基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接分析黃芩治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制

孫宇潔，付書(shū)璠，趙永璐，李 慧，黃 莉

安徽中醫(yī)藥大學(xué) 中醫(yī)學(xué)院（合肥 230038）

黃芩（scutellaria baicalensis），又名空心草、黃金茶，唇形科植物。黃芩的根，《藥性論》載其：“能治熱毒骨蒸……去關(guān)節(jié)煩悶”。黃芩性寒味苦，歸肺、心、膽、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒等功效。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，黃芩的主要活性成分為黃酮及其苷類(lèi)、萜類(lèi)化合物及揮發(fā)油等，具有抗炎、解熱、殺滅微生物、抑制腫瘤生長(zhǎng)等作用，對(duì)消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等多系統(tǒng)的疾病均具有治療作用[1]。

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜的滑膜關(guān)節(jié)自身免疫病，典型臨床表現(xiàn)為關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥和關(guān)節(jié)外血管翳的形成，進(jìn)一步可累及關(guān)節(jié)軟骨和骨，最終可致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失[2]。由于RA的發(fā)病機(jī)制目前尚未明確，治療原則主要是通過(guò)延緩疾病進(jìn)展和降低風(fēng)濕活動(dòng)性來(lái)減少關(guān)節(jié)損傷和預(yù)防長(zhǎng)期殘疾，并無(wú)規(guī)范的治療方案。臨床主要采用非甾體抗炎藥、地塞米松、甲氨蝶呤等，然而這些藥物長(zhǎng)期服用會(huì)引起胃、肝、腎等多個(gè)臟腑功能的不良反應(yīng)，對(duì)機(jī)體傷害較大[3]。因此，開(kāi)發(fā)高療效、低副作用、低毒性的新型RA 藥物具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。中藥在治療RA方面的優(yōu)勢(shì)亟待開(kāi)發(fā)，具有廣闊的研究前景。本文旨在運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)初步探究黃芩治療RA的生物學(xué)過(guò)程，從靶點(diǎn)、信號(hào)通路的角度揭示其治療機(jī)制，為實(shí)驗(yàn)研究及未來(lái)臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥物活性成分及作用靶點(diǎn)的篩選

通過(guò)檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)（traditional chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP）（http：//lsp.nwsuaf.edu.cn/tcmsp.php）檢索黃芩的化學(xué)成分，以口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%和藥物相似性（drug likeness，DL）≥0.18作為篩選條件，時(shí)間截止至2020年4月10日，篩選出活性成分較高的化合物，同時(shí)利用此平臺(tái)下載相關(guān)有效成分對(duì)應(yīng)的蛋白作用靶點(diǎn)。

1.2 RA相關(guān)靶點(diǎn)的篩選

將“rheumatoid arthritis”作為關(guān)鍵詞，對(duì)GeenCards數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.genecards.org/）、OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.omim.org/）進(jìn)行檢索，將兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索結(jié)果合并后去除重復(fù)后作為疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)備用。

1.3 黃芩-RA靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的建立及可視化

利用Venn 在線(xiàn)軟件（http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/）將藥物與疾病靶點(diǎn)取交集，通過(guò)Venn圖的形式展現(xiàn)黃芩與RA靶點(diǎn)間存在的交集靶點(diǎn)，運(yùn)用Cytoscape 3.7.2（http：//www.Cytoscape.org/）軟件構(gòu)建黃芩治療RA的“化合物-靶點(diǎn)-疾病”相互作用網(wǎng)絡(luò)圖。

1.4 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)（PPI網(wǎng)絡(luò)）的構(gòu)建

將篩選得到的藥物-疾病共同靶蛋白上傳至String（https：//string-db.org/）在線(xiàn)平臺(tái)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction，PPI）分析，限定研究物種為“人”（“homo sapiens”），參數(shù)保持默認(rèn)設(shè)置，獲得PPI網(wǎng)絡(luò)。

1.5 GO功能分析和KEGG通路富集分析

將黃芩的有效作用靶點(diǎn)上傳至David 6.8（data?base for annotation，visualization and integrated discov?ery）數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//david.ncifcrf.gov/，version 6.8），指定研究對(duì)象為人類(lèi)進(jìn)行基因功能（GO，gene ontolo?gy）分析，獲取靶點(diǎn)主要的作用過(guò)程，同時(shí)基于京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG，kyoto encyclopedia of genes and geomes）（https：//www.kegg.jp/）進(jìn)行通路富集分析，觀察黃芩與RA共同靶點(diǎn)在通路中的分布情況。以P＜0.01進(jìn)行靶基因篩選，得到黃芩靶點(diǎn)主要的生物過(guò)程和藥理作用機(jī)制中可能性較大的通路，并進(jìn)一步篩選與RA相關(guān)的信號(hào)通路。

1.6 分子對(duì)接

檢索RSCB PDB數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.rcsb.org/pdb/home/home.do）并下載RA 靶蛋白的3D 結(jié)構(gòu)，檢索并下載TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)黃芩活性成分的2D 結(jié)構(gòu)，利用Chem 3D 對(duì)活性成分小分子逐個(gè)進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化。利用PyMOL 2.4.0 軟件對(duì)RA 靶蛋白進(jìn)行除水、分離原配體等預(yù)處理。利用AutoDock 的可視化軟件AutoDock Tools 1.5.6 軟件設(shè)置GridBox 各項(xiàng)參數(shù)，尋找活性口袋，并將活性小分子、預(yù)處理后的靶蛋白都轉(zhuǎn)換成pdbqt 格式文件，應(yīng)用AutoDock Vina 軟件進(jìn)行分子對(duì)接，最后運(yùn)用PyMOL、LigPlot＋軟件對(duì)對(duì)接結(jié)果進(jìn)行三維和二維可視化分析。

2 結(jié)果

2.1 黃芩活性成分的篩選

在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索黃芩化學(xué)成分，共得到143 個(gè)化學(xué)成分，再對(duì)其ADME 參數(shù)進(jìn)行篩選，以O(shè)B ≥30 和DL ≥0.18 為篩選條件，同時(shí)篩去無(wú)對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的成分，最終共獲得36 個(gè)黃芩潛在的有效成分，見(jiàn)表1。

表1 黃芩潛在有效成分

2.2 黃芩活性成分-RA靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

將從數(shù)據(jù)庫(kù)得到的所有成分和靶點(diǎn)去重整合，得到36 種活性成分及483 個(gè)靶點(diǎn)，靶點(diǎn)數(shù)較多的活性成分的潛在靶基因見(jiàn)表2（靶點(diǎn)數(shù)≥11），通過(guò)Unipot 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，匯總?cè)ブ睾蟮玫?6個(gè)靶點(diǎn)。設(shè)置relevance score ≥7，由GeneCards、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)檢索整合去重后得到RA 靶點(diǎn)共計(jì)1 085 個(gè)，將黃芩活性成分與RA各自對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)取交集，得到活性成分-疾病靶點(diǎn)44個(gè)，對(duì)應(yīng)的韋恩圖見(jiàn)圖1。

表2 黃芩活性成分的潛在靶基因和靶點(diǎn)數(shù)（靶點(diǎn)數(shù)≥11）

圖1 黃芩活性成分與RA基因靶點(diǎn)映射Venn圖

2.3 “化合物-靶點(diǎn)-疾病”的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及可視化分析

為更直觀的顯示黃芩有效成分、靶點(diǎn)與疾病之間的相互作用關(guān)系，利用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建黃芩與RA的44個(gè)共同靶點(diǎn)的“化合物-靶點(diǎn)-疾病”可視化網(wǎng)絡(luò)圖（見(jiàn)圖2），結(jié)果顯示，黃芩中發(fā)揮抗RA作用的化學(xué)成分主要有豆甾醇（stigmasterol）、β-谷甾醇（beta-sitosterol）、黃芩甙元（baicalein）、漢黃芩素（wogonin）等，協(xié)同作用于一氧化氮合酶2（NOS2）、雄激素受體（AR）、前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成酶1（PTGS1）、前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成2（PTGS2）、β-2 腎上腺素能受體（ADRB2）、胱天蛋白酶3（CASP3）等靶點(diǎn)。

圖2 “化合物-靶點(diǎn)-疾病”可視化網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 黃芩治療RA的PPI網(wǎng)絡(luò)

設(shè)置置信度大于0.4，將Venn 圖獲得的44 個(gè)藥物-疾病共同靶點(diǎn)上傳至STRING 在線(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái)得到PPI 網(wǎng)絡(luò)（見(jiàn)圖3）。據(jù)Count 值篩選列舉出黃芩治療RA的關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白（見(jiàn)圖4），主要包括白細(xì)胞介素-6（IL-6）、磷酸化蛋白激酶1（AKT1）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）、Jun激酶（JUN）、胱天蛋白酶3（CASP3）、前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成2（PTGS2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）等。

圖3 黃芩治療RA相關(guān)靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)

圖4 黃芩治療RA的關(guān)鍵靶點(diǎn)

2.5 黃芩有效成分-靶點(diǎn)-分子功能的GO富集分析

將黃芩有效組分與RA 的共同44 個(gè)靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選物種為人源（homo sapiens），獲得GO 生物學(xué)過(guò)程條目75 條，涉及到生長(zhǎng)因子活性、生物合成過(guò)程調(diào)控、酶活性、轉(zhuǎn)錄因子活性及受體活性、細(xì)胞因子活性等各方面，選取GO 富集分析結(jié)果所得出的前20位相關(guān)靶點(diǎn)分子功能，繪制相應(yīng)的黃芩有效成分-靶點(diǎn)-對(duì)應(yīng)分子功能的GO富集分析柱狀以及氣泡圖，見(jiàn)圖5。結(jié)果顯示黃芩活性成分與靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的分子功能主要為核受體活性、轉(zhuǎn)錄因子活性、細(xì)胞因子受體結(jié)合、類(lèi)固醇激素受體活性、血紅素結(jié)合等方面、蛋白質(zhì)異源二聚體活動(dòng)、四吡咯結(jié)合、RNA聚合酶II近端啟動(dòng)子序列特異性DNA結(jié)合、BH域結(jié)合、近端啟動(dòng)子序列特異性DNA結(jié)合。

圖5 有效組分-基因靶點(diǎn)-分子功能的GO富集分析柱狀和氣泡圖

2.6 黃芩治療RA的KEGG通路富集分析

在DAVID 6.8在線(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì)44個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行富集分析，以P<0.01為篩選標(biāo)準(zhǔn)，最終得出24條通路富集結(jié)果，見(jiàn)表3，主要是細(xì)胞凋亡、PI3K-Akt 信號(hào)通路、內(nèi)分泌抵抗、MAPK 信號(hào)通路、鉑類(lèi)耐藥、HIF-1信號(hào)通路、p53信號(hào)通路、EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥、破骨細(xì)胞分化、細(xì)胞衰老、焦點(diǎn)粘連、Ras信號(hào)通路、細(xì)多種胞凋亡、VEGF信號(hào)通路、NF-kap?pa B信號(hào)通路、鞘脂類(lèi)信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路、趨化因子信號(hào)通路等信號(hào)通路。

表3 KEGG通路富集

2.7 黃芩活性成分治療RA分子對(duì)接結(jié)果分析

使用Cytoscape中的CytoNCA對(duì)RA 靶點(diǎn)進(jìn)行打分，得到網(wǎng)絡(luò)核心靶點(diǎn)，Degree ≥13的潛在靶點(diǎn)有14個(gè)，分別為：FOS、JUN、IL6、VEGFA、CXCL8、RELA、CASP3、MMP9、ESR1、CYCS、AKT1、MAPK14、PTGS2、CCL2。結(jié)合能小于0提示配體與受體可自發(fā)結(jié)合，且結(jié)合構(gòu)象越穩(wěn)定，所需結(jié)合能越低，本研究選取結(jié)合能≤-9.0 kcal/mol作為篩選條件，見(jiàn)表4。

表4 黃芩活性成分與靶蛋白的結(jié)合能

選取結(jié)合最穩(wěn)定的7 對(duì)配體受體組合（結(jié)合能≤-9.4 kcal/mol，進(jìn)行可視化分析，相對(duì)應(yīng)三維與二維對(duì)接模式圖，見(jiàn)圖6。

3 討論

本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討研究了黃芩治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的相互作用網(wǎng)絡(luò)與潛在治療機(jī)制，綜合表1、表2及圖2可得出黃芩主要有效化合物有36個(gè)，其治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的關(guān)鍵成分有6個(gè)，為豆甾醇、β-谷甾醇、黃芩甙元及漢黃芩素。豆甾醇可改善RA大鼠的臨床嚴(yán)重程度關(guān)節(jié)破壞和組織結(jié)構(gòu)，還可下調(diào)關(guān)節(jié)中NF-κBp65 和p38MAPK 的表達(dá)，顯著抑制促炎介質(zhì)（TNF-抑制劑、IL-6、IL-1 抑制劑、iN?OS 和COX-2）在機(jī)體內(nèi)的表達(dá)，增加抗炎細(xì)胞因子（IL-10）的表達(dá)[4]。當(dāng)RA組織內(nèi)巨噬細(xì)胞被高度激活時(shí)局部炎癥增強(qiáng)，可加速RA的發(fā)展。β-谷甾醇可抑制巨噬細(xì)胞促炎癥因子的產(chǎn)生，降低特異性抗體IgG的濃度，以此機(jī)制達(dá)到治療RA的作用[5]。黃芩甙元對(duì)腫瘤壞死因子-α（TNF-α）所介導(dǎo)的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維（RAFLS）增殖過(guò)程有顯著的抑制作用，能夠被巨噬細(xì)胞游走抑制（MIF）逆轉(zhuǎn)并呈劑量依賴(lài)性，提示黃芩甙元可能通過(guò)抑制MIF 信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)TNF-α介導(dǎo)的RAFLS 增殖的抑制作用[6]。漢黃芩素可抑制RA 的成纖維樣滑膜細(xì)胞（FLS）中IL-6mRNA的表達(dá)，對(duì)RA的FLS增殖有明顯的抑制作用[7]。以上研究提示豆甾醇、β-谷甾醇、黃芩甙元及漢黃芩素為黃芩治療RA的重要活性成分。

結(jié)合圖1、2、3、4 可知，黃芩對(duì)應(yīng)96 個(gè)有效作用靶點(diǎn)，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎對(duì)應(yīng)1 085個(gè)靶點(diǎn)，二者共有44個(gè)交集靶點(diǎn)，其中關(guān)鍵作用靶點(diǎn)有IL-6、VEGFA、PTGS2、FOS、JUN、MMP9等。IL-6可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞產(chǎn)生血小板活化因子（PAF），PAF 可通過(guò)擴(kuò)大炎癥反應(yīng)刺激FLS 增殖，促進(jìn)血瘀形成，從而間接影響RA 藥物在體內(nèi)的吸收、代謝、分布[8]。此外，RA 發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制之一是IL-6 對(duì)骨組織的多效性作用，IL-6 可促使核因子κB 受體活化配體（RANKL）的表達(dá)[9]。有研究顯示，功能單核苷酸多態(tài)性VEGFA的等位基因的表達(dá)可能降低老年患者和環(huán)瓜氨酸抗體（ACPA）陰性患者患RA 的風(fēng)險(xiǎn)[10]。在RA 中，PTGS2可促進(jìn)FLS 增殖和炎癥反應(yīng)，PTGS2 的降低可起到挽救被抑制的miR-101-3p 在RA 大鼠滑膜損傷和FLS表型改變的作用[11]。有研究顯示，許多參與促炎/促破壞特性的關(guān)鍵蛋白，如趨化因子/細(xì)胞因子和基質(zhì)降解酶，都受到AP-1 及其亞基JUN、JUNB、JUND和FOS 的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。FOS 啟動(dòng)子（rs2239615、rs7101）和JUN 啟動(dòng)子（rs4647009）的功能變異在RA 病例、膝關(guān)節(jié)炎病例和NC 人群中頻繁出現(xiàn)[12]。MMP9 可浸潤(rùn)滑膜和軟骨下骨組織（包括破骨細(xì)胞）中的炎癥細(xì)胞、血管膜組織和多核細(xì)胞[13]。MMP9參與RA中關(guān)節(jié)的破壞，激活細(xì)胞因子和趨化因子，并通過(guò)降解上皮基底膜和血管系統(tǒng)促進(jìn)組織破壞[14]。

對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行GO 功能富集分析和KEGG 通路富集分析，對(duì)探究黃芩治療RA的作用機(jī)制進(jìn)一步進(jìn)行探究。結(jié)果顯示，富集的生物學(xué)過(guò)程主要包括核受體活性、轉(zhuǎn)錄因子活性、細(xì)胞因子受體結(jié)合、類(lèi)固醇激素受體活性、血紅素結(jié)合、蛋白質(zhì)異源二聚體活動(dòng)、四吡咯結(jié)合、RNA聚合酶II近端啟動(dòng)子序列特異性DNA結(jié)合、BH域結(jié)合、近端啟動(dòng)子序列特異性DNA結(jié)合等方面。KEGG通路富集分析得出，這些共同靶點(diǎn)參與了細(xì)胞凋亡、PI3K-AKT 信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、破骨細(xì)胞分化、細(xì)胞衰老、趨化因子信號(hào)通路等信號(hào)通路的功能的調(diào)控。在有關(guān)RA 病機(jī)的研究中，研究人員在細(xì)胞凋亡時(shí)發(fā)現(xiàn)存在沖動(dòng)可在病理細(xì)胞的大量積累時(shí)，可通過(guò)不同類(lèi)型的干擾，致使正?；ぜ?xì)胞進(jìn)一步凋亡，經(jīng)體外研究證實(shí)，這種由細(xì)胞凋亡干擾所引起的滑膜細(xì)胞集聚被認(rèn)為是TNF和其他細(xì)胞因子的來(lái)源[15]。PI3K-AKT 信號(hào)通路已被證實(shí)與免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的疾病存在相關(guān)性[16]。MAPK信號(hào)通路負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子的過(guò)程，該過(guò)程最終可導(dǎo)致關(guān)節(jié)發(fā)炎和破壞[17]。RA 患者滑膜組織可能通過(guò)下調(diào)MAPK 通路負(fù)向調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞增殖[18]。Xue 等[19]研究表明，在關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的自噬和骨關(guān)節(jié)炎炎癥反應(yīng)過(guò)程中，PI3K-AKT信號(hào)降低，該現(xiàn)象從側(cè)面反映了PI3K-AKT 信號(hào)通路與RA 發(fā)病的關(guān)聯(lián)性。Malemud[20]的研究成果也顯示PI3K-AKT 信號(hào)在RA 細(xì)胞死亡中起關(guān)鍵作用?？筊A 的藥物通過(guò)調(diào)節(jié)MAPK 和VEGF 信號(hào)通路來(lái)抑制炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生和表達(dá)，來(lái)減少膠原蛋白的產(chǎn)生、抑制滑膜細(xì)胞增殖并減弱其侵襲能力，從而發(fā)揮抗RA的作用。HIF-1參與了多條細(xì)胞信號(hào)通路的作用過(guò)程[21]，B 細(xì)胞中HIF-1α的高表達(dá)可通過(guò)促使機(jī)體內(nèi)IL-6 的產(chǎn)生進(jìn)而影響T 細(xì)胞的分化[22]。骨細(xì)胞分化通路與RA 滑膜中許多物質(zhì)改變的通路有聯(lián)系。已有證據(jù)表明，RA 滑膜中所含有的破骨細(xì)胞可導(dǎo)致相應(yīng)受累關(guān)節(jié)的骨降解。Harshan等[23]證明了中性粒細(xì)胞胞漿因子（NCF）復(fù)合物在RA 滑膜中可產(chǎn)生活性氧（ROS）來(lái)驅(qū)動(dòng)破骨細(xì)胞形成的信號(hào)通路上調(diào)。證明了T細(xì)胞受體信號(hào)通路的增強(qiáng)促進(jìn)了受影響組織中破骨細(xì)胞的分化。類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病早期，淋巴結(jié)間質(zhì)細(xì)胞（LNSCs）的衰老可能加速病情的發(fā)展，LNSCs是外周耐受性的重要調(diào)節(jié)因子，與淋巴細(xì)胞的接觸密切，因此，功能失調(diào)的衰老LNSCs會(huì)潛在地導(dǎo)致外周耐受性缺陷病和全身性自身免疫病的發(fā)病[24]。由趨化因子及其受體所介導(dǎo)的白細(xì)胞遷移在類(lèi)風(fēng)濕滑膜類(lèi)炎癥的遷延過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用，該途徑可致RA滑膜細(xì)胞和破骨細(xì)胞對(duì)軟骨和骨的破壞[25]。

本研究通過(guò)分子對(duì)接，發(fā)現(xiàn)PTGS2 與黃芩中黃連堿、表小檗堿、刺槐素、5，7，2’，6’-泰特拉羥基黃酮、5，7，4’-三羥基-6-甲氧基黃酮、黃芩甙元和千層紙素等13種化學(xué)成分均與具有較好的結(jié)合性，對(duì)13種化學(xué)成分與PTGS2的結(jié)合模式進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)多個(gè)化合物與結(jié)合區(qū)域內(nèi)的氨基酸殘基Arg44、氨基酸殘基Cys36形成了較強(qiáng)的分子間氫鍵。同時(shí)，圖表顯示ESR1、RELA 與多個(gè)黃芩活性成分具有較好的結(jié)合性，提示黃芩可通過(guò)PTGS2、ESR1、RELA 途徑干預(yù)RA的活動(dòng)。

4 結(jié)論

本文采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)為研究方法，構(gòu)建“黃芩有效成分-靶點(diǎn)-RA”網(wǎng)絡(luò)，同時(shí)從整體上分析了黃芩成分-靶點(diǎn)-信號(hào)通路之間的相互作用關(guān)系，推測(cè)中藥黃芩可通過(guò)豆甾醇、β-谷甾醇、黃芩甙元、漢黃芩素等潛在藥效成分協(xié)同作用于NOS2、PTGS1、AR、PTGS2、ADRB2、RELA、BCL2、CDKN1A、BAX、CASP3 等多個(gè)靶點(diǎn)，通過(guò)細(xì)胞凋亡、PI3K-AKT 信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、破骨細(xì)胞分化、細(xì)胞衰老、趨化因子信號(hào)通路等多個(gè)信號(hào)通路協(xié)同作用，共同發(fā)揮治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用，初步揭示了黃芩治療RA的作用機(jī)制。但由于數(shù)據(jù)庫(kù)中納入的數(shù)據(jù)來(lái)源于不同的試驗(yàn)條件以及研究領(lǐng)域的局限性，且中藥在煎煮提取過(guò)程中可能產(chǎn)成新成分的或破壞原有成分，故納入數(shù)據(jù)分析的成分不能完整全面反映其實(shí)際作用于人體的成分。因此，本文對(duì)于未來(lái)更深入的機(jī)制研究具有一定的參考價(jià)值，但黃芩治療RA的具體機(jī)制有待更進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。