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    復(fù)方甲砜霉素注射液的研制

    2021-08-31 09:40:46陳胡羚王虹雅侯巧弟王萍萍郭珊珊李引乾
    動物醫(yī)學(xué)進展 2021年7期
    關(guān)鍵詞:埃希氏鏈球菌金黃色

    李 香,陳胡羚,陳 瑩,王虹雅,侯巧弟,王萍萍,郭珊珊,李引乾*

    (1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,陜西楊陵 712100;2.陜西省動物疫病預(yù)防控制中心,陜西西安 710016;3.寶雞市鳳翔區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣站,陜西寶雞 721400)

    甲砜霉素(Thiamphenicol,TAP)是氯霉素類廣譜抗菌藥物,TAP為白色的結(jié)晶性粉末,pH呈中性,無臭味。TAP對光及熱的穩(wěn)定性好,但具有引濕性。室溫下的溶解度為5 g/L~10 g/L,較氯霉素略大,在乙醇中的溶解度為50 g/L,TAP幾乎不溶于乙醚與氯仿[1-2]。TAP是一種肝微粒體酶抑制劑,因抑制許多藥物(如降糖藥、抗凝劑、抗癲癇藥和環(huán)磷酰胺)在肝中的代謝而增加其作用時間和毒性[3-4],此外,TAP在較低血藥濃度時,可降低青霉素的抗菌活性,故應(yīng)將青霉素先于TAP數(shù)小時使用[5]。為防止用藥合并癥的發(fā)生,應(yīng)注意TAP與其他藥物的相互作用。

    乳房炎作為我國養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展始終面臨的難題,目前有許多相關(guān)藥物投入使用。理想的治療藥物應(yīng)滿足以下特點:①最小抑菌濃度低;②肌內(nèi)注射時藥物利用度高;③藥物在血液中呈游離狀態(tài);④藥物的脂溶性高;⑤藥物與蛋白質(zhì)結(jié)合率低;⑥藥物的半衰期長;⑦藥物活性不受炎性分泌物的影響;⑧藥物在體內(nèi)不蓄積[6]。目前,除了抗生素療法,中藥療法、激素療法、物理療法、封閉療法、生物療法等都可用于乳房炎的治療。根據(jù)乳房炎類型不同,治療藥物或方法也有所不同[7]。急性乳房炎常采用紅霉素、四環(huán)素、磺胺嘧啶鈉或其他抗生素進行全身治療,也可用青霉素、鏈霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、卡那霉素等抗生素進行乳室灌注。慢性乳房炎常采用卡那霉素或環(huán)丙沙星配合青霉素共同灌注治療。隱性乳房炎常通過提高家畜自身免疫力來預(yù)防,盡量避免使用抗生素,必要時可采用青霉素和鏈霉素聯(lián)合灌注治療[8]。

    目前,大多都使用單種抗菌藥用于預(yù)防和治療家畜乳房炎,其制作的工藝簡單易操作,但效果發(fā)揮較為緩慢,且使用也較為復(fù)雜。將藥物研制成復(fù)方注射液,可以有效提高藥物的作用效果,減少藥物使用量,增強藥物安全性,有利于藥物的臨床使用。因此,本研究以TAP為主藥,輔以氟尼辛葡甲胺[9-10]及其他輔料,研制出復(fù)方TAP注射液,并對該注射液進行質(zhì)量控制研究和體外抑菌試驗,為其在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用提供試驗依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 藥品及試劑 TAP(批號20180611),武漢貝爾卡生物醫(yī)藥有限公司產(chǎn)品;氟尼辛葡甲胺(批號20170921),河北佰品生物科技有限公司產(chǎn)品;聚乙二醇400(分析純,批號20180318)、乙醇胺(分析純,批號20170926)、無水亞硫酸鈉(批號20170307)和N,N-二甲基甲酰胺(批號20180118),陜西盤龍翊海醫(yī)藥有限公司產(chǎn)品。

    1.1.2 試驗用菌 無乳鏈球菌、大腸埃希氏菌及金黃色葡萄球菌,西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院獸醫(yī)藥理實驗室分離并保存。

    1.1.3 儀器設(shè)備 pH計(Bante210),上海般特儀器有限公司產(chǎn)品;大容量恒溫水浴箱(DZ-75 L)、澄明度檢測儀(YB-Ⅲ),成都華衡儀器有限公司產(chǎn)品。

    1.2 方法

    1.2.1 復(fù)方TAP注射液的研制

    1.2.1.1 復(fù)方TAP注射液的處方 復(fù)方TAP注射液以TAP為主藥,分別以氟尼辛葡甲胺、N,N-二甲基甲酰胺、聚乙二醇400、無水亞硫酸鈉和活性炭作為輔藥,助溶劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑和吸附劑,通過預(yù)試驗,確定主藥和附加劑的用量。

    1.2.1.2 處方工藝 根據(jù)處方進行配液,利用活性炭吸附,采用濾膜濾過溶液后,進行灌裝、滅菌、以及查漏,制得復(fù)方TAP注射液,即按照一般注射液的生產(chǎn)工藝進行制備[11]。

    1.2.1.3 質(zhì)量控制 澄明度檢查,利用澄明度檢測儀對所制備的復(fù)方TAP注射液進行澄明度檢測,對其外觀特征進行描述,主要觀察有無可見異物;pH 檢查,利用pH計對制備的復(fù)方TAP注射液的pH進行測定。

    1.2.2 復(fù)方TAP注射液的藥敏試驗

    1.2.2.1 抗菌藥液的制備 以本試驗研制的復(fù)方TAP注射液為試驗藥(記為A液)。以TAP注射液為對照藥(記為B液),按配方制備TAP注射液,攪拌澄清后再加入活性炭,振蕩均勻,20 min后用過濾,用乙醇胺調(diào)節(jié)pH至7.0~7.5,最后用微孔濾膜過濾,灌封,滅菌得TAP注射液。

    1.2.2.2 藥敏試驗 按參考文獻[12]方法進行。

    2 結(jié)果

    2.1 復(fù)方TAP注射液質(zhì)量控制結(jié)果

    2.1.1 澄明度檢查結(jié)果 制備的復(fù)方TAP注射液澄清,未見異物,符合獸藥典對注射液澄明度要求[13]。

    2.1.2 pH檢查結(jié)果 復(fù)方TAP注射液pH檢測結(jié)果為7.3,在規(guī)定的4.0~9.0范圍內(nèi)[13],符合獸藥典注射液對pH的要求。

    2.2 藥敏試驗結(jié)果

    2.2.1 MIC測定結(jié)果 A液對無乳鏈球菌、大腸埃希氏菌及金黃色葡萄球菌的MIC試驗結(jié)果如圖1。A液(復(fù)方TAP注射液)對3種細菌的MIC分別為12、12、8 mg/L表1。B液對3種細菌的MIC結(jié)果如圖2。B液(TAP注射液)對3種細菌的MIC分別是16、12、16 mg/L見表1。

    表1 兩種注射液對3種致病菌的MIC結(jié)果

    A.無乳鏈球菌; B.大腸埃希氏菌; C.金黃色葡萄球菌A.S.agalactiae; B.E.coli; C.S.aureus

    A.無乳鏈球菌; B.大腸埃希氏菌; C.金黃色葡萄球菌A.S.agalactiae; B.E.coli; C.S.aureus

    結(jié)果顯示,復(fù)方TAP注射液(A液)對無乳鏈球菌、大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌呈現(xiàn)良好的抑菌效果,優(yōu)于TAP注射液(B液)。

    2.2.2 MBC測定結(jié)果 A液(復(fù)方TAP注射液)對金黃色葡萄球菌的MBC是32 mg/L,見表2。A液對金黃色葡萄球菌的MBC試驗結(jié)果如圖3。A液對大腸埃希氏菌的MBC試驗結(jié)果如圖4。A液(復(fù)方TAP注射液)對大腸埃希氏菌的MBC是32 mg/L,見表2。A液(復(fù)方TAP注射液)對無乳鏈球菌不殺菌,見表2。A液對無乳鏈球菌的MBC試驗結(jié)果,如圖5。

    表2 兩種注射液對3種致病菌的MBC結(jié)果

    A~F.A液濃度4、8、16、32、64、128 mg/LA-F.The concentrations of liquid A are 4,8,16,32,64,128 mg/L

    A~C.A液濃度8、16、32 mg/LA-C.The concentrations of liquid A are 8,16,32 mg/L

    A~C.A液濃度32、64、128 mg/LA-C.The concentrations of liquid A are 32,64,128 mg/L

    B液對金黃色葡萄球菌的MBC試驗結(jié)果,如圖6。B液(TAP注射液)對金黃色葡萄球菌的MBC是64 mg/L,見表2。B液對大腸埃希氏菌MBC試驗結(jié)果,如圖7。B液(TAP注射液)對大腸埃希氏菌的MBC是32 mg/L,見表2。B液對無乳鏈球菌的MBC試驗結(jié)果,如圖8。B液(TAP注射液)對無乳鏈球菌不殺菌,結(jié)果見表2。復(fù)方TAP注射液(A液)與TAP注射液(B液)對大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌均具有明顯的體外殺菌作用,而對無乳鏈球菌則無體外殺菌作用。

    A~F.B液濃度4、8、16、32、64、128 mg/LA-F.The concentrations of liquid B are 4,8,16,32,64,128 mg/L

    A~C.B液濃度8、16、32 mg/LA-C.The concentrations of liquid B are 8,16,32 mg/L

    A、B.B液濃度64 mg/L and 128 mg/LA,B.The concentrations of liquid B are 64 mg/L and 128 mg/L

    3 討論

    本試驗對最佳處方的選擇采用了正交試驗和極差法兩種方法。本試驗考慮溶劑性質(zhì)及性價比最終確定以水作為溶劑。N,N-二甲基甲酰胺[14]和N,N-二甲基乙酰胺均可作為本試驗處方的助溶劑,而以N,N-二甲基甲酰胺效果最為明顯,因此選N,N-二甲基甲酰胺作助溶劑。PEG-400[15]無毒無刺激,且能很好地保持溶液的穩(wěn)定性,故選其作為穩(wěn)定劑。無水亞硫酸鈉與本試驗處方不會發(fā)生配伍禁忌,故選其作為抗氧化劑。質(zhì)量控制是注射液生產(chǎn)必檢的項目內(nèi)容,本試驗以注射液生產(chǎn)要求分別對澄明度、酸堿度進行進行了評價。結(jié)果表明,本試驗制備的復(fù)方甲砜霉素注射液各項檢查均合格,符合藥典要求。

    TAP是一種廣譜抗生素,對革蘭氏陽性和陰性菌都有作用[16]。本試驗結(jié)果得出,復(fù)方甲砜霉素注射液與甲砜霉素注射液對金葡菌和大腸埃希氏菌的殺菌效果明顯,對無乳鏈球菌無殺菌作用。分析可能是由于氟尼辛葡甲胺為解熱鎮(zhèn)痛劑,主要起解熱鎮(zhèn)痛的作用,而無抑菌作用,但在實際應(yīng)用中,氟尼辛葡甲胺可對疾病的恢復(fù)起著一定的促進作用。

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