超聲輔助酶法制備海參性腺ACE抑制肽及其模擬體內(nèi)消化穩(wěn)定性的研究

李文欣，李海靜，張立娟，孫方達(dá)*

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，黑龍江 大慶 163711；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；3.天津市食品研究所有限公司，天津 301609）

海參性腺作為海參精深加工過程中的副產(chǎn)物，其營養(yǎng)價(jià)值極高（蛋白質(zhì)含量約為55%[1]，脫脂海參性腺蛋白質(zhì)含量約為80%[2]），富含多種氨基酸（谷氨酸、丙氨酸、天冬氨酸等），是優(yōu)質(zhì)的動(dòng)物多肽來源[3]。但因相應(yīng)加工技術(shù)落后和人為認(rèn)知等原因，海參性腺大多在加工海參產(chǎn)品后被拋棄，既造成資源浪費(fèi)又引起環(huán)境污染[4]。因此，海參性腺的回收利用不僅可以有效保護(hù)環(huán)境和減少資源浪費(fèi)，而且以海參性腺為原料提取的功能物質(zhì)也具有極高的生物活性和利用價(jià)值。胡楊[5]和蔡彬新等[6]研究表明，海參內(nèi)臟中還富含血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（angiotensin convert enzyme，ACE）抑制肽，可作為制備抑制肽的原料。

ACE抑制肽是一類具有ACE抑制活性的多肽物質(zhì)，其可以抑制ACE酶的活性，從而起到預(yù)防和治療高血壓等相關(guān)疾病的作用[7]。其中，動(dòng)物性ACE抑制肽的安全性高、穩(wěn)定性好、易被人體消化吸收，成為一種具有開發(fā)潛力的材料[8]。ACE抑制肽的提取方法有：分離提取法、微生物發(fā)酵法、基因工程法和酶解法等，其中酶解法最為常用[9]。雖然酶解法具有溫和、專一性強(qiáng)、操作簡單、安全性高且不會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染等優(yōu)點(diǎn)[10]，但其酶解時(shí)間長、效率低[11]。因此，為了提高酶解效率，可以采用其它技術(shù)相輔助，其中超聲輔助技術(shù)研究最為廣泛[12]。超聲波作用于酶解體系時(shí)可產(chǎn)生熱、空化以及機(jī)械效應(yīng)等，提高傳質(zhì)能力的同時(shí)促進(jìn)底物進(jìn)入酶的催化部位，使底物與酶的接觸機(jī)會(huì)增加，提高酶解速率，縮短酶解時(shí)間，獲得含量豐富的活性多肽[13]。Wang等[14]研究表明超聲波預(yù)處理可以顯著提高燕麥蛋白水解液的水解率和ACE抑制活性。李瑩等[15]利用超聲波輔助菠蘿蛋白酶制備泥鰍源ACE抑制肽，結(jié)果表明超聲波有效提高了酶解液的ACE抑制率。

因此，本文采用超聲預(yù)處理輔助中性蛋白酶水解海參性腺制備海參性腺ACE抑制肽，得出可以高效制備海參性腺ACE抑制肽的超聲預(yù)處理參數(shù)（功率、時(shí)間）和酶解條件（底物濃度、酶添加量、酶解時(shí)間），分析超濾后海參性腺ACE抑制肽的體外消化情況，從而為超聲輔助酶解制備海參性腺ACE抑制肽提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

海參性腺：大連水產(chǎn)有限公司；中性蛋白酶（酶活力為 81 137 U/g）、胃蛋白酶（酶活力為 16 000 U/g）、胰蛋白酶（酶活力為11 400 U/g）：北京索萊寶科技有限公司；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）（酶活力為2 U/mg～6 U/mg）、呋喃丙烯酰三肽 [N-（3-（2-furyl）acryloyl）-phe-gly-gly，F(xiàn)APGG]、4-羥乙基哌嗪乙磺酸 {2-[4-（2-hydroxyethyl）-1-piperazine]ethanesulfonic acid，HEPES}：Sigma公司；所用化學(xué)試劑為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

AL-104-精密電子天平：廣州森美特輕工機(jī)械制造有限公司；DHG-9240A型電熱鼓風(fēng)干燥箱：蘇州歐文烘箱制造有限公司；FE20K型pH計(jì)：蘇州華宏儀表有限公司；GL-21M冷凍離心機(jī)：上海思龍科學(xué)儀器有限公司；SCIENTZ-ⅡD型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)：南京吮瑪儀器設(shè)備有限公司；L-8900全自動(dòng)氨基酸分析儀：廣州儀德精密科學(xué)儀器股份有限公司；721型可見分光光度計(jì)：西安凱美克儀器設(shè)備有限公司；Millipore超濾管3、10 kDa：密理博中國有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 海參性腺基本物質(zhì)含量的測定

參照GB 5009.3—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測定》，利用直接干燥法測定水分含量[16]；參照GB 5009.6—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪的測定》，利用索式抽提法測定粗脂肪含量[17]；參照GB 5009.4—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測定》，利用灼燒稱重法測定灰分含量[18]；參照GB5009.5—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測定》，利用凱氏定氮法測定粗蛋白含量[19]；氨基酸組成分析參照GB 5009.124—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基酸的測定》[20]。

1.3.2 海參性腺脫脂

海參性腺凍干研磨成粉，過60目篩，取100 g粉加入400 mL正己烷和50 mL乙醇（8∶1，體積比）攪拌1 h，在 4℃、8 000×g離心力條件下離心 10 min，重復(fù)操作兩次。將脫脂后的海參性腺粉在室溫（25±1）℃下自然風(fēng)干，然后置于-20℃條件下保存。

1.3.3 超聲預(yù)處理

用蒸餾水溶解海參性腺脫脂凍干粉，將其配制成一定濃度的溶液。研究不同超聲功率和超聲時(shí)間對(duì)海參性腺蛋白酶解特性的影響。每個(gè)因素的水平設(shè)計(jì)如下：超聲功率 100、200、300、400、500 W，超聲 15 min；超聲處理時(shí)間 5、15、25、35 min，超聲功率 200 W。其中超聲波間歇模式為超聲工作2 s和間歇2 s。

1.3.4 海參性腺酶解

將超聲預(yù)處理后的溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，加入中性蛋白酶（酶活力為81 137 U/g），在50℃下酶解一定時(shí)間。酶解完成后，再熱水?。?00℃）10 min使中性蛋白酶滅活，然后10 000×g離心30 min，得到上清液并檢測其ACE酶抑制活性，并將其凍干成粉在-20℃下儲(chǔ)存便于后面試驗(yàn)使用。

因素水平考察如下：底物濃度0.5%、1.0%、2.0%、3.0%、4.0%、5.0%，酶解時(shí)間為2h，酶添加量為4500U/g；酶解時(shí)間 1、2、3、4、5、6 h，底物濃度為 2%，酶添加量為 4 500 U/g；酶添加量 1 500、3 000、4 500、6 000、7 500 U/g，底物濃度為2%，酶解時(shí)間為2 h。

1.3.5 水解度的測定

水解度采用pH-stat方法測定[21]，由下式計(jì)算

式中：Nb為堿液的濃度，mol/L；B為堿液的體積，mL；Mp為水解液中蛋白質(zhì)質(zhì)量，g；Htot為原蛋白質(zhì)中總肽鍵數(shù)，海參性腺蛋白為8.2 mmol/g；h為被裂解的肽鍵數(shù)，mmol/g；1/α為校正系數(shù)，受特定pH值和溫度影響；pK為α-氨基酸的平均pK值，按7.0算。

1.3.6 ACE抑制率的測定

FAPGG作為ACE的底物，測定時(shí)具體添加組分和濃度見表1。

表1 添加組分和濃度Table 1 Add component and concentration

用酶標(biāo)儀在340 nm處測定空白孔和樣品孔的初始吸光度和37℃下反應(yīng)30 min后的吸光度，初始吸光度分別為A1和B1，反應(yīng)后吸光度分別為A2和B2。平行測定5組。抑制率可用下式表示。

參考丁青芝[21]的方法在ACE抑制率的基礎(chǔ)上測定IC50。

1.3.7 水解物的分級(jí)分離

用10、3kDa的超濾管對(duì)酶解液超濾離心（10000×g，5 min），得到不同分子量（molecular weight，MW）的3個(gè)組分，組分 I：MW＞10 kDa；組分 II：3 kDa＜MW＜10 kDa；組分III：MW＜3 kDa。將得到的肽片段濾出液，一部分經(jīng)真空冷凍處理后變?yōu)閮龈煞?；一部?℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.8 體外模擬胃腸消化試驗(yàn)

根據(jù)馬勇等[22]的方法對(duì)海參性腺ACE抑制肽的消化穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)估。用4 mol/L的HCl將肽溶液的pH值調(diào)節(jié)至 2.0。加入胃蛋白酶（E/S＝16 000 U/g），然后將混合物在37℃溫育2 h。用0.9 mol/L的NaHCO3將pH值調(diào)節(jié)至5.3，并用1 mol/L的NaOH中和pH值至7.0。將試管放于沸水中10 min以終止反應(yīng)。隨后將樣品在冰上冷卻至室溫（25±1）℃，并在 10 000×g、4 ℃下離心10 min。將上清液分為兩部分。一部分凍干并在分析之前儲(chǔ)存在-20℃。另一部分用1 mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.5，并在37℃下用胰蛋白酶（E/S=11 400 U/g）進(jìn)一步消化2 h。然后將混合物滅活，離心并凍干以進(jìn)行進(jìn)一步分析。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

每個(gè)進(jìn)行3次重復(fù)。所得數(shù)據(jù)用Excel整理，使用Statistix 8.0軟件的Tukey HSD程序進(jìn)行顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著。采用SigmaPlot 12.5軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 海參性腺基本營養(yǎng)成分和氨基酸組成分析

2.1.1 基本營養(yǎng)成分

海參性腺基本營養(yǎng)成分見表2。

表2 海參性腺基本營養(yǎng)成分Table 2 Contents of basic nutrients of sea cucumber gonads

表2顯示了干海參性腺基本成分組成：海參性腺中水分、灰分和粗脂肪含量分別為4.91%、17.63%和12.83%，而粗蛋白含量占總質(zhì)量的42.86%，這表明海參性腺蛋白質(zhì)含量豐富，秦洪[23]也發(fā)現(xiàn)海參內(nèi)臟中蛋白質(zhì)的含量較高（59.5%），遠(yuǎn)高于一般動(dòng)物源食品，因此可作為制備動(dòng)物源蛋白質(zhì)及相應(yīng)多肽制品的原料。

2.1.2 氨基酸組成

海參性腺氨基酸組成如表3所示。

表3 海參性腺氨基酸組成分析Table 3 Amino acid composition of sea cucumber gonads

海參性腺共含有17種氨基酸，包括8種必需氨基酸（蘇氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸）和9種非必需氨基酸，兩者分別占總氨基酸含量的47.17%和52.83%，必需氨基酸/非必需氨基酸值為0.89。Lee等[24]發(fā)現(xiàn)海參內(nèi)臟中必需氨基酸/非必需氨基酸值（0.99～1.15）比海參體壁（0.67～0.78）的高。秦洪[23]指出必需氨基酸/非必需氨基酸值越高，蛋白的價(jià)值越高。

海參性腺還含有8種疏水性氨基酸（丙氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸），占總氨基酸含量39.50%。賈俊強(qiáng)[25]研究發(fā)現(xiàn)，疏水性氨基酸含量與ACE抑制肽活性呈正相關(guān)，因?yàn)槭杷被嶷呄蛴诖嬖贏CE抑制肽的C端，C端氨基酸對(duì)提高抑制肽的活性具有重要的作用。故海參性腺疏水性氨基酸含量高說明其適合于ACE抑制肽的制備。

2.2 超聲輔助酶解條件對(duì)海參性腺水解物水解度和ACE抑制率的影響

2.2.1 超聲預(yù)處理?xiàng)l件對(duì)海參性腺水解物水解度和ACE抑制率的影響

2.2.1.1 超聲功率

超聲功率對(duì)海參性腺水解物的水解度和ACE抑制率影響見圖1。

圖1 超聲功率對(duì)海參性腺水解物的水解度和ACE抑制率的影響Fig.1 Effects of ultrasound power on DH and ACE-inhibition rate of hydrolysates from sea cucumber gonad

由圖1可知，水解度隨超聲功率的增加呈現(xiàn)先升后降的趨勢，水解度在300 W時(shí)達(dá)到最大值8.75%（P＜0.05）。這可能是因?yàn)檫m度的超聲波處理可以改變底物蛋白的空間結(jié)構(gòu)，增加了底物與蛋白酶的結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致海參性腺蛋白中的大量肽鍵被水解，從而使水解度升高。ACE抑制率隨超聲功率的增加呈現(xiàn)相同的趨勢，ACE抑制率在超聲功率為200 W時(shí)達(dá)到最大值（73.8%），與未超聲組相比，ACE抑制率顯著提高了13.7%（P＜0.05）。李瑩等[15]得到類似的結(jié)果：適當(dāng)功率（350 W）超聲波輔助酶解泥鰍可以顯著提高酶解液ACE抑制活性。這是因?yàn)槌暪β实脑黾訉?dǎo)致空化效應(yīng)產(chǎn)生的能量增加，疏松了海參性腺蛋白結(jié)構(gòu)，更多酶結(jié)合位點(diǎn)和疏水性氨基酸基團(tuán)被暴露，在酶解過程中釋放出更多的ACE抑制肽，由此獲得更高的ACE抑制率[26]。而過高功率的超聲可能會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的空化效應(yīng)，使蛋白質(zhì)發(fā)生碰撞而折疊，從而引起蛋白質(zhì)聚集，進(jìn)一步導(dǎo)致酶解位點(diǎn)減少，不利于酶解。此外，毛麗等[27]認(rèn)為高功率超聲產(chǎn)生過多的空化泡，形成聲波屏障，不利于超聲作用于全部物料。綜上，超聲功率為200 W時(shí)酶解效果最理想。

2.2.1.2 超聲時(shí)間

超聲時(shí)間對(duì)海參性腺水解物的水解度和ACE抑制率影響見圖2。

圖2 超聲時(shí)間對(duì)海參性腺水解物的水解度和ACE抑制率的影響Fig.2 Effects of ultrasound time on DH and on ACE-inhibition rate of hydrolysates from sea cucumber gonad

由圖2可知，海參性腺水解物的水解度和ACE抑制率隨超聲時(shí)間的延長呈現(xiàn)先升后降的趨勢，超聲15 min時(shí)，與未超聲組相比，水解度和ACE抑制率分別提高了25.9%和13.2%。Wang等[14]在超聲輔助酶解處理燕麥分離蛋白的試驗(yàn)中得到了相似的結(jié)果：水解度和ACE抑制率隨超聲時(shí)間的延長呈現(xiàn)先升后降的趨勢，超聲20 min時(shí)兩者均達(dá)到最大值。超聲波能夠誘導(dǎo)蛋白質(zhì)分子展開，使蛋白質(zhì)分子間的疏水相互作用被破壞，暴露更多的疏水基團(tuán)和區(qū)域，導(dǎo)致水解度的增加，并產(chǎn)生更多具有ACE抑制活性的肽[28]。而較長時(shí)間的超聲處理會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)重新卷曲、折疊，使暴露的酶位點(diǎn)再次包裹在蛋白質(zhì)內(nèi)部，不利于酶解[14]。同時(shí)，疏水基團(tuán)因過長時(shí)間的超聲處理而暴露、交聯(lián)，隱藏了疏水性氨基酸，ACE抑制肽的產(chǎn)生被抑制[29]。

2.2.2 酶解條件對(duì)海參性腺水解物水解度和ACE抑制率的影響

2.2.2.1 底物濃度

底物濃度對(duì)海參性腺水解物的水解度和ACE抑制率影響見圖3。

圖3 底物濃度對(duì)海參性腺水解物的水解度和ACE抑制率的影響Fig.3 Effects of substrate concentration on DH and on ACE-inhibition rate of hydrolysates from sea cucumber gonad

由圖3可知，底物濃度的增大導(dǎo)致水解度和ACE抑制率先增后降，水解度在底物濃度為1.0%時(shí)有最大值（P＜0.05），ACE抑制率在底物濃度為2.0%～3.0%時(shí)較高（P＜0.05）。適當(dāng)?shù)牡孜餄舛瓤梢允钩暱栈a(chǎn)生的作用力充分的作用在蛋白顆粒上，使底物與酶的結(jié)合更有效，促進(jìn)酶解反應(yīng)，從而提高了酶解反應(yīng)速率，導(dǎo)致水解度和ACE抑制率增大[25]。然而隨著底物濃度的不斷增加，增加了物料黏度，因而抑制了酶解反應(yīng)的繼續(xù)進(jìn)行，從而使海參性腺中活性肽釋放量減少，引起水解度和ACE抑制率下降[30]。

2.2.2.2 酶解時(shí)間

酶解時(shí)間對(duì)海參性腺水解物的水解度和ACE抑制率的影響見圖4。

圖4 酶解時(shí)間對(duì)海參性腺水解物的水解度和ACE抑制率的影響Fig.4 Effects of enzymatic hydrolysis time on DH and on ACE-inhibition rate of hydrolysates from sea cucumber gonad

由圖4可知，水解度隨著酶解時(shí)間的增加先逐漸增大后趨于平緩。王紫微[30]在超聲輔助酶解克氏原螯蝦的試驗(yàn)中得到了類似的結(jié)果：水解度隨酶解時(shí)間的延長先上升后趨于平緩。在反應(yīng)初期，蛋白酶活性較高，反應(yīng)速率較快，隨著時(shí)間的延長，酶解反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)，蛋白酶的活性降低，導(dǎo)致水解度增長緩慢[31]。ACE抑制率隨著酶解時(shí)間的增加先急劇升高后逐漸降低，ACE抑制率在酶解2 h時(shí)達(dá)到最高值73.8%（P＜0.05）。酶解初期，底物蛋白含量高、酶活性高和產(chǎn)物少等條件促使底物蛋白被迅速分解為多肽片段，ACE抑制肽含量增加，因此使ACE抑制率得到提高[21]。隨著酶解時(shí)間的進(jìn)一步延長，降低了ACE抑制活性，這是由于過長的酶解時(shí)間會(huì)導(dǎo)致酶與蛋白質(zhì)的過度反應(yīng)，多肽進(jìn)一步降解為小分子短肽或游離氨基酸，過短的肽段不具有ACE抑制活性[14]。

2.2.2.3 酶添加量

酶添加量對(duì)海參性腺水解物的水解度和ACE抑制率的影響見圖5。

圖5 酶添加量對(duì)海參性腺水解物的水解度和ACE抑制率的影響Fig.5 Effects of enzyme concentration on DH and on ACE-inhibition rate of hydrolysates from sea cucumber gonad

由圖5可以看出，水解度隨著加酶量的增加（1 500 U/g～7 500 U/g）先上升后趨于平穩(wěn)。曹榮等[3]也發(fā)現(xiàn)海參性腺水解度隨中性蛋白酶添加量的增加呈現(xiàn)先上升后平緩的趨勢。當(dāng)?shù)孜餄舛纫欢〞r(shí)，酶含量增加，酶與底物結(jié)合位點(diǎn)增多，酶解速率加快，酶解產(chǎn)物中小分子肽含量增加，水解度上升[21]。當(dāng)酶添加量達(dá)到6 000 U/g時(shí)，酶與底物間的接觸位點(diǎn)可能接近飽和，因此水解度的增加速率逐漸放緩[32]。海參性腺酶解液的ACE抑制率隨著酶的添加先升高后降低，當(dāng)酶添加量為4 500 U/g時(shí)產(chǎn)物的ACE抑制率達(dá)到最大（73.6%）。這是因?yàn)殡S著酶量的增加，海參性腺的酶解更加充分，增加了ACE抑制肽的釋放，從而使ACE抑制率升高[30]。而酶添加量過大會(huì)使海參性腺過度水解，把釋放出的ACE抑制肽水解成失活片段或變?yōu)榈突钚缘碾钠蝃25]，降低ACE抑制率。

2.3 海參性腺蛋白水解物體外胃腸模擬消化研究

2.3.1 水解物不同組分的ACE抑制率

海參性腺酶解液是由不同分子量（molecular weight，MW）的多肽組成的混合物，超濾離心后，酶解液被濃縮，從而使具有ACE抑制活性的肽的濃度增加。將上述處理?xiàng)l件下（超聲預(yù)處理功率200 W，超聲時(shí)間15 min，底物濃度2%，酶解時(shí)間2 h，酶添加量4 500 U/g）制備的海參性腺酶解液經(jīng)超濾后按分子量分為 3 個(gè)組分：組分 I（MW＞10 kDa）、組分 II（3 kDa＜MW＜10 kDa）和組分III（MW＜3 kDa），具體見圖6。

圖6 海參性腺水解物經(jīng)超濾后得到的3個(gè)不同分子量組分以及各自組分的ACE抑制活性Fig.6 ACE inhibitory activities of hydrolysates from sea cucumber gonad and its three fractions after ultrafiltration

由圖6可知，與未超濾組相比（IC50=3.97mg/mL），第III組分顯示出最高的ACE抑制活性（IC50=1.37mg/mL），第I組分具有最低的活性（IC50=6.60 mg/mL）。這說明海參性腺ACE抑制活性與肽分子量大小有關(guān)，二者呈負(fù)相關(guān)，當(dāng)分子量小于3 kDa時(shí)，抑制效果最為顯著（P＜0.05）。張可佳[33]制備牡蠣ACE抑制肽后發(fā)現(xiàn)：與原酶解液和分子量大于3 kDa的組分相比，小于3 kDa的超濾液的ACE抑制活性較高。此外，Jin等[34]也發(fā)現(xiàn)肽的活性強(qiáng)弱與其自身的分子量大小密切相關(guān)，分子量越小，ACE抑制活性越高。

2.3.2 消化模擬

ACE抑制肽普遍為口服液，進(jìn)入體內(nèi)經(jīng)腸道消化酶降解后會(huì)造成生物活性的改變[35]。因此體外模擬降血壓肽抗腸道酶降解是很有必要的。表4顯示了將海參性腺蛋白酶解液經(jīng)超濾后得到不同分子量的組分，模擬胃消化（胃蛋白酶）和腸消化（胃蛋白酶+胰蛋白酶）后的ACE抑制活性。

表4 海參性腺水解物超濾所得的不同分子量多肽經(jīng)體外消化后產(chǎn)物的ACE抑制活性Table 4 ACE inhibitory activities of peptides of different molecular weights obtained from ultrafiltration of sea cucumber gonad hydrolysate after intestinal digestion in vitro

通過胃消化和腸消化后，與未超濾的海參性腺酶解液相比，超濾后的肽段ACE抑制活性均顯著提高（P＜0.05），這可能是由于超濾后的多肽經(jīng)消化后形成活性更高的小分子ACE抑制肽。Tagliazucchi等[36]也發(fā)現(xiàn)了菜豆酶解產(chǎn)物在體外胃腸模擬消化試驗(yàn)中表現(xiàn)出較強(qiáng)的ACE抑制活性。相同肽段的海參性腺酶解液經(jīng)胃蛋白酶與兩種酶共同作用后的IC50值并無顯著差異（P＞0.05），說明酶解液中部分ACE抑制肽仍具有較高活性，消化對(duì)酶解液活性無顯著影響。因此，消化前后海參性腺ACE抑制肽活性差異并不大，在體內(nèi)能夠表現(xiàn)出很好的穩(wěn)定性并發(fā)揮其功能。

3 結(jié)論

通過測定水解度和ACE抑制率，篩選得出了制備海參性腺ACE抑制肽的最佳工藝條件：超聲預(yù)處理功率200 W，超聲時(shí)間15 min，底物濃度2%，酶解時(shí)間2 h，酶添加量4 500 U/g。超濾后肽的分子量與ACE抑制活性呈負(fù)相關(guān)，經(jīng)胃消化（胃蛋白酶）、腸消化（胃蛋白酶+胰蛋白酶）后，ACE抑制肽并未降解，穩(wěn)定性較好。因此，超聲波輔助酶解法可作為制備海參性腺ACE抑制肽的有效方法。