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    云南省漢族人群TNF-α基因多態(tài)性與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性

    2021-08-23 13:30:54劉舒媛王瑩瑩李盈甫馬千里王永蓉李傳印
    中國(guó)癌癥雜志 2021年7期
    關(guān)鍵詞:肺癌差異

    楊 佳,劉舒媛,王瑩瑩,李盈甫,馬千里,李 玙,王永蓉,李傳印,譚 芳

    1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所,云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南 昆明 650118;

    2.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院干部醫(yī)療科,云南 昆明 650032;

    3.昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院胸外科,云南 昆明 650118

    肺癌是全球發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤。國(guó)家癌癥中心發(fā)布的中國(guó)最新癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告數(shù)據(jù)顯示,2015年中國(guó)男性肺癌發(fā)病率為20.30%,是男性發(fā)病率第1位的惡性腫瘤;女性肺癌發(fā)病率為15.02%,是女性發(fā)病率第2位的惡性腫瘤[1]。2015年中國(guó)因肺癌死亡約63.1萬(wàn)例,占全國(guó)惡性腫瘤死亡人數(shù)的26.99%,死亡率在男性和女性惡性腫瘤患者中均排在第1位[1]。肺癌的病因多樣,至今尚不完全明確。持續(xù)的慢性炎癥在多種腫瘤(肺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、膀胱癌等)的發(fā)生、發(fā)展以及癌癥患者的生存中具有重要作用[2]。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是一種重要的多功能炎癥因子,最早因其能夠使多種腫瘤發(fā)生出血性壞死而被發(fā)現(xiàn)并命名[3],TNF-α在腫瘤微環(huán)境中的促腫瘤作用已被廣泛研究,TNF-α是炎癥與惡性腫瘤相互作用的關(guān)鍵介質(zhì)之一[4]。在體內(nèi),TNF-α主要由活化的單核-巨噬細(xì)胞分泌,其通過與腫瘤壞死因子受體(tumor necrosis factor receptor,TNFR)結(jié)合而進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)并發(fā)揮效應(yīng)。研究[3]發(fā)現(xiàn),TNF-α不僅可以誘導(dǎo)一些炎癥因子和蛋白酶對(duì)腫瘤產(chǎn)生直接的殺傷作用,還可以由腫瘤自身產(chǎn)生,作為一種內(nèi)源性生長(zhǎng)因子促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。因此,TNF-α可能作用于腫瘤發(fā)生、發(fā)展的各個(gè)階段,與多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展均具有相關(guān)性[3,5]。在健康人血清中一般檢測(cè)不到TNF-α,然而在多種癌癥如乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、鱗狀細(xì)胞癌、胰腺癌、卵巢癌、宮頸癌等患者血清中卻??蓹z測(cè)到很高的TNF-α水平[6]。腫瘤患者特別是預(yù)后較差的進(jìn)展性腫瘤患者血清中TNF-α水平明顯升高。Karayiannakis等[7]的研究發(fā)現(xiàn),胰腺癌患者中有明顯轉(zhuǎn)移的患者血清中TNF-α水平顯著高于無(wú)轉(zhuǎn)移的患者。Yoshida等[8]的研究發(fā)現(xiàn),腎癌患者血清中TNF-α水平與腎癌的轉(zhuǎn)移也具有相關(guān)性,有明顯轉(zhuǎn)移的腎癌患者血清中TNF-α水平顯著高于無(wú)轉(zhuǎn)移的患者及健康對(duì)照者?;颊哐逯蠺NF-α水平與腫瘤大小也具有相關(guān)性。另外,TNF-α對(duì)非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的發(fā)生、發(fā)展及耐藥也起著十分重要的作用。Shang等[9]研究發(fā)現(xiàn),血清高TNF-α水平與NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。另有研究[10]發(fā)現(xiàn),TNF-α可增強(qiáng)肺癌細(xì)胞對(duì)離子輻射的敏感性,抑制細(xì)胞遷移,肺癌患者中高TNF-α水平與肺癌進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)。TNF-α基因位于人類6號(hào)染色體主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex,MHC)基因的第三類基因區(qū)域,TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)域存在大量的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)位點(diǎn),例如-308G>A、-238G>A等,這些SNP位點(diǎn)可能會(huì)因堿基序列的改變影響轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合從而導(dǎo)致TNF-α基因表達(dá)量的變化,最終可能會(huì)影響腫瘤的易感性和嚴(yán)重程度。Xie等[11]的一項(xiàng)meta分析發(fā)現(xiàn),TNF-α基因-308G>A與亞洲人群的肺癌患病風(fēng)險(xiǎn)的增加相關(guān),F(xiàn)lego等[12]研究發(fā)現(xiàn),TNF-α-238G>A的GG基因型可顯著促進(jìn)NSCLC的進(jìn)程。本研究通過比較TNF-α基因中啟動(dòng)子區(qū)域rs1799964(-1031T>C)、rs1800630(-863C>A)、rs1799724(-857C>T)、rs1800629(-308G>A)和rs361525(-238G>A)5個(gè)SNP位點(diǎn)在云南省漢族肺癌患者和健康對(duì)照者中的頻率差異,探討云南省漢族人群TNF-α基因SNP與肺癌的相關(guān)性。

    1 材料和方法

    1.1 研究對(duì)象

    選取2011—2019年在昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院確診為NSCLC的云南戶籍患者425例作為病例組,根據(jù)世界衛(wèi)生組織肺癌組織類型劃分標(biāo)準(zhǔn),病例組按病理學(xué)類型分為鱗癌、腺癌、腺鱗癌及其他類型肺癌;另外,采用國(guó)際肺癌臨床分期系統(tǒng)進(jìn)行臨床分期,病例組臨床分期分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ期。病例組的納入標(biāo)準(zhǔn)為:戶籍地為云南省的新確診肺癌病例,未接受過放化療等抗腫瘤治療,未患有其他惡性腫瘤,無(wú)其他系統(tǒng)性疾病。選取同期在昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院進(jìn)行體檢的438名健康體檢者作為對(duì)照組。對(duì)照組的納入標(biāo)準(zhǔn)為:戶籍地為云南省的個(gè)體,影像學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)肺部占位性病變,無(wú)刺激性干咳、血痰、胸痛等癥狀,未患其他惡性腫瘤,無(wú)其他系統(tǒng)性疾病。所有研究對(duì)象均為彼此無(wú)血緣關(guān)系的漢族個(gè)體,年齡15~88歲。本研究的研究方案和實(shí)驗(yàn)方法已獲昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)和昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn),所有參與本研究的個(gè)體均已知曉并簽署知情同意書。

    1.2 研究方法

    1.2.1 樣本采集及基因組DNA提取

    采集空腹靜脈血5 mL,用乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)或肝素抗凝,使用全血基因組DNA提取試劑盒(QIAamp DNA Blood Mini Kit,德國(guó)QIAGEN公司)提取DNA。用超微量紫外可見分光光度計(jì)(NanoDrop 2000,美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)檢測(cè)DNA的濃度和純度。

    1.2.2 基因分型

    本研究采用TaqMan探針分型法對(duì)TNF-α基因的5個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。TaqMan探針(TaqMan SNP Genotyping Assays)和基于實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQPCR)的SNP分型試劑(TaqPath? ProAmp?Master Mix)購(gòu)自美國(guó)Applied Biosystems公司,其中SNP位點(diǎn)rs1799964(分析序列號(hào):C_7514871_10)、rs1799724(分析序列號(hào):C_11918223_10)、rs1800629(分析序列號(hào):C_7514879_10)、rs361525(分析序列號(hào):C_2215707_10)為美國(guó)Applied Biosystems公司預(yù)設(shè)探針。SNP位點(diǎn)rs1800630為美國(guó)Applied Biosystems公司訂制探針,正向引物序列為5’-GGGCTATGGAAGTCGAGTATGG-3’,反向引物序列為5’-CCCTCTACATGGCCCTGTCT-3’。ⅤIC探針序列為ACCCCCACTTAACG,F(xiàn)AM探針序列為ACCCCCCCTTAACG(序列中字體帶下劃線標(biāo)記的堿基為rs1800630位點(diǎn)等位基因?qū)?yīng)的堿基)。使用美國(guó)Applied Biosystems公司QuantStudio 6 Flex RTFQ-PCR儀進(jìn)行SNP分型檢測(cè)。反應(yīng)體系為5.00 μL,包含SNP分型試劑2.50 μL、TaqMan探針0.25 μL、樣品DNA 1.00 μL、水1.25 μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?0 ℃ 30 s預(yù)讀板,95 ℃ 10 min預(yù)變性,95 ℃ 15 s變性,60 ℃ 1 min退火延伸,共40個(gè)循環(huán)。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)置陰性對(duì)照(以水代替DNA模板樣本)。使用基因分型軟件TaqMan Genotyper Software進(jìn)行結(jié)果分析。同時(shí),每個(gè)位點(diǎn)隨機(jī)挑取10個(gè)樣本進(jìn)行擴(kuò)增并測(cè)序,通過分型結(jié)果和測(cè)序結(jié)果的對(duì)比來(lái)判斷分型結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用t檢驗(yàn)分析病例組和對(duì)照組的年齡差異,用χ2檢驗(yàn)分析病例組和對(duì)照組的性別差異。使用Plink軟件(v1.07)[13]計(jì)算病例組和對(duì)照組中每個(gè)位點(diǎn)的基因型、等位基因頻率及哈迪-溫伯格平衡,并用χ2檢驗(yàn)比較病例組和對(duì)照組間等位基因和基因型頻率的差異。使用在線軟件SNPStats[14]對(duì)5個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行5種遺傳模式的分析:共顯性模式、顯性模式、隱性模式、超顯性模式和邏輯加性模式,根據(jù)赤池信息量準(zhǔn)則(Akaike Information Criterion,AIC)和貝葉斯信息準(zhǔn)則(Bayesian Information Criterion,BIC)的數(shù)值來(lái)確定每個(gè)位點(diǎn)的最優(yōu)遺傳模式,即AIC和BIC數(shù)值最小的遺傳模式為最優(yōu)的遺傳模式。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用在線軟件SHEsis[15]計(jì)算各SNP位點(diǎn)間的連鎖不平衡情況,用D’表示,D’=0時(shí),表示SNP位點(diǎn)連鎖完全平衡,D’=1時(shí),表示SNP位點(diǎn)連鎖完全不平衡,通常認(rèn)為D’>0.8時(shí),SNP位點(diǎn)間存在強(qiáng)連鎖。構(gòu)建D’>0.8的SNP位點(diǎn)的單倍型,并用χ2檢驗(yàn)比較病例組和對(duì)照組間單倍型頻率的差異。

    2 結(jié)果

    2.1 研究對(duì)象的基本特征

    本研究共納入NSCLC患者425例,平均年齡(55.81±10.69)歲,男性293例,女性132例。病例組按病理學(xué)類型分為鱗癌患者153例,腺癌患者249例,腺鱗癌及其他類型肺癌患者23例;按臨床分期分為Ⅰ+Ⅱ期患者134例,Ⅲ+Ⅳ期患者291例。對(duì)照組438例,平均年齡(55.52±19.26)歲,男性312例,女性126例。病例組和對(duì)照組間的年齡和性別分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    2.2 TNF-α基因5個(gè)SNP位點(diǎn)的等位基因及基因型頻率分析

    本研究除rs1800630位點(diǎn)外,其余SNP位點(diǎn)的基因型在總病例組和對(duì)照組中的分布均符合哈迪-溫伯格平衡定律(P>0.05),說(shuō)明本研究的樣本是具有群體代表性的隨機(jī)樣本。

    TNF-α基因啟動(dòng)子5個(gè)SNP位點(diǎn)的等位基因和基因型頻率在NSCLC病例組和對(duì)照組間的比較見表1。結(jié)果顯示,TNF-α基因啟動(dòng)子5個(gè)SNP位點(diǎn)的等位基因和基因型頻率在NSCLC病例組和對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。將病例組進(jìn)一步按病理學(xué)類型分為鱗癌組、腺癌組、腺鱗癌及其他類型肺癌組,按臨床分期分為Ⅰ+Ⅱ期組和Ⅲ+Ⅳ期組,分別分析各病例亞組與對(duì)照組間的等位基因和基因型頻率差異,結(jié)果見表2(部分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)果未展示)。rs1799724位點(diǎn)的T等位基因在腺癌組中的頻率顯著高于對(duì)照組(P=0.010,OR=1.56,95%CI:1.11~2.19),其基因型頻率在腺癌病例組與對(duì)照組間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.026)。rs1800630(-863C>A)位點(diǎn)的A等位基因在腺鱗癌及其他類型肺癌組中的頻率顯著高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.013,OR=2.15,95%CI:1.16~3.96)。其余位點(diǎn)在病例分層分析比較中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    表1 TNF-α基因啟動(dòng)子5個(gè)SNP位點(diǎn)的等位基因和基因型頻率在NSCLC病例組和對(duì)照組間的比較Tab.1 The distribution of the 5 SNP sites in TNF-α gene promoter in NSCLC group and control group

    表2 NSCLC病例分層分析TNF-α基因啟動(dòng)子5個(gè)SNP位點(diǎn)與肺癌的相關(guān)性Tab.2 The stratified analysis of the association between the 5 SNP sites in TNF-α gene and NSCLC

    2.3 遺傳模式分析TNF-α基因SNP位點(diǎn)與NSCLC的相關(guān)性

    在NSCLC病例組和對(duì)照組的分析中發(fā)現(xiàn),rs1799964位點(diǎn)的最優(yōu)遺傳模式為隱性模式,rs1800630位點(diǎn)的最優(yōu)遺傳模式為超顯性模式,rs1799724位點(diǎn)的最優(yōu)遺傳模式為顯性模式,rs1800629位點(diǎn)的最優(yōu)遺傳模式為隱性模式,rs361525位點(diǎn)因?yàn)橹挥?個(gè)基因型所以不能進(jìn)行遺傳模式分析。在上述最優(yōu)遺傳模式中,NSCLC病例組和對(duì)照組之間的基因型頻率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,表3)。

    表3 SNP位點(diǎn)在總NSCLC病例組和對(duì)照組中的遺傳模式分析Tab.3 The inheritance analysis of the SNP sites between total NSCLC group and control group

    另外,對(duì)不同病例分層組與對(duì)照組間5個(gè)SNP的基因型頻率差異進(jìn)行遺傳模式分析,在腺癌組和對(duì)照組的比較分析中,rs1799724的最優(yōu)遺傳模式為顯性模式,在顯性模式下攜帶T等位基因的個(gè)體(TT+CT)患肺腺癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著升高(P=0.007,OR=1.66,95% CI:1.146~2.417,表4)。在其他類型肺癌組和對(duì)照組的比較分析中,rs1800630的最優(yōu)遺傳模式為邏輯加性模式。在邏輯加性模式下,其他類型肺癌組和對(duì)照組之間的基因型頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.036,OR=1.818,95% CI:1.064~3.125,表5)?;蛐?A/A-A/C可能與其他類型肺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的增加有關(guān)。

    表4 rs1799724在腺癌病例和對(duì)照組中的遺傳模式分析Tab.4 The inheritance analysis of rs1799724 between adenocarcinoma group and control group

    表5 rs1800630在其他類型肺癌癥病例和對(duì)照組中的遺傳模式分析Tab.5 The inheritance analysis of rs1800630 between other pathological types and control group

    2.4 TNF-α基因SNP位點(diǎn)連鎖不平衡分析

    通過在線軟件SHEsis分析5個(gè)SNP位點(diǎn)在對(duì)照組中的連鎖不平衡,結(jié)果顯示,rs1799964分別與rs1799724、rs1800629、rs361525位點(diǎn)間存在連鎖不平衡,連鎖不平衡D’值分別為0.997、0.991、1.000。另外rs1799724與rs1800629位點(diǎn)間也存在連鎖不平衡,D’值為0.989(圖1)。

    圖1 5個(gè)SNP位點(diǎn)在研究群體中的連鎖不平衡情況Fig.1 The linkage disequilibrium analysis of the 5 SNP sites

    分別構(gòu)建單倍型rs1799964-rs1799724、rs1799964-rs1800629、rs1799964-rs361525、rs1799724-rs1800629,分別比較各單倍型(單倍型頻率>0.03)在總NSCLC病例組和對(duì)照組間的分布差異,結(jié)果顯示,各單倍型頻率在總NSCLC病例組和對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,表6)。另外,分層分析不同病例亞組與對(duì)照組及不同病例亞組之間各單倍型的頻率差異,部分結(jié)果見表7,單倍型rs1799964Trs1800629G在Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組中的頻率顯著高于對(duì)照組(P=0.02,OR=1.46,95%CI:1.06~2.02)和Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組(P=0.038,OR=0.7,95% CI:0.50~0.98),而該單倍型頻率在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組和對(duì)照組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);單倍型rs1799964C-rs361525G在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC 病例組中的頻率顯著高于Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組(P=0.047,OR=1.45,95%CI:1.00~2.09),而單倍型rs1799964Trs361525G在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組中的頻率顯著低于Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組(P=0.047,OR=0.69,95% CI:0.48~1.00);單倍型rs1799724T-rs1800629G頻率在腺癌組和對(duì)照組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.048,OR=1.42,95% CI:1.00~2.01)。

    表6 NSCLC病例組和對(duì)照組間的單倍型分布差異Tab.6 The haplotype analysis between NSCLC group and control group

    表7 不同分期和不同類型的肺癌病例中的單倍型頻率比較(部分)Tab.7 The haplotype analysis between different clinical stages and pathological types and control groups (patial)

    續(xù)表 7

    3 討 論

    慢性炎癥與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在相互作用,持續(xù)的慢性炎癥在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[2]。在一些類型的癌癥中,炎癥狀況先于惡性腫瘤的發(fā)展,在某些情況下,癌癥的發(fā)展驅(qū)動(dòng)產(chǎn)生腫瘤促炎癥微環(huán)境[16]。腫瘤的炎癥微環(huán)境主要是由新生血管、淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞以及它們分泌產(chǎn)生的各種炎癥因子及細(xì)胞基質(zhì)等組成。腫瘤微環(huán)境中存在著大量的炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞,包括巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和肥大細(xì)胞等。這些細(xì)胞分泌的炎癥因子是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分,影響腫瘤的生物學(xué)進(jìn)程。TNF-α是腫瘤炎癥微環(huán)境中一種重要的細(xì)胞因子,也是細(xì)胞因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的重要成員。研究[3]發(fā)現(xiàn),TNF-α對(duì)腫瘤的作用有兩種截然不同的結(jié)局:不但可以殺傷腫瘤細(xì)胞,還可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn),TNF-α不僅由巨噬細(xì)胞分泌,多種腫瘤細(xì)胞也會(huì)分泌,如B細(xì)胞淋巴瘤、卵巢上皮癌等。在腫瘤細(xì)胞中,TNF-α作為一種自分泌生長(zhǎng)因子可誘導(dǎo)其他生長(zhǎng)因子促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、惡性轉(zhuǎn)化、血管生成等過程,從而在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等過程中發(fā)揮重要作用[3,17]。早期研究[18]發(fā)現(xiàn),TNF-α在體內(nèi)外均能直接殺傷腫瘤細(xì)胞或抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,TNF與其受體TNFR1結(jié)合后進(jìn)而結(jié)合TNFR相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(TNFR-associated death domain protein,TRADD)可誘導(dǎo)兩種完全不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑:①TNF與受體復(fù)合體識(shí)別并結(jié)合Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(Fas-associated death domain protein,F(xiàn)ADD),從而激活Caspase 8和Caspase 3,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡;② TNF與TNFR配體復(fù)合物可結(jié)合多種TNFR相關(guān)因子(TNFR-associated factor,TRAF),進(jìn)而激活核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、Jun氨基末端激酶(Jun amino-terminal kinase,JNK)介導(dǎo)的信號(hào)通路,從而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)并促進(jìn)細(xì)胞增殖。

    崔力方等[4]研究發(fā)現(xiàn),TNF-α在腫瘤患者特別是預(yù)后較差的患者血清中含量明顯增高,并在多種癌癥組織中呈高表達(dá)。孫云暉等[19]發(fā)現(xiàn),TNF-α在肺癌組織中的表達(dá)高于非肺癌組織,在Ⅲ~Ⅳ期中的表達(dá)高于Ⅰ~Ⅱ期,可能是因?yàn)榘┌Y患者持續(xù)的應(yīng)激反應(yīng)造成TNF-α表達(dá)量持續(xù)升高,然后又與巨噬細(xì)胞作用產(chǎn)生更多的TNF-α[20]。高表達(dá)的TNF-α又通過促進(jìn)腫瘤血管生成和基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[4,21]。

    本研究發(fā)現(xiàn),TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)域5個(gè)SNP位點(diǎn)的等位基因頻率和基因型頻率在NSCLC組與正常對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步又對(duì)NSCLC病例組進(jìn)行分層分析,結(jié)果顯示,腺癌組中rs1799724-T等位基因的頻率顯著高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.01,OR=1.56,95% CI:1.11~2.19),rs1799724的基因型頻率在腺癌組與對(duì)照組間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.026)。rs1800630-A等位基因在腺鱗癌及其他類型肺癌組中的頻率顯著高于對(duì)照組(P=0.013,OR=2.15,95% CI:1.16~3.96)。其余位點(diǎn)在病例分層分析比較中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說(shuō)明同一基因中的多態(tài)性在不同病理學(xué)類型的同種疾病中發(fā)揮的作用不同。本研究還將強(qiáng)連鎖位點(diǎn)構(gòu)建了單倍型,并分析了不同單倍型在對(duì)照組與總NSCLC病例組、各病例亞組間的頻率差異。結(jié)果顯示,rs1799724Trs1800629G單倍型在腺癌組與對(duì)照組間的分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.048,OR=1.42,95%CI:1.00~2.01),表明rs1799724-T可能是腺癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)性因素。另外,單倍型rs1799964Trs1800629G在Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組中的頻率顯著高于對(duì)照組(P=0.02,OR=1.46,95% CI:1.06~2.02)及Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組(P=0.038,OR=0.70,95% CI:0.50~0.98),而在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組和對(duì)照組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。單倍型rs1799964C-rs361525G在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組中的頻率顯著高于Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組(P=0.047,OR=1.45,95% CI:1.00~2.09),而單倍型rs1799964T-rs361525G在Ⅲ+Ⅳ期NSCLC病例組中的頻率顯著低于Ⅰ+Ⅱ期NSCLC病例組(P=0.047,OR=0.69,95% CI:0.48~1.00),推測(cè)rs1799964T與其他位點(diǎn)的聯(lián)合作用可能與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。

    Shih等[22]研究發(fā)現(xiàn),在中國(guó)臺(tái)灣省人群中,rs1800629-AA/GA基因型的攜帶者較GG基因型攜帶者的NSCLC的患病風(fēng)險(xiǎn)顯著增高(OR=3.75,95% CI:2.38~5.92,P<0.0001)而rs361525-AA/GA基因型攜帶者的NSCLC的患病風(fēng)險(xiǎn)顯著低于GG基因型攜帶者(OR=0.26,95%CI:0.13~0.50,P<0.0001)。Flego等[12]研究發(fā)現(xiàn),rs361525-G等位基因和GG基因型與NSCLC相關(guān)。Kaabachi等[23]研究發(fā)現(xiàn),在突尼斯人群中,rs1800629和rs361525可能與NSCLC的患病風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)。本研究未發(fā)現(xiàn)rs1800629及rs361525與NSCLC的關(guān)聯(lián)性,這可能是不同人群間遺傳背景的差異造成的。

    有研究[24-25]顯示,TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)域的一些SNP位點(diǎn)變異與TNF-α基因的轉(zhuǎn)錄起始相關(guān),這些SNP位點(diǎn)的堿基差異可影響T N F-α 的表達(dá)水平改變。此外,有研究[26-27]顯示,rs1800629(-308G>A)和rs361525(-238G>A)堿基的改變與轉(zhuǎn)錄活性降低顯著相關(guān)。rs17999724(-857C>T)位點(diǎn)的C堿基變異為T堿基后,TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)域可結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子OCT1從而導(dǎo)致TNF-α表達(dá)量的增加[28]。攜帶rs 17999724-T、rs1800630-A和rs1799964-C變異的TNF-α基因啟動(dòng)子活性均高于原本的啟動(dòng)子(rs1799724-C、rs1800630-C和rs1799964-T)活性[29]。另外,有研究[3,17]發(fā)現(xiàn),這5個(gè)SNP位點(diǎn)與多種癌癥的發(fā)生有關(guān)聯(lián),如乳腺癌、宮頸癌、口腔癌、肺癌及頭頸腫瘤等。還有研究[30]發(fā)現(xiàn),rs1799724-T等位基因是宮頸癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素,rs1799724-TT基因型與胃癌的發(fā)生相關(guān)[31];而Landi等[32]研究發(fā)現(xiàn),rs1799724位點(diǎn)的多態(tài)性與結(jié)腸癌無(wú)關(guān);Danforth等[33]研究發(fā)現(xiàn),rs1799724位點(diǎn)的多態(tài)性與前列腺癌無(wú)關(guān)。Xu等[34]研究發(fā)現(xiàn),rs1800629位點(diǎn)與中國(guó)人群胃癌相關(guān);Dantas研究[35]發(fā)現(xiàn),rs1800629與巴西人群胃癌相關(guān),表明TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)域的多態(tài)性位點(diǎn)與癌癥的關(guān)聯(lián)性在不同群體中具有很強(qiáng)的異質(zhì)性。

    還有研究[36]發(fā)現(xiàn),TNF-α基因rs1799724位點(diǎn)的T等位基因和MPO基因rs2333227位點(diǎn)的G等位基因單獨(dú)作用于人體時(shí),可能與肺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的增加有關(guān),但它們相互作用時(shí),這對(duì)“風(fēng)險(xiǎn)”組合與肺癌沒有產(chǎn)生關(guān)聯(lián),可能是因?yàn)閿y帶rs1799724位點(diǎn)T等位基因能表達(dá)較高的TNF-α,而攜帶rs2333227位點(diǎn)G等位基因會(huì)降低MPO基因的表達(dá),因此,高產(chǎn)量的TNF-α可以抵消MPO高產(chǎn)的不利影響。另外,TNF-α基因1799724位點(diǎn)CT和TT基因型在吸煙人群中相比不吸煙人群有更高的肺癌患病風(fēng)險(xiǎn)[36],證明肺癌的發(fā)生、發(fā)展是多種因素共同作用的結(jié)果,既與吸煙、環(huán)境等因素有關(guān),也與自身遺傳因素有關(guān)。然而自身遺傳因素復(fù)雜多樣,并且在不同種族、不同人群中也不一樣。本研究選取的5個(gè)SNP位點(diǎn)位于TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)域,啟動(dòng)子區(qū)域的SNP位點(diǎn)可能會(huì)通過影響TNF-α基因轉(zhuǎn)錄中和轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控起到影響基因表達(dá)的作用,進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。但本研究未能對(duì)研究對(duì)象的血清TNF-α水平進(jìn)行檢測(cè),從而分析TNF-α基因啟動(dòng)子區(qū)域基因多態(tài)性與基因表達(dá)水平的關(guān)聯(lián)性,這是本研究的缺陷。今后要充分闡明TNF-α基因多態(tài)性位點(diǎn)與肺癌的相關(guān)性以及在肺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用,還需要對(duì)基因多態(tài)性位點(diǎn)的功能進(jìn)行驗(yàn)證,并綜合不同人群樣本的研究結(jié)果及綜合多種影響因素進(jìn)行系統(tǒng)性分析。

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