HIF-1α在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義

李紅全 譚超華 李立 李成之 劉燦輝

肝細(xì)胞癌在世界范圍內(nèi)惡性腫瘤相關(guān)性致死因素中位居第三位，是臨床常見的惡性腫瘤之一[1]。我國每年因肝細(xì)胞癌死亡的人數(shù)約有11萬，肝細(xì)胞癌因肝外轉(zhuǎn)移、肝內(nèi)擴(kuò)散、腫瘤侵襲，目前缺少有效的治療措施。缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）主要由α、β兩個(gè)亞基組成，可介導(dǎo)病理性和生理性低氧性反應(yīng)的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子[2]。當(dāng)氧分壓處于正常范圍內(nèi)，缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）可對(duì)癌變基因VHL產(chǎn)物p-VHL的形成進(jìn)行抑制，進(jìn)而誘發(fā)生成泛素型多聚體，出現(xiàn)水解。本研究選擇2017年6月-2020年6月在筆者所在醫(yī)院接受診治的50例肝細(xì)胞癌患者，分析肝細(xì)胞癌組織中HIF-1α的表達(dá)及意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年6月-2020年6月在筆者所在醫(yī)院接受診治的50例肝細(xì)胞癌患者設(shè)為研究組，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合世界衛(wèi)生組織制定的肝細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；經(jīng)臨床病理學(xué)檢查、影像學(xué)資料、臨床特征確診；均未予以放化療治療。其中男26例，女24例；年齡42～74歲，平均（56.8±3.1）歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例；肝細(xì)胞癌分化程度：高分化24例，中分化14例，低分化12例。選擇同期于筆者所在醫(yī)院體檢的50例健康者設(shè)為對(duì)照組，其中男25例，女25例；年齡42～74歲，平均（56.7±3.0）歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），有可比性。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象均對(duì)本研究知情同意。

1.2 方法

HIF-1α檢測(cè)：肝組織標(biāo)本經(jīng)福爾馬林固定、乙醇脫水、二甲苯透明和石蠟包埋，全部標(biāo)本做成連續(xù)病理切片，厚5 μm，65 ℃烤片2 h備用。二甲苯Ⅰ、Ⅱ各20 min脫蠟，無水乙醇Ⅰ、Ⅱ各6 min去除二甲苯。經(jīng)免疫組織化學(xué)染色，PBS沖洗5 min；3%雙氧水予以10 min封閉，抗原修復(fù)予以PBS沸騰法，10%山羊血清為封閉液，加入稀釋較佳的一抗（1∶500），室溫下孵育24 h；PBS沖洗液沖洗5 min后予以免疫組織化學(xué)試劑盒予以染色。試劑：上海麥生物代購HIF-1α鼠單抗（Abcam）、IHC試劑盒（Vector）。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

比較兩組HIF-1α陽性表達(dá)情況及表達(dá)量。分析肝細(xì)胞癌臨床病理特征與HIF-1α陽性表達(dá)的關(guān)系。

切片染色陽性標(biāo)準(zhǔn)為棕黃色、淡黃色。強(qiáng)陽性（+++）：陽性細(xì)胞超過50%；陽性（++）：陽性細(xì)胞為25%～50%；弱陽性（+）：陽性細(xì)胞為1%～25%；陰性（-）：陽性細(xì)胞低于1%[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組HNF-1α陽性表達(dá)情況比較

研究組HIF-1α強(qiáng)陽性率、陽性率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 兩組HIF-1α陽性表達(dá)比較 例（%）

2.2 兩組HNF-1α表達(dá)量比較

研究組HIF-1α陽性細(xì)胞為（64.7±5.5）%，高于對(duì)照組的（25.8±1.1）%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=49.04，P<0.05）。

2.3 肝細(xì)胞癌臨床病理特征與HIF-1α陽性表達(dá)的關(guān)系

肝細(xì)胞癌中、低分化的患者HIF-1α陽性率顯著高于肝細(xì)胞癌高分化的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。肝細(xì)胞癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者HIF-1α陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 肝細(xì)胞癌臨床病理特征與HIF-1α陽性表達(dá)的關(guān)系 例（%）

3 討論

約有90%的原發(fā)性肝癌為肝細(xì)胞癌，主要進(jìn)行免疫、化療、放療為主的綜合治療方式，但晚期肝細(xì)胞癌常因腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，臨床治療難度較大，預(yù)后較差。我國每年肝細(xì)胞癌的死亡人數(shù)高達(dá)11萬左右，肝細(xì)胞癌的早期診治、腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)水平對(duì)于評(píng)估肝細(xì)胞癌的進(jìn)展、預(yù)后具有重要的臨床價(jià)值。本研究觀察了肝細(xì)胞癌組織中HIF-1α的陽性表達(dá)情況及臨床意義。結(jié)果顯示，研究組HIF-1α強(qiáng)陽性率、陽性率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；研究組HIF-1α陽性細(xì)胞為（64.7±5.5）%，高于對(duì)照組的（25.8±1.1）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=49.04，P<0.05）；肝細(xì)胞癌中、低分化的患者HIF-1α陽性率顯著高于肝細(xì)胞癌高分化的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。肝細(xì)胞癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者HIF-1α陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與譚松等[5]的研究結(jié)果基本一致。惡性腫瘤的病理發(fā)展過程的關(guān)鍵為生成腫瘤血管及腫瘤細(xì)胞對(duì)低氧的適應(yīng)性。HIF-1是機(jī)體和哺乳動(dòng)物中的轉(zhuǎn)錄因子，是異源二聚體核轉(zhuǎn)錄因子，由HIF-1α、HIF-β兩個(gè)亞單位構(gòu)成，其中HIF-1α為氧功能亞基、調(diào)節(jié)亞基，可對(duì)各種靶基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)[6]。在惡性腫瘤的低氧反應(yīng)過程中，HIF-1α可促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、增殖，刺激生成腫瘤新生血管，維持腫瘤細(xì)胞代謝能量[7]；肝細(xì)胞癌的主要特征為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)調(diào)控難度較大，癌細(xì)胞數(shù)目驟增，耗氧量升高，腫瘤病灶組織極易生成缺氧性微環(huán)境[8]。HIF-1α為缺氧型依賴因子，在肝細(xì)胞癌內(nèi)出現(xiàn)廣泛的陽性表達(dá)，可能與下述因素密切相關(guān)：Ser癌變基因的激活、P53癌變基因的失活等；病理組織血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生紊亂、結(jié)構(gòu)異常，腫瘤細(xì)胞處于缺氧性微環(huán)境[9-10]；肝臟組織發(fā)生缺氧、缺血狀態(tài)促使HIF-1α表達(dá)水平增高[11-12]。同時(shí)當(dāng)腫瘤病灶組織體積較大時(shí)，極易生成新生血管，而HIF-1α的主要靶基因?yàn)檠軆?nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF），可刺激生成新生血管，誘發(fā)肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移。HIF-1是具有轉(zhuǎn)錄活性的核蛋白，具有相當(dāng)廣泛的靶基因譜，其中包括與缺氧適應(yīng)、炎癥發(fā)展及腫瘤生長(zhǎng)等相關(guān)的近100種靶基因。當(dāng)其與靶基因結(jié)合后，通過轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控使機(jī)體產(chǎn)生一系列反應(yīng)，有些反應(yīng)盡管帶有適應(yīng)代償性質(zhì)，但也常給機(jī)體帶來病理性損害，腫瘤加速生長(zhǎng)等。

綜上所述，肝細(xì)胞癌組織中HIF-1α陽性率及陽性細(xì)胞表達(dá)量均較高，同時(shí)與肝細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度密切相關(guān)。