五味子商品規(guī)格等級(jí)及其質(zhì)量評(píng)價(jià)*

劉小康，貢濟(jì)宇，蔡廣知，張?zhí)熘?/p>

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春 130117)

五味子為木蘭科植物五味子[Schisandrachinensis(Turcz.) Baill]的干燥成熟果實(shí)，呈不規(guī)則的球形或扁球形，直徑5～8 mm。表面紅色、紫紅色或暗紅色，皺縮，顯油潤(rùn)；有的表面呈黑紅色或出現(xiàn)“白霜”。果肉柔軟，種子1或2粒，腎形，表面棕黃色，有光澤，種皮薄而脆。果肉氣微，味酸；種子破碎后，有香氣，味辛、微苦[1]。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，以個(gè)大飽滿、果肉豐厚、有油性及光澤者為佳[2]。五味子化學(xué)成分主要有木脂素、揮發(fā)油、有機(jī)酸、萜類(lèi)、黃酮、多糖等；藥理研究表明其具有較好的心血管保護(hù)作用、抗氧化和免疫活性，在心血管疾病、肺病、抗疲勞及腫瘤輔助治療等方面具有廣泛的應(yīng)用前景[3-6]。

中藥材等級(jí)劃分具有十分重要的意義：實(shí)現(xiàn)優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)，促進(jìn)企業(yè)持續(xù)健康發(fā)展，穩(wěn)定中藥材質(zhì)量，確保臨床用藥產(chǎn)生良好療效，滿足不同層次需求，規(guī)范藥材市場(chǎng)，利于有效監(jiān)督和管理[7-10]。因此，如何合理制定中藥材等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)成為研究難題，我國(guó)著名中藥學(xué)家謝宗萬(wàn)教授概括提出，“辨狀論質(zhì)”是中藥品種傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別之精髓的觀點(diǎn)，“辨狀”的內(nèi)容包括辨藥材的形狀、大小、色澤、表面特征、質(zhì)地、斷面特征及氣味等；“論質(zhì)”則有兩方面的結(jié)論：一是藥材的真?zhèn)?，二是?yōu)劣評(píng)判[11-13]。在《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》中對(duì)果實(shí)類(lèi)且外形為圓形或橢圓形的藥材規(guī)格等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)以質(zhì)量或干癟率為指標(biāo)，北五味子以干癟粒不超過(guò)2%，20%將其分為一、二等[14]。

當(dāng)前市場(chǎng)對(duì)五味子以粒大、飽滿為優(yōu)。按大小分為兩個(gè)等級(jí)，或不分等級(jí)，但不論是哪種規(guī)格等級(jí)，其中均會(huì)混有其他大小不一致的五味子，這是目前市場(chǎng)普遍存在的一種現(xiàn)象。此外，五味子倉(cāng)儲(chǔ)過(guò)程中，色澤出現(xiàn)由紅色、紫紅色或暗紅色轉(zhuǎn)變?yōu)楹谏默F(xiàn)象。目前市場(chǎng)對(duì)五味子等級(jí)劃分界限不明確，且選貨為種植戶(hù)手工挑選，因此相同等級(jí)下五味子性狀差異明顯，大小不一，基于此，筆者在市場(chǎng)調(diào)研、本草考證及數(shù)據(jù)分析基礎(chǔ)上，篩選五味子外觀性狀指標(biāo)，結(jié)合市場(chǎng)交易合理、簡(jiǎn)便、快捷的原則，制定以外觀量化指標(biāo)為主的五味子商品規(guī)格等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)評(píng)價(jià)其內(nèi)在質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1本草考證與市場(chǎng)調(diào)研 對(duì)五味子歷代本草、商品規(guī)格、相關(guān)專(zhuān)著、文獻(xiàn)及標(biāo)準(zhǔn)等進(jìn)行查閱；在各藥材市場(chǎng)進(jìn)行實(shí)地走訪，調(diào)查五味子的來(lái)源、傳統(tǒng)鑒別及市場(chǎng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)情況；通過(guò)以上信息，提取其性狀特征和內(nèi)在質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1.2樣品收集 收集道地產(chǎn)區(qū)、主產(chǎn)地、藥材主流市場(chǎng)、集散地的五味子樣品共44批，經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室蔡廣知副教授鑒定為木蘭科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill干燥成熟果實(shí)。樣本詳細(xì)信息見(jiàn)表1。

表1 五味子樣品信息

1.3外觀性狀選擇依據(jù) 以傳統(tǒng)的“辨狀論質(zhì)”為基礎(chǔ)，結(jié)合2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》對(duì)五味子性狀描述、本草考證及市場(chǎng)調(diào)研，確定性狀指標(biāo)?！镀呤N藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》記載五味子呈不規(guī)則的球形或橢圓形，并規(guī)定了各等級(jí)五味子干癟粒限量：一等品干癟粒不超過(guò)2%、二等品干癟粒不超過(guò)20%。2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》在性狀項(xiàng)下記載了五味子藥材形狀為不規(guī)則的球形或扁球形，直徑為5～8 mm，果肉柔軟，種子1或2個(gè)，腎形，表面紅色、紫紅色或暗紅色。綜上所述，五味子藥材等級(jí)劃分的標(biāo)準(zhǔn)是干癟率、藥材大小及色澤。

1.4外觀性狀指標(biāo)測(cè)量 本研究采用圓錐四分法隨機(jī)從各批次藥材中取出1000粒，記錄各批次樣品1000個(gè)五味子含干癟粒個(gè)數(shù)；外觀性狀及數(shù)量指標(biāo)的篩選結(jié)果進(jìn)行取樣，隨機(jī)選取每份樣品50個(gè)，分別測(cè)量并記錄每個(gè)藥材直徑、單個(gè)質(zhì)量，取均值；直徑采用游標(biāo)卡尺測(cè)量；單個(gè)質(zhì)量采用電子天平測(cè)量。

色度測(cè)定采用評(píng)價(jià)系統(tǒng)為國(guó)際照明委員會(huì)1976L*a*b*標(biāo)準(zhǔn)色度系統(tǒng)，其中L*表示明度，a*和b*表示不同的色調(diào)方向。L*值越大明度越大，色澤越白；反之越暗。a*表示紅綠方向，+a*表示紅方向，-a*表示綠方向。b*表示黃藍(lán)方向，+b*表示黃方向，-b*表示藍(lán)方向[15]。各批次五味子粉碎(過(guò)孔徑0.355 mm藥篩)測(cè)定L*、a*、b*值[9]。

1.5內(nèi)在指標(biāo)的選擇及測(cè)量 按照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》五味子項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定，對(duì)每份樣品的水分(通則0832第二法)、灰分(通則2302)進(jìn)行檢查，對(duì)醇浸出物(通則2201，熱浸法)及五味子醇甲含量進(jìn)行測(cè)定[1]。

1.5.1五味子醇甲含量測(cè)定 色譜條件：色譜柱：Hpersil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相為甲醇A-水B(65：35)。檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣體積：10 μL。理論板數(shù)按五味子醇甲計(jì)算應(yīng)不低于2000。

1.5.2對(duì)照品溶液的制備 取五味子醇甲對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加入甲醇制成每毫升含五味子醇甲0.299 mg的溶液，即得。

1.5.3供試品溶液的制備 稱(chēng)取S1～S44五味子藥材過(guò)孔徑0.355 mm藥篩粉末各0.25 g，精密稱(chēng)定，置20 mL量瓶中，加入甲醇20 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率20 kHz)20 min后取出，稱(chēng)質(zhì)量，加甲醇補(bǔ)充減失量，搖勻后用漏斗濾過(guò)，棄去初濾液取續(xù)濾液。用孔徑0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

1.5.4樣品含量測(cè)定 取各批次的五味子藥材(過(guò)孔徑0.355 mm藥篩)粉末約0.25 g，精密稱(chēng)定，依法制備供試品溶液，依色譜條件進(jìn)行測(cè)定。外標(biāo)法計(jì)算各批次五味子醇甲含量。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Excel及SPSS21.0版軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；描述統(tǒng)計(jì)、主成分分析及方差分析篩選性狀指標(biāo)，用K-聚類(lèi)分析獲等級(jí)劃分的聚類(lèi)中心值，篩選五味子藥材等級(jí)劃分指標(biāo)。分析內(nèi)在成分與外觀性狀的相關(guān)性，采用多重比較方法分析各產(chǎn)區(qū)、主流市場(chǎng)及各等級(jí)間內(nèi)在成分的差異。

2 結(jié)果

2.1本草考證及市場(chǎng)調(diào)研 五味子始載于東漢《神農(nóng)本草經(jīng)》，并列為上品，已有2000多年的藥用歷史。五代后蜀《蜀草》(重廣英公木草)韓保昇曰：蔓生，莖赤色，花黃白，子生青熟紫，亦具五色，味甘者佳。據(jù)明代李時(shí)珍《本草綱目》記載：“五味子今有南北之分，南產(chǎn)者紅，北產(chǎn)者黑，入滋補(bǔ)藥，必用北者為良”。

1984年頒布的《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)五味子商品規(guī)格等級(jí)作了明確的規(guī)定。2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》[性狀]項(xiàng)下，對(duì)五味子性狀進(jìn)行了描述。

2.2市場(chǎng)調(diào)研 市場(chǎng)上銷(xiāo)售的五味子主要產(chǎn)于黑龍江、吉林、遼寧、內(nèi)蒙古、河北、山西、寧夏、甘肅、山東等地，但銷(xiāo)售基本不按產(chǎn)地劃分規(guī)格等級(jí)；優(yōu)劣主要以色澤鮮艷、粒大果肉豐滿為佳，部分商家以客戶(hù)要求常將五味子分為一等、二等，但多數(shù)商家未分規(guī)格等級(jí)。

2.3外觀性狀指標(biāo)選擇

2.3.1外觀性狀指標(biāo) 依據(jù)本草考證、2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》及市場(chǎng)調(diào)研的實(shí)際情況，選擇以色度、直徑及單個(gè)質(zhì)量3個(gè)外觀性狀作為五味子性狀測(cè)量指標(biāo)；依據(jù)《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》測(cè)定其干癟率，并將其作為外在等級(jí)評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2.3.2數(shù)量指標(biāo)選擇 由各指標(biāo)的測(cè)量可知，五味子直徑的RSD變化均在測(cè)量45粒之后趨于平穩(wěn)，因此在測(cè)量外觀性狀指標(biāo)時(shí)，每份樣品隨機(jī)重復(fù)測(cè)定50粒五味子藥材。見(jiàn)圖1。

圖1 五味子直徑的RSD隨測(cè)量個(gè)數(shù)的變化

2.4五味子分級(jí)指標(biāo)篩選

2.4.1描述統(tǒng)計(jì)分析 外觀性狀的描述統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見(jiàn)表2。五味子藥材的單個(gè)質(zhì)量、直徑、色度a*及干癟率相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較大，色度L*、b*RSD較小，結(jié)果說(shuō)明，各批次五味子之間色度L*、b*差異較小，故不作為等級(jí)評(píng)級(jí)性狀測(cè)量指標(biāo)；五味子單個(gè)質(zhì)量、直徑、色度a*及干癟率有較大差異，可作為劃分五味子商品規(guī)格等級(jí)指標(biāo)的重要依據(jù)。

表2 描述統(tǒng)計(jì)分析

2.4.2主成分分析 第一主成分特征根為2.720，貢獻(xiàn)率為67.992%，累積貢獻(xiàn)率達(dá)67.992%，超過(guò)65%，已能較全面地反映所有樣本的信息。因此，選取一個(gè)成分及特征向量進(jìn)行分析，特征向量的大小反映各指標(biāo)對(duì)主成分貢獻(xiàn)的大小。根據(jù)數(shù)據(jù)中特征向量較大的指標(biāo)結(jié)合市場(chǎng)上五味子的規(guī)格等級(jí)劃分及簡(jiǎn)便易行的原則結(jié)合《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》及2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》的規(guī)定，選擇五味子藥材的單個(gè)質(zhì)量、直徑、色度a*及干癟率為分級(jí)指標(biāo)。

2.4.3方差分析 單個(gè)質(zhì)量、直徑、色度a*及干癟率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，綜上所述，4個(gè)指標(biāo)可以作為五味子商品規(guī)格等級(jí)劃分的重要指標(biāo)。方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 分級(jí)指標(biāo)方差分析

2.4.4聚類(lèi)分析 聚類(lèi)分析是將其按照相似性來(lái)分類(lèi)，因此，它是一種客觀分組的方法，聚類(lèi)的意思是“物以類(lèi)聚”，目的是在沒(méi)有先驗(yàn)知識(shí)指導(dǎo)的情況下，通過(guò)合理的方法收集具有相似關(guān)系的數(shù)據(jù)，使不同類(lèi)的數(shù)據(jù)顯現(xiàn)最大差異。以44批五味子藥材的4個(gè)指標(biāo)為原始數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS21.0版軟件進(jìn)行聚類(lèi)分析，類(lèi)間距離采用Ward法，而試樣間的距離采用歐氏距離，結(jié)合K-均值聚類(lèi)分析處理，最終聚類(lèi)中心值見(jiàn)表4。以K-聚類(lèi)的最終聚類(lèi)中心值為參考值，《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》結(jié)合實(shí)際操作和市場(chǎng)上對(duì)五味子商品規(guī)格等級(jí)的劃分情況及專(zhuān)家建議，建立了五味子的商品規(guī)格等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5。

表4 五味子最終聚類(lèi)中心

表5 五味子藥材商品規(guī)格等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

2.5各等級(jí)、產(chǎn)區(qū)及主流市場(chǎng)五味子質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.5.1外觀性狀指標(biāo)與內(nèi)在指標(biāo)的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析結(jié)果見(jiàn)表6。結(jié)果表明五味子外觀性狀間具有相關(guān)性：色度a*值與直徑、單個(gè)質(zhì)量存在顯著正相關(guān)，與干癟率存在顯著負(fù)相關(guān)；單個(gè)質(zhì)量與水分存在顯著負(fù)相關(guān)；干癟率與五味子醇甲含量存在顯著負(fù)相關(guān)，五味子醇甲含量與浸出物含量存在正相關(guān)。

表6 五味子外觀性狀指標(biāo)與內(nèi)在指標(biāo)相關(guān)性分析

2.5.2各產(chǎn)區(qū)及主流市場(chǎng)內(nèi)在指標(biāo)的多重比較分析 內(nèi)在指標(biāo)的多重比較分析見(jiàn)表7。各產(chǎn)區(qū)五味子水分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，主流市場(chǎng)灰分相比其他產(chǎn)區(qū)有顯著差異；主流市場(chǎng)、集散地浸出物和五味子醇甲含量低于道地產(chǎn)區(qū)和主產(chǎn)區(qū)。

表7 五味子內(nèi)在指標(biāo)的多重比較分析

2.5.3不同等級(jí)內(nèi)在指標(biāo)的多重比較分析 不同等級(jí)五味子內(nèi)在指標(biāo)的多重比較分析見(jiàn)表8。兩個(gè)規(guī)格等級(jí)之間五味子水分、灰分、醇浸出物差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，一等品五味子醇甲含量顯著高于二等品。

表8 不同等級(jí)內(nèi)在指標(biāo)的多重比較分析

3 討論

本研究對(duì)不同產(chǎn)區(qū)、不同產(chǎn)地五味子藥材進(jìn)行了外觀性狀和內(nèi)在品質(zhì)較為全面的分析，結(jié)果顯示，五味子的外觀性狀與內(nèi)在質(zhì)量有顯著性相關(guān)。不同產(chǎn)區(qū)及主流市場(chǎng)多重比較顯示道地產(chǎn)區(qū)五味子浸出物、五味子醇甲含量高于顯著其他產(chǎn)區(qū)。此外，不同規(guī)格等級(jí)內(nèi)在指標(biāo)有差異，但均未達(dá)顯著差異，分析原因可能有兩點(diǎn)：本研究所收集的樣品均來(lái)自不同產(chǎn)地，且同一產(chǎn)地基本有不同等級(jí)；二是同一產(chǎn)地不同個(gè)體間質(zhì)量差異較大，從而導(dǎo)致多重比較結(jié)果組內(nèi)差異大而組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

五味子作為市場(chǎng)上常用的大宗中藥材之一，對(duì)其商品規(guī)格等級(jí)的劃分研究尚且缺乏現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵的闡釋?zhuān)袌?chǎng)上商家定價(jià)隨意，采購(gòu)者的感官評(píng)價(jià)模糊，主觀性強(qiáng)，難以體現(xiàn)藥材的綜合品質(zhì)。本研究通過(guò)傳統(tǒng)外觀鑒別五味子方法結(jié)合有效成分為綜合指標(biāo)，對(duì)各級(jí)各類(lèi)指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化和量化后，綜合分類(lèi)分析44批五味子藥材，確定了傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別五味子性狀特征重要性和五味子藥材等級(jí)劃分與藥材內(nèi)在品質(zhì)的相關(guān)性，在傳統(tǒng)“辨狀論質(zhì)”的基礎(chǔ)上提高了五味子藥材等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)體系，結(jié)果更為明確、具體、可靠，為五味子的優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)提供了有力參考依據(jù)。

本研究將五味子劃分為兩個(gè)規(guī)格等級(jí)，不僅能順應(yīng)2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》項(xiàng)下對(duì)五味子的描述及歷代本草中的記載，也能在市場(chǎng)交易中得到較好的辨別；在等級(jí)劃分方面，主要以藥材的大小和質(zhì)量進(jìn)行區(qū)分，量化了性狀指標(biāo)并規(guī)定了劃分范圍，滿足歷代本草對(duì)五味子質(zhì)量的判斷標(biāo)準(zhǔn)，即“色澤鮮艷、粒大果肉豐滿為佳”，同時(shí)，在市場(chǎng)流通過(guò)程中能實(shí)現(xiàn)高效、準(zhǔn)確、可操作強(qiáng)等劃分特點(diǎn)。