Catherine J.Wu 教授，合成了新抗原肽疫苗，成功治愈了黑色素瘤。但是，多肽疫苗的發(fā)展也面臨著一些挑戰(zhàn)：由于多肽疫苗具有較低的免疫原性且容易通過酶促反應(yīng)被降解，因此需要正確的遞送方式[25]。

為解決肽疫苗免疫原性低的問題，常需要使用佐劑增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的特異性免疫應(yīng)答。常用的佐劑有明礬、乳劑（AF03、MF59）、Toll 樣受體激動(dòng)劑（AS04 中單磷酰酯A、AS01中QS-21）。還可以用肽疫苗與其他免疫療法相結(jié)合的方法增強(qiáng)肽疫苗的免疫原性，如肽疫苗與免疫檢查點(diǎn)阻斷劑組合克服了肽疫苗免疫原性低的問題，并誘導(dǎo)更強(qiáng)的抗腫瘤反應(yīng)[26]。

3 新生抗原的篩選

腫瘤新生抗原的篩選是一個(gè)復(fù)雜的過程，主要有3 種篩選方法應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注（見圖5）。

圖5 新生抗原的篩選方法

方法A：對(duì)正常細(xì)胞和腫瘤組織的DNA 進(jìn)行全外顯子組測序，鑒定出腫瘤組織的突變位點(diǎn)[1，12]。然后通過正交驗(yàn)證或RNA 測序（RNA-seq）評(píng)估突變位點(diǎn)等位基因的表達(dá)[27]。再通過計(jì)算機(jī)軟件預(yù)測新生抗原與HLA 結(jié)合的親和力大小[28]，篩選出來與HLA 親和力較高的新生抗原合成多肽，通過監(jiān)測IFN-γ、PD-1 等能反映T 細(xì)胞活化的共刺激標(biāo)志物，來鑒定多肽體外的免疫反應(yīng)活性[29]。有不同的預(yù)測算法和軟件用于預(yù)測或模擬MHC/新生抗原結(jié)合能力：NetMHC、NetChop 和NetCTL，可用于抗原加工和肽轉(zhuǎn)運(yùn)過程中抗原表位的預(yù)測[30]。HLAMiner、Polysolver 和Optiptype 能夠分別基于NGS 數(shù)據(jù)和WES 數(shù)據(jù)確定HLA 分型結(jié)果[31]。

方法B：串聯(lián)小基因構(gòu)建體的方法。利用串聯(lián)基因技術(shù)，可以同時(shí)表達(dá)多個(gè)多肽分子，有效延長肽鏈長度，提高多肽的穩(wěn)定性。具體的做法是先合成了串聯(lián)小基因（TMG）構(gòu)建體，然后將其作為體外轉(zhuǎn)錄（IVT）RNA 的模板。再將這些IVT TMG RNA 中的每一個(gè)單獨(dú)轉(zhuǎn)染到自體抗原呈遞細(xì)胞中，然后與TIL 共培養(yǎng)，以確定TIL 是否識(shí)別突變的抗原[32]。串聯(lián)小基因可以電穿孔到自體APC 中。無論采用方法A 或者方法B，都不需要建立患者特異性腫瘤細(xì)胞系，可以使用不同來源的T 細(xì)胞來篩選新生抗原反應(yīng)性T 細(xì)胞[33]。

方法C：基于數(shù)據(jù)庫或文獻(xiàn)的方式，鑒定出腫瘤細(xì)胞的特異性突變位點(diǎn)，然后的步驟可以按照方法A 或者方法B 進(jìn)行。

4 新生抗原疫苗的遞送方式

4.1 直接注射IVT mRNA

mRNA 疫苗相比其他類型的新生抗原疫苗具有很多優(yōu)勢：直接以經(jīng)皮注射的方式把體外轉(zhuǎn)錄mRNA（IVT mRNA）注入LN（結(jié)內(nèi)注射），能夠增加抗原提呈細(xì)胞（antigen presenting cell，APC）對(duì)新生抗原的捕獲量，從而可以有效誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)。Sahin 的團(tuán)隊(duì)用編碼多表位的合成mRNA疫苗，治療晚期黑色素瘤患者,發(fā)現(xiàn)直接注射IVT mRNA 不僅能提高翻譯效率，而且能增強(qiáng)DC 對(duì)MHC Ⅰ類和Ⅱ類分子的抗原呈遞。由于內(nèi)在的佐劑能力，這些IVT mRNA 還通過Toll 樣受體7（TLR7）信號(hào)傳導(dǎo)途徑促進(jìn)DC 成熟。因此能夠有效激發(fā)T 細(xì)胞的免疫應(yīng)答。IVT mRNA 是將遺傳信息傳遞到活細(xì)胞中的理想載體，其主要用途之一是將蛋白質(zhì)遞送到活細(xì)胞中。Zhou X 等[34]通過引入IVT mRNA，將重鏈抗體（VHH）或納米體的可變結(jié)構(gòu)域快速遞送到了活細(xì)胞，通過在活細(xì)胞中表達(dá)其IVT mRNA，擴(kuò)展了納米體/VHH 的應(yīng)用。

4.2 體外脈沖DC 疫苗

用特定抗原脈沖或者信使mRNA 轉(zhuǎn)染DC 可以制備新生抗原疫苗[35]。Joshi A 等[36]不僅證明了用趨化因子標(biāo)記RNA脈沖的DC 能增強(qiáng)抗腫瘤免疫力，也指出了將RNA 轉(zhuǎn)染到DC 中的方法。但體外脈沖DC 疫苗成本較高，勞動(dòng)強(qiáng)度大，并且需要高技能的技術(shù)人員，這極大地限制了其臨床的應(yīng)用。

4.3 生物材料輔助新生抗原疫苗的遞送

生物材料可以保護(hù)抗原免于降解，并能調(diào)節(jié)APC 的功能，已被廣泛用于疫苗遞送。Zhu G 等[37]，研發(fā)出了自組裝的DNA-RNA 納米膠囊（iDR-NC），該納米材料能將DNACpG 和短發(fā)夾RNA（shRNA）以及腫瘤特異性抗原轉(zhuǎn)移到淋巴的抗原呈遞細(xì)胞（APC）中，引發(fā)特異性外周CD8+T 細(xì)胞的免疫應(yīng)答并明顯抑制腫瘤的生長。Zhu G 等[38]還將埃文思藍(lán)（EB）加入到抗原分子中，設(shè)計(jì)了新型納米疫苗（被命名為AlbiVax）。EB 能與人的白蛋白結(jié)合完成自組裝，有助于增強(qiáng)免疫反應(yīng)。Luo M 等[39]開發(fā)了響應(yīng)性納米疫苗，這種納米疫苗可根據(jù)體內(nèi)的pH 值變化產(chǎn)生響應(yīng)信號(hào)，能夠?qū)崿F(xiàn)抗原的交叉呈遞，從而更好地發(fā)揮抗腫瘤效果。Démoulins T 等[40]采用了可生物降解的運(yùn)載工具來保護(hù)自擴(kuò)增復(fù)制RNA（RepRNA）、促進(jìn)DC 輸送。他們將RepRNA 封裝到殼聚糖納米顆粒中，可有效地將RepRNA 遞送至DC 并誘導(dǎo)體內(nèi)免疫反應(yīng)。

5 新生抗原疫苗的臨床進(jìn)展

根據(jù)clinical trials.gov 網(wǎng)站的統(tǒng)計(jì)，樹突狀（DC）細(xì)胞疫苗研究最多，截止到2020 年8 月份，共開展了230 項(xiàng)樹突狀細(xì)胞的研究，其中95 項(xiàng)已完成臨床試驗(yàn)。其次，研究較多的為DNA 疫苗，共進(jìn)行了206 項(xiàng)研究，已完成臨床試驗(yàn)的有89 項(xiàng)。部分新生抗原疫苗的臨床開展情況見表1。

表1 部分新生抗原疫苗臨床開展情況

肽疫苗、RNA 個(gè)性化癌癥疫苗已經(jīng)在臨床試驗(yàn)中取得了成功。德國Ugur Sahin 團(tuán)隊(duì)通過WES 和RNA 測序鑒定，在13 名Ⅲ期和Ⅳ期黑素瘤患者中，表達(dá)的非同義突變，基于篩選的新生抗原合成了RNA 疫苗并通過經(jīng)皮注射的方式給藥[41]。在參與臨床實(shí)驗(yàn)的13 名患者中，8 名在注射新生抗原疫苗后的12 至23 個(gè)月內(nèi)未復(fù)發(fā)，在接種疫苗前已經(jīng)出現(xiàn)擴(kuò)散的5 例患者中，2 例在接種疫苗后腫瘤明顯縮小，1 例在接種PD-1 抑制劑治療后病情完全緩解。美國波士頓Dana-Farber 癌癥中心，為了證明新生抗原的疫苗的可行性、安全性和免疫原性，針對(duì)不同的新生抗原，合成了多肽疫苗。在6名接種疫苗的患者中，4 名在接種后25 個(gè)月沒有復(fù)發(fā)，而2名患有復(fù)發(fā)疾病的患者隨后用PD-1 抑制劑治療后發(fā)現(xiàn)腫瘤明顯消退。編碼微衛(wèi)星（cMS）發(fā)生突變可產(chǎn)生免疫原性移碼肽（FSP）新抗原，Kloor M 等[42]為了評(píng)估基于FSP 的疫苗的安全性和免疫原性，進(jìn)行了臨床試驗(yàn)。證明了FSP 新抗原疫苗安全性高、耐受性好，能持續(xù)誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。

6 新生抗原疫苗的局限性

新生抗原疫苗的發(fā)展需要克服一些障礙，首先，有些癌癥是“感冒腫瘤”（如胰腺癌和結(jié)腸直腸癌），對(duì)免疫療法顯示出低反應(yīng)率。如何使用個(gè)性化的癌癥疫苗、提高反應(yīng)性T 細(xì)胞活性，以結(jié)合其他的免疫療法對(duì)“感冒腫瘤”產(chǎn)生協(xié)同的治療效果，需要進(jìn)一步研究。其次，是腫瘤的免疫逃逸。腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸主要發(fā)生在癌癥早期階段，在復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境中存在很多的免疫抑制機(jī)制，來協(xié)助腫瘤實(shí)現(xiàn)免疫逃逸[43]。一方面，通過MHCI 類分子的下調(diào)造成抗原遞呈機(jī)制的缺陷是其最主要的機(jī)制；另一方面，腫瘤細(xì)胞還可以通過阻斷PD-1/PD-L1 通路，抑制T 細(xì)胞活化和細(xì)胞因子的產(chǎn)生實(shí)現(xiàn)逃逸。新生抗原疫苗如何克服腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸仍是一大難題。

腫瘤的低突變負(fù)荷也是新生抗原疫苗研發(fā)的一大阻礙。腫瘤具有多變性，能夠產(chǎn)生不同類型的新生抗原。研究的目標(biāo)就是尋找出新生抗原設(shè)計(jì)并合成新生抗原疫苗，以此觸發(fā)T 細(xì)胞的白細(xì)胞攻擊癌細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞的突變頻率越高，新生抗原產(chǎn)生的數(shù)量越多，具有這種特征的腫瘤免疫治療應(yīng)答效果越好，這就是腫瘤突變負(fù)荷（tumor mutation burden，TMB）。但是有些腫瘤具有較低的突變負(fù)荷，不利于免疫藥物起效。具有此類特征的腫瘤患者不適合用癌癥免疫療法。

7 新生抗原疫苗未來發(fā)展方向

7.1 新生抗原疫苗的聯(lián)合應(yīng)用

新生抗原疫苗與PD-1/PD-L1 抑制劑的聯(lián)合應(yīng)用具有較好的發(fā)展前景。針對(duì)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸問題開發(fā)出了PD-1 抑制劑，其能夠激活T 細(xì)胞活性、誘導(dǎo)免疫原性因子的分泌。這就解決了新生抗原疫苗難以激活T 細(xì)胞的免疫反應(yīng)的問題。因此，兩者的聯(lián)合使用將成為新生抗原疫苗應(yīng)用的新策略。DC 疫苗與免疫檢查點(diǎn)抑制劑聯(lián)合使用，在治療實(shí)體瘤和血液瘤方面表現(xiàn)出了明顯的臨床優(yōu)勢[44]。

7.2 開發(fā)多表位疫苗

通過快速丟失表位如MHC Ⅰ類分子下調(diào)來抑制抗原的遞呈，是腫瘤細(xì)胞免疫逃逸的常見機(jī)制，因此需要開發(fā)多表位疫苗進(jìn)行接種。針對(duì)多個(gè)個(gè)性化肽表位，通常含有MHCⅠ限制性肽和MHC Ⅱ類限制性肽，能誘導(dǎo)比現(xiàn)有疫苗更廣泛的免疫應(yīng)答[45]。

7.3 佐劑和遞送系統(tǒng)

經(jīng)典佐劑包括TLR 激動(dòng)劑和將抗原靶向DC 的單克隆抗體。TLR 受體激動(dòng)劑作為疫苗佐劑被廣泛應(yīng)用。因?yàn)樗鼈儾粌H能促進(jìn)DC 成熟為免疫原性狀態(tài)，也能誘導(dǎo)細(xì)胞因子和趨化因子的釋放，從而引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生持久的免疫應(yīng)答。針對(duì)DC 抗原的單克隆抗體，主要包括抗DEC-205 和CD40 激動(dòng)劑。DEC-205（CD205）是一種在DCs 上表達(dá)的分子，在抗原加工和呈遞中具有廣泛的應(yīng)用。CD40 是在抗原呈遞細(xì)胞（APC）上廣泛表達(dá)TNF 受體的超家族成員，它能激活A(yù)PC并促進(jìn)抗腫瘤T 細(xì)胞應(yīng)答，進(jìn)而產(chǎn)生抗癌免疫力。由于腫瘤免疫抑制微環(huán)境的存在，新生抗原疫苗難以激活體內(nèi)的抗腫瘤免疫反應(yīng)。理想的佐劑和接種途徑應(yīng)增強(qiáng)免疫反應(yīng)，打破耐受性并克服免疫抑制性微環(huán)境（TME），因此選擇合適的佐劑用于新生抗原疫苗的遞送不失為一種有效的策略。

目前，最理想的疫苗遞送載體是納米顆粒。納米粒子模擬PAMP（病原體相關(guān)分子模式），被視為危險(xiǎn)信號(hào)，并被APC 上的TLR 識(shí)別，能夠促進(jìn)疫苗被APC 識(shí)別并攝取?；诩{米載體的大小、形狀，表面電荷開發(fā)的靶向LN 載體可以增強(qiáng)佐劑的遞送效率。此外，一些納米材料表現(xiàn)出固有的佐劑樣免疫刺激特征，能進(jìn)一步促進(jìn)癌癥疫苗的功效。

7.4 與其他常規(guī)療法相結(jié)合

新生抗原疫苗與其他常規(guī)療法如靶向治療、化學(xué)療法、放射療法的聯(lián)合應(yīng)用也具有良好的應(yīng)用前景。從機(jī)械學(xué)的角度來看，靶向治療與新生抗原疫苗療法具有協(xié)同作用?；瘜W(xué)療法與免疫療法的聯(lián)合應(yīng)用，其依據(jù)在于化療可以通過增加抗原產(chǎn)生，改善抗原呈遞，增強(qiáng)T 細(xì)胞反應(yīng)，從而增強(qiáng)免疫療效。腫瘤細(xì)胞在進(jìn)行放射治療時(shí)，由于輻射作用，腫瘤細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生許多新生抗原和促炎細(xì)胞因子，從而起到原位疫苗的作用。

8 問題與展望

與其他癌癥免疫療法相比，靶向新生抗原的癌癥疫苗具有許多優(yōu)勢：安全性高、不存在脫靶毒性、能有效誘導(dǎo)T 細(xì)胞免疫反應(yīng)。此外，新生抗原癌癥疫苗與其他免疫療法相結(jié)合的策略，不僅可解決T 細(xì)胞免疫反應(yīng)活性低的問題，還克服了腫瘤免疫抑制微環(huán)境，開發(fā)新生抗原癌癥疫苗的聯(lián)合應(yīng)用是未來治療癌癥的重要策略。但是，新生抗原疫苗的發(fā)展也面臨著一些挑戰(zhàn)：如何解決癌癥對(duì)免疫療法固有的低反應(yīng)率、克服腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，針對(duì)突變負(fù)荷低的腫瘤，如何開展癌癥免疫治療策略，這些是新生抗原癌癥疫苗迫切需要解決的問題。