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    超高效液相色譜法測(cè)定牛奶中的紐甜含量

    2021-08-23 07:40:32李肖斐李鵬勇艷華劉怡君胡俠
    魅力中國 2021年24期
    關(guān)鍵詞:萃取柱液相色譜儀醋酸

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    (大連產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)研究院有限公司,遼寧 大連 116630)

    紐甜是一種新型、高效、非營養(yǎng)型甜味劑,其甜度為砂糖8000 倍左右,可供糖尿病人食用;由于其甜度大,穩(wěn)定性高,安全,被廣泛應(yīng)用于食品中,國內(nèi)產(chǎn)品中的乳飲料中有標(biāo)簽標(biāo)識(shí)添加紐甜,《中華人民共和國食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2014》中對(duì)調(diào)制乳和風(fēng)味發(fā)酵乳中的紐甜限量要求分別為0.02g/kg 和0.1g/kg。對(duì)國內(nèi)外文獻(xiàn)檢索,紐甜的測(cè)定方法較少,且復(fù)雜基質(zhì)的凈化較復(fù)雜或者不做凈化,效率低且不易定性,本方法建立了用新型固相萃取凈化雜質(zhì)的檢驗(yàn)方法,步驟簡(jiǎn)單,回收率高,檢出限低,非常適合大批量的樣品處理。

    一、實(shí)驗(yàn)部分

    (一)儀器與試劑與材料

    Agilent 1260 高效液相色譜儀(配有二極管陣列檢測(cè)器);高速冷凍離心機(jī);渦旋振蕩器;氮吹濃縮儀;分析天平;乙腈、甲醇、醋酸銨(色譜純);試驗(yàn)用水為超純水;Waters oasis PRIMe HLB 固相萃取柱:6mL、200mg;紐甜標(biāo)準(zhǔn)品:純度≥99%;0.22μm 尼龍膜。

    (二)標(biāo)準(zhǔn)品配制:

    紐甜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱取一定量的紐甜標(biāo)準(zhǔn)品,加水定容至100mL,使溶液紐甜含量為1.00mg/mL。

    (三)樣品前處理

    準(zhǔn)確稱取液體奶1g 于10mL 具塞塑料離心管中,加入4mL 的乙腈,旋渦震蕩3min,超聲10min 后,以10000r/min 離心3min,上清液倒入固相萃取柱中(固相萃取柱不需要活化),收集流出液,待樣品全部流出后,將收集液氮?dú)獯蹈桑?mL 流動(dòng)相定容,渦旋,0.45μm 濾膜過濾后,供液相色譜儀分析。

    (四)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

    準(zhǔn)確吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,加入空白樣品中,按照1.3 的前處理步驟進(jìn)行前處理,所得的上機(jī)溶液作為標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

    (五)儀器條件

    色譜柱:poroshell 120 EC-C18 3.0×50mm 2.7μm

    流動(dòng)相:25%乙腈(0.01mol/L醋酸銨溶液)0.01mol/L醋酸銨溶液的配制:稱取2.64g 醋酸銨,用超純水定容至1L。

    流速:1.0mL/min

    波長:218nm

    進(jìn)樣量:20μL

    (六)試樣溶液的測(cè)定

    將試樣溶液注入液相色譜儀中,以保留時(shí)間定性,同時(shí)記錄峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中紐甜的濃度,試樣溶液中紐甜含量的響應(yīng)值應(yīng)在儀器的檢測(cè)線性范圍內(nèi)。

    二、結(jié)果與分析

    (一)標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

    以標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,相關(guān)性系數(shù)R2=0.99949,紐甜在此0~50μg/mL 線性范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。

    (二)回收率與精密度

    在空白樣品基質(zhì)中添加2、5、10、20mg/kg 水平的紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液,按本實(shí)驗(yàn)的前處理方法,平行測(cè)定4 次,進(jìn)行分析,測(cè)得數(shù)據(jù)與RSD 如下表:

    表1.

    (三)流動(dòng)相的選擇

    通過比對(duì)不同有機(jī)相的比例,25%乙腈(10mmol/L 醋酸銨)目標(biāo)物保留時(shí)間合適,與樣品中的雜質(zhì)的分離度也很好。

    (四)色譜柱的選擇

    選擇小粒徑的色譜柱,實(shí)現(xiàn)UPLC,具有高的分離度、靈敏度,實(shí)現(xiàn)高效率。

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