和絡(luò)舒肝片提取工藝方法的研究

歷 娜，李桂榮，王 纓，尚金燕

（山東藥品食品職業(yè)學(xué)院·山東威?！?64200）

和絡(luò)舒肝片是一種傳統(tǒng)的中藥制劑，本品具有疏肝理氣，清化濕熱，活血化瘀，滋養(yǎng)肝腎的功能，適用于慢性遷延性肝炎，慢性活動性肝炎及早期肝硬化。

1 儀器、藥品與試劑

1.1 儀器

1100型高效液相色譜儀；Mettler AE240型電子分析天平；SD-1500型噴霧干燥機(jī)。

1.2 藥品

大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：120902-201609）；大黃、白芍、白術(shù)、三棱等二十味中藥材（河北安國藥材站提供）；所用藥品經(jīng)檢驗(yàn)，均符合中國藥典現(xiàn)行版一部中的有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定。

1.3 試劑

甲醇(色譜純，進(jìn)口)；純化水（經(jīng)0.45m濾膜過濾）；乙醇。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取考察

和絡(luò)舒肝膠囊原生產(chǎn)工藝規(guī)定的提取方法為傳統(tǒng)的水煎煮法，該法具有用水量大，煎煮時間長，能耗大，浸膏粘度大，不易粉碎且易吸潮，穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，故以浸膏得率及浸膏中大黃素的含量為測定指標(biāo)，考察加熱回流提取技術(shù)對大黃等二十味藥材進(jìn)行提取的效果[1]。

2.1.1 提取方法對提取率的影響

取處方量半枝蓮、海澡等二十味藥材用水沖冼干凈，分別采用水煎煮法（煎煮二次，每次1.5小時）和加熱回流法（3小時）進(jìn)行提取，并加入10量的水，過300目濾布后，將提出液濃縮至密度為1.22g/ml，微波干燥后得干浸膏，稱出重量，計算出膏率，并取少量干膏按2.2大黃素含量測定方法項(xiàng)下測定大黃素的含量，結(jié)果見表2-1。

結(jié)果表明，和絡(luò)舒肝片中藥材采用加熱回流法進(jìn)行提取，得到的出膏率及大黃素的含量遠(yuǎn)高于原生產(chǎn)工藝中水煎法的提取量。

2.1.2 加水量對提取率的影響

取和絡(luò)舒肝片處方量的中藥材三份，采用加熱回流法對其進(jìn)行提取，考察加水量對提取率的影響，分別加入藥材量的6、8、10倍量的水，加熱回流提取3小時，過300目濾布后，采用三效減壓濃縮法對提取液進(jìn)行濃縮至密度為1.25g/ml，微波干燥后得干浸膏，稱出重量，計算出膏率，并取少量干膏按2.2大黃素含量測定方法測定大黃素的量，提取結(jié)果見表2-2。

表2 -2加水量對提取效果的影響

結(jié)果表明，采用8倍加水量和10倍加水量提取時，出膏率和大黃素的含量變化不大，所以從節(jié)約生產(chǎn)成本的角度考慮采用8倍加水量更適合工業(yè)化生產(chǎn)。

2.1.3 提取時間對提取率的影響

取和絡(luò)舒肝片處方量的中藥材三份，分別加入8倍量的水，第一份提取2小時、第二份提取3小時、第三份提取4小時，過300目濾布后，采用三效減壓濃縮法對提取液進(jìn)行濃縮至密度為1.25g/ml，微波干燥后得干浸膏，稱出重量，計算出膏率，并取少量干膏按2.2大黃素含量測定方法測定大黃素的量，提取結(jié)果見表2-3。

表2 -3提取時間對提取率的影響

結(jié)果表明，提取時間為4小時，出膏率、大黃素的含量與3小時較為接近，從生產(chǎn)成本、縮短生產(chǎn)周期的角度來考慮，采用提取時間為3小時適合工業(yè)大生產(chǎn)，雖然隨著時間的增長，出膏率及大黃素的含量會有所提高，但會大大提高生產(chǎn)成本，延長生產(chǎn)時間。

2.2 大黃素含量測定方法

2.2.1 色譜條件[2-3]

以C18為填充劑；甲醇-0.1%磷酸溶液（80∶20）為流動相；檢測波長為254nm，流速：1.0mL/min，進(jìn)樣量10μl，按大黃素峰計算，理論板數(shù)不低于1500。

2.2.2 對照溶液的制備

取大黃素對照品適量，精密稱定，加醋酸乙酯-無水乙醇（1∶2）混合溶液適量使溶解，再加入醋酸乙酯-無水乙醇（1∶2）混合稀釋至刻度，制成每1ml中含10g的大黃素對照品溶液。

2.2.3 供試溶液的制備

取干燥后的干浸膏6.0g，置圓底燒瓶中，精密稱定重量，向圓底燒瓶精密加甲醇100ml，再精密稱定重量后置水浴鍋上，開始加熱回流2小時，取出、冷卻，再精密稱定重量，減失的重量用甲醇補(bǔ)足，混合搖勻，過濾后精密量取50ml續(xù)濾液置表面皿中，在水浴上蒸干，向殘?jiān)屑尤?5ml鹽酸溶液（1→10），用超聲波清洗器處理5分鐘，使殘?jiān)芙夂蠹勇确?5ml，再放置水浴鍋上加熱回流30分鐘后立即冷卻，將冷卻液轉(zhuǎn)移到時分液漏斗中進(jìn)行分離，取氯仿層，酸水層用氯仿提取2次，每次用量為25ml，最后將氯仿液合并蒸干，再向殘?jiān)尤氪姿嵋阴?無水乙醇（1∶2）混合液，使其溶解后轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用醋酸乙酯-無水乙醇（1∶2）混合液稀釋至刻度，混合搖勻，即得。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證

取處方量半枝蓮、海澡等二十味藥材3份，用純化水沖冼干凈，分別加入8倍量的水，采用加熱回流法提取，提取時間為3小時，過300目濾布后，采用三效減壓濃縮法濃縮至密度為1.25g/ml，微波干燥后得干浸膏，稱出重量，計算出膏率，并取少量干膏按2.2大黃素含量測定方法測定大黃素的量，驗(yàn)證結(jié)果見表2-4。

表2 -4驗(yàn)證結(jié)果

結(jié)果表明，采用加熱回流法對藥材進(jìn)行提取時，出膏率與大黃素的含量比較穩(wěn)定，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

2.4 浸膏除雜方法考察

按上述提取工藝制備和絡(luò)舒肝片的浸膏，浸膏由于是水提法所制得的，所以方中藥材除了有效成分被提取之外，還有一些蛋白質(zhì)、淀粉、粘液質(zhì)等無效成分[4]。故將提取后的浸膏采用醇沉的方法除去無效雜質(zhì)成分，同時可以降低自然沉降法浸膏中雜質(zhì)的含有量，從而降低了片重，提高了有效成分的含量，增強(qiáng)了藥效，減少了患者的服用量。研究過程中主要以出膏率、大黃率的含量為考察指標(biāo)，來考察自然沉降法和用不同濃度的乙醇做沉淀劑的優(yōu)劣。

精密稱取和絡(luò)舒肝片提取液5份，每份為1000g，將前4份提取液分別濃縮至密度為0.4g/ml時，依次向前4份稠膏中加入濃度分別為65%、75%、85%、95%的乙醇溶液，剩余一份采用自然沉降法，分別靜止12小時，過濾，將濾液進(jìn)行減壓濃縮，直至前四份的醇味全部消失，并回收乙醇。將減壓濃縮后的和絡(luò)舒肝片浸膏置烘箱中，進(jìn)行減壓干燥直至恒重，取出放冷，稱定其重量，得到和絡(luò)舒肝片的干膏。計算出膏率，并取少量干膏按上述2.2大黃素的含量測定方法測定大黃素的含量。5份的出膏率與大黃素的含量見表2-5。

表2 -5浸膏除雜方法考察結(jié)果

結(jié)果表明，采用醇沉法比自然沉降法的出膏率均低，而采用75%的醇進(jìn)行醇沉?xí)r，出膏率最低，但大黃素的含量最高，所以本工藝擬定采用75%的乙醇為除雜沉定劑。

2.5 濃縮試驗(yàn)

精密量取和絡(luò)舒肝片經(jīng)75%乙醇除雜后的提取液二份，各20L，分別采用三效減壓濃縮和單效常壓濃縮進(jìn)行濃縮，當(dāng)密度達(dá)到1.25±0.05g/ml時，所需要時間分別為：結(jié)果見表2-6。

表2 -6濃縮結(jié)果

結(jié)果表明，三效減壓濃縮能大大縮短濃縮時間，可以達(dá)到節(jié)能、省時的目的。采用單效常壓濃縮不但費(fèi)時，而且濃縮溫度較高，可以達(dá)到120℃，藥液長時間處高溫條件下可以使有效成分受到破壞，故采用三效減壓濃縮設(shè)備進(jìn)行濃縮。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

3.1 提取工藝的確定

和絡(luò)舒肝片原生產(chǎn)工藝的提取方法為傳統(tǒng)的水煎煮法，該法具有提取時間長，有效成分提取不完全等缺點(diǎn)，故本課題的研究采用了加熱回流提取技術(shù)對大黃，三棱、昆布、半邊蓮、五靈脂、黑豆等二十味中藥材進(jìn)行提取。以浸膏的出膏率、大黃中主要功能成分大黃素的含量為考察指標(biāo)，對加熱回流的提取條件進(jìn)行優(yōu)化，最終確定最佳的提取工藝。

3.2 提取液除雜方法的確定

和絡(luò)舒肝片的提取液由于是水提法所制得的，所以方中藥材除了有效成分被提取之外，還有一些蛋白質(zhì)、淀粉、粘液質(zhì)等無效成分。原工藝中采用的是自然沉降法，就會不可避免的將一些雜質(zhì)帶入藥物中。故本課題的研究將提取后的浸膏采用醇沉的方法除去無效雜質(zhì)成分，降低浸膏中雜質(zhì)的收率，從而降低了片重、提高了有效成分的含量，增強(qiáng)了藥效、減少了患者的服用量。研究過程中主要以出膏率、大黃率的含量為考察指標(biāo)，來考察自然沉降法和用不同濃度乙醇進(jìn)行醇沉?xí)r的優(yōu)劣。結(jié)果表明，采用醇沉法比自然沉降法的出膏率均低，證明采用醇沉法會除去一些雜質(zhì)。而采用75%的醇進(jìn)行醇沉?xí)r，出膏率最低，但大黃素的含量最高，所以本工藝擬采用75%的乙醇為除雜沉定劑。