馬來(lái)酸噻嗎洛爾膠漿劑制備及其體外透皮特性研究*

白瑞雪，接麗莉，楊躍輝

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院 藥學(xué)部，沈陽(yáng)110004

嬰幼兒血管瘤是一種常見的良性腫瘤，發(fā)病率為5%，治療方式包括口服或局部應(yīng)用β-受體阻斷劑、手術(shù)、激光等[1]。與口服β-受體阻斷劑相比，局部給藥副作用更小[2]。目前，β-受體阻斷劑局部給藥用于嬰幼兒血管瘤并沒有形成統(tǒng)一的治療方案，臨床中所用藥物的劑量、劑型各有不同。國(guó)外常用0.1%噻嗎洛爾凝膠、0.25%/0.5%噻嗎洛爾凝膠形成液、0.5%噻嗎洛爾滴眼液、1%普萘洛爾乳膏等[3]。在國(guó)內(nèi)，常將噻嗎洛爾滴眼液敷于患處，使用不便，因此出現(xiàn)了凝膠劑、軟膏劑、貼劑等醫(yī)院制劑[4]；但仍有不足之處，如凝膠劑、軟膏劑易被衣物擦拭掉，固定的貼劑形狀尺寸不便于不規(guī)則病灶的給藥。本研究制備了馬來(lái)酸噻嗎洛爾（timolol maleate，TM）膠漿劑，其制備工藝簡(jiǎn)單，涂于皮膚可自發(fā)形成一薄膜，為臨床提供了一種新的劑型。

1 儀器與材料

1.1 儀器與藥品、試劑

Agilent1260 高效液相色譜儀、G1314F 紫外檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫科技公司）；TK-12B 型透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀（上海鍇凱科技貿(mào)易公司）；BP211D 電子天平（Sartorius）；FE28pH 計(jì)（梅特勒-托利多儀器上海公司）。

馬來(lái)酸噻嗎洛爾（TM，批號(hào):170302，武漢欣欣佳麗生物科技公司，純度99.5%）；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，型號(hào)：SJJ-M，安徽山河藥用輔料廠）；卡波姆940（批號(hào)：717F021）、甘油（批號(hào)：1024C0330）、三乙醇胺（批號(hào)：825A021）均購(gòu)自北京索萊寶科技公司；丙二醇（批號(hào)：20190116，江西醫(yī)普生物藥業(yè)）；羥苯乙酯（批號(hào)：20180724，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

KM 小鼠若干只，雄性，體重18～22 g，由沈陽(yáng)藥科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證編號(hào)：SYXK（遼）2018-0009。

2 方法與結(jié)果

2.1 TM 膠漿劑的制備

精密稱取TM 原料藥（相當(dāng)于噻嗎洛爾50 mg）溶于適量蒸餾水中，定容至10 mL，得TM 溶液。將處方量的CMC-Na 和保濕劑加入TM 溶液中，攪拌均勻，超聲使其充分溶解，除去氣泡，得TM 膠漿劑。

2.2 單因素試驗(yàn)篩選處方

2.2.1 CMC-Na 用量的篩選按照“2.1”項(xiàng)下方法制備TM 膠漿劑，分別加入不同質(zhì)量的CMC-Na（0.2、0.3、0.4 g），考察制劑的外觀性狀。結(jié)果表明，隨著CMC-Na 用量的增加，TM 膠漿劑的粘度增大，涂展性變差。當(dāng)CMC-Na 用量為0.3 g 時(shí)，粘稠度適中、涂展性較好，方便涂抹給藥。

2.2.2 保濕劑品種的篩選在用量篩選預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，不加入保濕劑的處方，雖然不影響制劑的外觀性狀，涂抹后也可形成薄膜；但是所成薄膜過于干燥，與皮膚的粘附性較差，易從給藥部位脫離。因此考慮加入保濕劑，保留適當(dāng)水分，以增加制劑的粘附性。常用的保濕劑有丙二醇和甘油，故考察了這兩種化合物對(duì)制劑外觀性狀、涂抹后狀態(tài)的影響。實(shí)驗(yàn)表明，加入丙二醇或甘油的膠漿劑均呈透明粘稠溶液，涂抹后均可形成一粘附性薄膜，因此保濕劑種類對(duì)制劑的外觀性狀和涂抹后狀態(tài)影響不大。權(quán)衡丙二醇既有保濕作用，又有促進(jìn)滲透作用[4]，故選其作為保濕劑。

2.2.3 保濕劑用量的篩選制備膠漿劑時(shí)加入不同質(zhì)量的丙二醇（0.5、1.0、1.5 g），以考察其用量對(duì)制劑外觀性狀的影響。實(shí)驗(yàn)表明，所得制劑的涂展性、粘稠度均較好，因此丙二醇用量對(duì)制劑外觀性狀沒有顯著影響，故選擇丙二醇用量為0.5 g。

2.3 TM 膠漿劑的理化性質(zhì)

2.3.1 性狀本品為無(wú)色、透明、均勻的粘稠液體，涂抹在皮膚上可在1 分鐘內(nèi)自發(fā)形成一薄膜，且薄膜具有一定的粘附性。

2.3.2 酸堿度測(cè)定稱取TM 膠漿劑1.0mL，加10mL蒸餾水，超聲溶解，測(cè)定pH 值。結(jié)果顯示，TM 膠漿劑的pH 值為6.94，符合皮膚給藥的酸堿度要求。

2.3.3 含量測(cè)定取1 mL 膠漿劑，加入蒸餾水稀釋至100 mL，采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中藥物含量，色譜條件參照課題組已建立的方法[4]，測(cè)得噻嗎洛爾含量為0.5%（g·mL-1）。

2.4 體外透皮實(shí)驗(yàn)

2.4.1 色譜條件色譜柱：AccusiL C18（150 mm×4.6 mm，10 μm）；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：甲醇-水-三乙胺(40∶60∶0.1)，磷酸調(diào)節(jié)pH 至5.0；檢測(cè)波長(zhǎng)：295 nm；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：20 μL。

2.4.2 離體動(dòng)物皮膚的制備將小鼠用乙醚麻醉，剃去腹部皮膚上的毛發(fā)，脫臼處死，取下腹部去毛皮膚，用鑷子去除皮下脂肪及黏性物，生理鹽水沖洗，濾紙吸干備用。使用前檢查皮膚應(yīng)無(wú)破損。

2.4.3 TM 凝膠劑的制備為了評(píng)價(jià)TM 膠漿劑的透皮性能，選擇某凝膠劑作為對(duì)照。由于國(guó)內(nèi)尚未批準(zhǔn)其凝膠劑，未能購(gòu)買到市售的凝膠劑，所以選擇了自制的凝膠劑[5]作比較。制備方法：將羥苯乙酯溶于丙二醇，加入蒸餾水、甘油，充分?jǐn)嚢韬蠹尤?.1 g 卡波姆940，過夜溶脹。精密稱取TM 原料藥（相當(dāng)50 mg 噻嗎洛爾）以蒸餾水溶解，倒入上述溶液內(nèi)，攪拌，加入適量三乙醇胺，調(diào)節(jié)pH6.5～7.5，補(bǔ)加蒸餾水至10 g，充分?jǐn)嚢?，即?.5%TM 凝膠劑。

2.4.4 透皮量的測(cè)定取“2.3.2”項(xiàng)下的完好離體鼠皮，置于立式擴(kuò)散池的兩個(gè)半池之間，角質(zhì)層朝向給藥池，真皮層朝向接收池，夾子固定。分別在角質(zhì)層上涂抹膠漿劑0.5 mL、凝膠劑0.5 g，排除氣泡，在接收池中加入7.5 mL 生理鹽水。將擴(kuò)散池置于（32.0±0.5）℃恒溫水浴中，不斷攪拌。分別于1、2、4、6、8、10、12、24 h 取樣，將接收池中液體全部取出，補(bǔ)充相同體積生理鹽水。樣品用0.45 μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，按“2.3.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，按公式計(jì)算單位面積累積透過量（M，μg·cm-2）：

其中C'n為校正的濃度；Cn為n 時(shí)間點(diǎn)測(cè)定的藥物濃度；Ci為不同時(shí)間點(diǎn)的藥物濃度；V 為取樣體積；V'為接收池中接收液的總體積；A 為有效透過面積。

以單位面積累積透過量為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪制藥物經(jīng)皮透過曲線，結(jié)果見圖1。

圖1 TM 膠漿劑、凝膠劑的經(jīng)皮透過曲線（n=6）

實(shí)驗(yàn)表明，TM 凝膠劑與膠漿劑在小鼠皮膚上的累積透過性無(wú)顯著差別（P=0.359＞0.05）。

2.4.5 藥物濃度對(duì)透皮行為的影響目前，臨床上所用的噻嗎洛爾局部給藥制劑的藥物濃度尚未統(tǒng)一，濃度為0.1%～0.5%。所以本部分實(shí)驗(yàn)想要探究藥物濃度是否影響藥物透皮行為，為日后制劑的藥物含量的確定提供理論依據(jù)。

制備了不同濃度的噻嗎洛爾膠漿劑，透皮實(shí)驗(yàn)方法與“2.3.3”項(xiàng)下方法相似，結(jié)果見圖2。由此表明，藥物濃度越高，透皮量越大，不同濃度制劑間的透皮行為存在顯著差別（P＜0.05）。

圖2 不同藥物濃度TM 膠漿劑的經(jīng)皮透過曲線（n=6）

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

以SPSS 19.0 軟件作重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)方差分析，結(jié)果經(jīng)Mauchly 球形檢驗(yàn)，若P＞0.05，滿足球?qū)ΨQ假設(shè)，不作校正，若P≤0.05，則不滿足球?qū)ΨQ假設(shè)，需用ε校正系數(shù)校正自由度。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

本研究制備的膠漿劑涂抹后成膜可滯留于給藥部位，制備工藝簡(jiǎn)單，僅需把輔料充分溶解即可。與凝膠劑相比省去了過夜溶脹、調(diào)節(jié)pH 值等繁瑣步驟，而且兩者的體外透皮實(shí)驗(yàn)結(jié)果并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，是一種簡(jiǎn)單易得、可替代凝膠劑的一種新劑型。

含有CMC-Na 的膠漿劑在局部應(yīng)用后可形成一薄膜，可避免藥物被衣物蹭掉，一定程度上增加了嬰幼兒用藥的安全性。嬰幼兒血管瘤可在身體的不同部位出現(xiàn)，其大小、形狀也不確定，這種涂抹成膜的膠漿劑在應(yīng)用時(shí)不受病灶形狀的限制，與貼劑相比，膠漿劑使用起來(lái)更加方便。與涂膜劑相比，本研究制備的膠漿劑雖然成膜速度不如涂膜劑（涂抹后幾秒內(nèi)成膜，有機(jī)溶劑一般為乙醇），但是所用輔料安全性更高，更適合嬰幼兒的使用。

一般認(rèn)為，閉塞的給藥狀態(tài)可增加皮膚水化，從而增強(qiáng)局部用藥的經(jīng)皮吸收。因此，應(yīng)用半透膜或不滲透膜（或材料）覆蓋給藥部位，將是一種提高β-受體阻滯劑皮膚滲透性的方法，可獲得更有效的藥物經(jīng)皮遞送。Zhang Q 等[6]在進(jìn)行β-受體阻斷劑凝膠透皮實(shí)驗(yàn)時(shí)，將凝膠表面覆蓋一層薄膜，構(gòu)建了一種閉塞的給藥條件，結(jié)果表明，普萘洛爾凝膠和倍他洛爾凝膠24 h 的透皮量增加了2～3 倍，噻嗎洛爾在閉塞狀態(tài)下與在非閉塞條件下的藥物透皮量沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這可能與噻嗎洛爾在pH7.4 時(shí)的親水性有關(guān)。在本研究中，噻嗎洛爾膠漿劑的透皮量與自制的凝膠劑沒有顯著區(qū)別，可能也與其親水性相關(guān)。

臨床噻嗎洛爾常用的濃度為0.5%，但這是否為最佳給藥濃度并不清楚，且藥物濃度與臨床療效的關(guān)系沒有統(tǒng)一結(jié)論，甚至有正反相悖的研究結(jié)果[7，8]。本研究從體外透皮實(shí)驗(yàn)的角度發(fā)現(xiàn)噻嗎洛爾藥物濃度確實(shí)會(huì)影響藥物透皮量，濃度越高，透皮量越大。也就是說(shuō)，藥物濃度確實(shí)會(huì)影響透皮量；但是對(duì)于療效的影響還需深入研究，找出影響藥物療效的重要因素，從而盡可能地提高制劑的有效性。