miR-22-3p調(diào)控TCTN1基因?qū)ζつw鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和凋亡的機(jī)制研究

柴華 李上云 宋丹陽 陳晴燕（沈陽市第七人民醫(yī)院皮膚科，沈陽110003）

皮膚鱗狀細(xì)胞癌是常見的皮膚惡性腫瘤，其發(fā)病率呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，危害人類生命健康［1］。由于皮膚鱗狀細(xì)胞癌在臨床和組織病理學(xué)上的多樣性，通常容易被誤診。皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段、多基因參與的過程，因此，尋找在該疾病發(fā)病過程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用的分子對(duì)鱗癌的診斷和治療具有重要意義［2］。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類小分子非編碼RNA，通過與靶基因mRNA的3′非編碼區(qū)（3′UTR）結(jié)合，抑制靶mRNA翻譯或降解靶mRNA，從而在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因表達(dá)，參與心血管、腫瘤等多種疾病的發(fā)生發(fā)展［3-4］。研究顯示，miR-22-3p在結(jié)直腸癌、肝細(xì)胞癌、腎細(xì)胞癌等腫瘤中表達(dá)異常表達(dá)，參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等生物學(xué)行為，是腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)［5-7］。目前，miR-22-3p在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的作用還未知。Targetscan生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示，結(jié)構(gòu)蛋白家族1（fectonic family member，TCTN1）的3′UTR與miR-22-3p的核苷酸序列存在連續(xù)的結(jié)合位點(diǎn)，提示miR-22-3p可能調(diào)控TCTN1表達(dá)。TCTN1屬于結(jié)構(gòu)蛋白家族成員，也參與結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤、食管鱗狀細(xì)胞癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展［8-10］。但TCTN1對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌的影響尚不明確。本研究主要探討了miR-22-3p對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其可否通過調(diào)控TCTN1表達(dá)發(fā)揮作用，以期為皮膚鱗狀細(xì)胞癌的靶向治療提供新靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 組織樣本選取2014年4月至2018年9月整形外科手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)確診的35例皮膚鱗狀細(xì)胞癌為研究對(duì)象，其中男性21例，女性14例，年齡37～75歲，平均年齡（56.39±4.81）歲。高分化15例，中分化11例，低分化9例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例，未發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移21例。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放化療等治療。同時(shí)以35例正常皮膚組織為對(duì)照，男性19例，女 性16例，年 齡35～71歲，平 均 年 齡（54.59±5.21）歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意，患者或家屬自愿簽署知情同意書。

1.1.2 細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)試劑皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞，中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫；胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）和RPMI1640培養(yǎng)基，美國Gibco公司；四甲基噻唑藍(lán)（methylthiazoletrazolium，MTT）和胰蛋白酶，美國Sigma公司；Trizol試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和PCR試劑盒，深圳晶美生物工程有限公司；膜聯(lián)蛋白V（Annexin V）-異硫氰酸熒光素（FITC）/碘化丙啶（propidium iodide，PI）凋亡試劑盒和二喹啉甲酸（bicinchoninicacid，BCA）蛋白檢測(cè)試劑盒，上海碧云天生物技術(shù)有限公司；兔抗人細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）、細(xì)胞增殖因子-67（Ki-67）多克隆抗體，美國Santa Cruz公司；兔抗人活化的caspase-3（Cleaved caspase-3）多克隆抗體，武漢博士德生物工程有限公司；LipofectamineTM2000試劑盒，美國Invitrogen公司；PCR引物，上海生工生物工程有限公司；雙熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒，美國Promega公司；miR-22-3p模擬物mimics（5′-CUGAACGUCGTAGUUCGTUCUAU-3′）及模擬陰性序列（5′-CCCGUGCUGAUAGAUCGUAAACGUC-3′）、miR-22-3p抑制劑（5′-GCUCGCGUUAGAAUAGUAAGCUGUCC-3′）及陰性序列（5′-CUUGGCCGCUGCUAGACGUAGCUCC-3′）、TCTN1的小干擾RNA（5′-GCUCAGAUGCAUCAGUUCCUUCUCGUGAUAUC-3′）及亂序無意義陰性序列（5′-UUCUCCGAACGTGUCGCUGGACGU-3′）、TCTN1過表達(dá)載體（5′-TGGCCGATGCTAGCTGCCGGGTCCA-3′）和空載體（5′-TGGCGAATGGCGTGGCACGTGGGG-3′），廣州市銳博生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)A431細(xì)胞復(fù)蘇后，加入含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基于37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)5%、濕度97%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，每2～3 d更換1次新鮮的培養(yǎng)基。待細(xì)胞匯合至80%～90%時(shí)，吸棄培養(yǎng)基，加入適量預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗細(xì)胞。吸棄PBS，加入0.25%胰蛋白酶溶液消化細(xì)胞，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.2.2 細(xì)胞分組和轉(zhuǎn)染對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A431細(xì)胞以1×105個(gè)/孔接種于6孔板，待細(xì)胞匯合至60%時(shí)，更換無FBS的培養(yǎng)基。分別將miR-22-3p mimics（miR-22-3p組）及陰性對(duì)照（miR-NC組）、miR-22-3p抑制劑（anti-miR-22-3p組）及陰性對(duì)照（anti-miR-NC組）、TCTN1的小干擾RNA（si-TCTN1組）及陰性對(duì)照（si-NC組）以及miR-22-3p mimics與TCTN1過表達(dá)載體（miR-22-3p+pcDNA-TCTN1組）、miR-22-3p mimics與空載體（miR-22-3p+pcDNA組）轉(zhuǎn)染至A431細(xì)胞。具體操作過程參照LipofectamineTM2000試劑盒說明書。轉(zhuǎn)染48 h后，qRT-PCR和Western blot分別檢測(cè)miR-22-3p和TCTN1蛋白評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效果，并收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 qRT-PCR檢 測(cè)miR-22-3p和TCTN1 mRNA表達(dá)水平Trizol試劑提取組織或細(xì)胞中總RNA，經(jīng)微量核酸儀檢測(cè)純度和濃度后，參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明，將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。然后以cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。miR-22-3p上游5′-AAGCTGCCAGTTGAAGAACTGTA-3′，下游5′-TTGGCGAATGCCAATGGCCGGCCA-3′；U6上 游5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，下游5′-GGCTTCCCGAATGCAAGC-3′；TCTN1上游5′-CCTTTGCGTGAATGTTGTTC-3′，下游5′-AGAGGGACTGGCTGGGTATT-3′；β-actin上游5′-GTGGACATCCGCAAAGAC-3′，下游5′-AAAGGGTGTAACGCAACTA-3′。PCR擴(kuò)增條件：95℃5 min，95℃10 s，60℃30 s，72℃30 s，共35個(gè)循環(huán)。miR-22-3p以U6為內(nèi)參，TCTN1以β-actin為內(nèi)參，采用2－ΔΔCt法計(jì)算miR-22-3p和TCTN1 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.4 Western blot法檢測(cè)蛋白表達(dá)RIPA蛋白裂解液裂解細(xì)胞，12 000 r/min離心10 min，上清液即為總蛋白。采用BCA法測(cè)定蛋白濃度。取適量蛋白，加入上樣緩沖液，100℃煮沸5 min。蛋白變性后，以每泳道30μg蛋白行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳。電泳結(jié)束后，轉(zhuǎn)至聚偏乙烯二氟膜。轉(zhuǎn)膜后，將膜置于5%脫脂牛奶中進(jìn)行封閉1 h。分別加入CyclinD1（1：600）、Ki-67（1：800）、Cleaved caspase-3（1：400）一抗，4℃孵育過夜。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗IgG（1：400），37℃孵育1 h。加入ECL顯影液，避光顯影，凝膠成像系統(tǒng)曝光拍照，Image J軟件分析蛋白條帶灰度值。

1.2.5 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖各組轉(zhuǎn)染后的A431細(xì)胞以1×103個(gè)/孔接種于96孔板，于培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24 h、48 h、72 h后，每孔加入20 μl濃度為5 g/L的MTT溶液。培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育4 h后，吸棄培養(yǎng)基，加入150μl二甲基亞砜，振蕩混合均勻，于酶標(biāo)儀490 nm處測(cè)定光密度（optical density，OD）值。

1.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡各組轉(zhuǎn)染后的A431細(xì)胞以1×104個(gè)/孔接種于24孔板。培養(yǎng)48 h后，胰酶消化，收集細(xì)胞。取1×106個(gè)細(xì)胞，PBS清洗后，加入400μl結(jié)合緩沖液。輕輕吹打混懸細(xì)胞后，加入10μl Annexin V-FITC，室溫避光孵育10 min。再加入5μl PI，室溫避光孵育5 min。最后加入100μl結(jié)合緩沖液，混合均勻后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。

1.2.7 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-22-3p與TCTN1靶向關(guān)系Targetscan生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示，TCTN1的3′UTR存在與miR-22-3p結(jié)合的核苷酸序列。PCR擴(kuò)增含miR-22-3p結(jié)合位點(diǎn)的TCTN1的3′UTR序列，構(gòu)建TCTN1野生型質(zhì)粒（WTTCTN1，5′-GGGUGGGAGUGGAUGGGCAGCUC-3′）和突變型質(zhì)粒（MUT-TCTN1，5′-GGGUGGGAGUGGAUGCCGUCGAC-3′）。分別將WT-TCTN1、MUTTCTN1與miR-22-3p mimic及陰性對(duì)照共轉(zhuǎn)染至A431細(xì)胞。轉(zhuǎn)染48 h后，收集細(xì)胞。參照雙熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒說明書，檢測(cè)熒光素酶活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析利用SPSS22.0軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以xˉ±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織和正常皮膚組織中miR-22-3p及TCTN1表達(dá)與正常皮膚組織相比，皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中miR-22-3p水平明顯降低（P＜0.05），TCTN1 mRNA和蛋白水平明顯升高（P＜0.05）。結(jié)果如圖1、表1所示。

表1 皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織和正常皮膚組織中miR-22-3p和TCTN1表達(dá)（xˉ±s，n=35）Tab.1 Expression of miR-22-3p and TCTN1 in cutaneous squamous cell carcinoma tissues and normal skin tissues（xˉ±s，n=35）

圖1 Western blot檢測(cè)皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織和正常皮膚組織中TCTN1蛋白表達(dá)Fig.1 Western blot detected expression of TCTN1 protein in cutaneous squamous cell carcinoma tissues and normal skin tissues

2.2 過表達(dá)miR-22-3p對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞增殖的影響與miR-con組相比，miR-22-3p組miR-22-3p水平明顯升高（P＜0.05），說明miR-22-3p mimics轉(zhuǎn)染成功，A431細(xì)胞中miR-22-3p過表達(dá)。與miRcon組相比，miR-22-3p組細(xì)胞活性、Ki-67和CyclinD1蛋白水平明顯降低（P＜0.05）。結(jié)果如圖2、表2。

表2 過表達(dá)miR-22-3p對(duì)A431細(xì)胞增殖及Ki-67和CyclinD1蛋白表達(dá)的影響（xˉ±s，n=9）Tab.2 Effect of overexpressing miR-22-3p on A431 cell proliferation and expression of Ki-67 and CyclinD1 protein（xˉ±s，n=9）

圖2 Western blot檢 測(cè)A431細(xì) 胞Ki-67和CyclinD1蛋 白表達(dá)Fig.2 Western blot detected expression of Ki-67 and CyclinD1 protein in A431 cells

2.3 過表達(dá)miR-22-3p對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞凋亡的影響與miR-con組相比，miR-22-3p組細(xì)胞凋亡率、Cleaved caspase-3蛋白水平明顯升高（P＜0.05）。結(jié)果如圖3、表3。

表3 過表達(dá)miR-22-3p對(duì)A431細(xì)胞凋亡及Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)的影響（xˉ±s，n=9）Tab.3 Effect of overexpressing miR-22-3p on A431 cell apoptosis and and the expression of Cleaved caspase-3 protein（xˉ±s，n=9）

2.4 miR-22-3p靶向TCTN1調(diào)控其表達(dá)Targetscan生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示，TCTN1的3′UTR與miR-22-3p核苷酸序列存在連續(xù)的結(jié)合位點(diǎn)。熒光素酶活性檢測(cè)結(jié)果顯示，與miR-con組相比，miR-22-3p組共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-TCTN1的A431細(xì)胞熒光素酶活性明顯降低（P＜0.05），而共轉(zhuǎn)染MUT-TCTN1的A431細(xì)胞熒光素酶活性物無明顯變化（P＞0.05），說明miR-22-3p可與TCTN1的3′UTR靶向結(jié)合。與miR-con組相比，miR-22-3p組TCTN1蛋白水平明顯降低（P＜0.05）；與anti-miR-con組相比，anti-miR-22-3p組TCTN1蛋白水平明顯升高（P＜0.05），進(jìn)一步說明miR-22-3p在A431細(xì)胞中靶向負(fù)調(diào)控TCTN1表達(dá)。結(jié)果如圖4、表4、5。

表4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果（xˉ±s，n=9）Tab.4 Dual luciferase reported experimental results（xˉ±s，n=9）

圖4 miR-22-3p與TCTN1互補(bǔ)的核苷酸序列以及miR-22-3p調(diào)控TCTN1表達(dá)Fig.4 Complementary nucleotide sequence of miR-22-3p and TCTN1 and miR-22-3p regulate TCTN1 expression

2.5 沉默TCTN1對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞增殖和凋亡的影響與si-con組相比，si-TCTN1組TCTN1蛋白水平明顯降低（P＜0.05），說明si-TCTN1轉(zhuǎn)染成功，A431細(xì)胞中TCTN1表達(dá)沉默。與si-con組相比，si-TCTN1組細(xì)胞活性、Ki-67和CyclinD1蛋白水平明顯降低（P＜0.05），凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白水平明顯升高（P＜0.05）。結(jié)果如圖5、表6。

表6 沉默TCTN1對(duì)A431細(xì)胞增殖和凋亡的影響（xˉ±s，n=9）Tab.6 Effect of silencing TCTN1 on proliferation and apoptosis of A431 cells（xˉ±s，n=9）

圖5 Western blot檢測(cè)A431細(xì)胞TCTN1、Ki-67、CyclinD1和Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)Fig.5 Western blot detected expressions of TCTN1，Ki-67，CyclinD1 and Cleaved caspase-3 protein in A431 cells

2.6 過表達(dá)TCTN1部分逆轉(zhuǎn)miR-22-3p對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞增殖和凋亡的影響與miR-22-3p+pcDNA組相比，miR-22-3p+pcDNA-TCTN1組細(xì)胞活性、Ki-67和CyclinD1蛋白水平明顯升高（P＜0.05），凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白水平明顯降低（P＜0.05）。結(jié)果如表7、圖6。

圖6 Western blot檢測(cè)A431細(xì)胞中TCTN1、Ki-67、CyclinD1和Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)Fig.6 Western blot detected expressions of TCTN1，Ki-67，CyclinD1 and Cleaved caspase-3 protein in A431 cells

表7 過表達(dá)TCTN1逆轉(zhuǎn)miR-22-3p對(duì)A431細(xì)胞增殖和凋亡的影響（xˉ±s，n=9）Tab.7 Overexpressing TCTN1 reversed the effect of miR-22-3p on proliferation and apoptosis of A431 cells（xˉ±s，n=9）

表5 miR-22-3p調(diào)控A431細(xì)胞中TCTN1蛋白的表達(dá)（xˉ±s）Tab.5 miR-22-3p regulated the expression of TCTN1 protein in A431 cells（xˉ±s）

3 討論

皮膚鱗狀細(xì)胞癌簡(jiǎn)稱皮膚鱗癌，具有較高的侵襲性，易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。遺傳因素、外部環(huán)境、細(xì)胞異常增殖等多種因素均可引起皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生。誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是腫瘤治療的途徑［11］。近年研究顯示，miRNA參與皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展［12］，探討皮膚鱗狀細(xì)胞癌中異常表達(dá)的miRNA及其對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和凋亡影響的分子機(jī)制，可為該疾病的診斷和治療提供新思路。

miR-22-3p是近年新發(fā)現(xiàn)的一種miRNA，參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。常永梅等［13］研究顯示，miR-22-3p在非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）組織中表達(dá)降低，過表達(dá)miR-22-3p通過靶向負(fù)調(diào)控AEG-1表達(dá)抑制NSCLC細(xì)胞增殖。LV等［14］研究顯示，miR-22-3p在宮頸癌組織中表達(dá)升高，抑制miR-22-3p表達(dá)可通過靶向上調(diào)eIF4EBP3表達(dá)誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡。這說明miR-22-3p在不同腫瘤中發(fā)揮的作用不同，既可作為抑癌基因抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展，也可作為促癌基因促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。目前，miR-22-3p對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響還未知。本研究結(jié)果顯示，皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中miR-22-3p表達(dá)降低，過表達(dá)miR-22-3p可抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。CyclinD1在細(xì)胞周期G1至S期發(fā)揮調(diào)控作用，促進(jìn)細(xì)胞增殖［15］。Ki-67是細(xì)胞增殖狀態(tài)的標(biāo)記抗原，表達(dá)增加說明細(xì)胞增殖活躍［16］。Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)在細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮重要作用，caspase-3是細(xì)胞凋亡的“執(zhí)行者”，活化的caspase-3（Cleaved caspase-3）促進(jìn)細(xì)胞凋亡［17］。本研究顯示，過表達(dá)miR-22-3p可抑制A431細(xì)胞中CyclinD1和Ki-67蛋白表達(dá)，促進(jìn)Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)，提示miR-22-3p通過影響與增殖、凋亡相關(guān)的蛋白表達(dá)抑制A431細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

為了進(jìn)一步探討miR-22-3p影響皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和凋亡的作用機(jī)制，本研究通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示，TCTN1的3′UTR與miR-22-3p的核苷酸序列存在結(jié)合位點(diǎn)，雙熒光素酶活性檢測(cè)證實(shí)miR-22-3p可與TCTN1的3′UTR靶向結(jié)合。同時(shí)，上調(diào)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞中miR-22-3p表達(dá)后，TCTN1蛋白表達(dá)降低，而下調(diào)miR-22-3p表達(dá)后TCTN1蛋白表達(dá)升高，說明miR-22-3p在A431細(xì)胞中靶向負(fù)調(diào)控TCTN1表達(dá)。本研究還顯示，過表達(dá)TCTN1逆轉(zhuǎn)了miR-22-3p對(duì)A431細(xì)胞增殖、凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，提示過表達(dá)miR-22-3p可能通過靶向下調(diào)TCTN1表達(dá)抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡。

TCTN1是結(jié)構(gòu)蛋白家族成員之一，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究顯示，NSCLC組織中miR-1256表達(dá)下調(diào)，TCTN1表達(dá)上調(diào)，過表達(dá)miR-1256通過靶向下調(diào)TCTN1表達(dá)抑制NSCLC細(xì)胞增殖和遷移，miR-1256/TCTN1軸可作為NSCLC的治療靶點(diǎn)［18］。TCTN1在甲狀腺癌細(xì)胞中表達(dá)升高，沉默TCTN1表達(dá)可抑制甲狀腺癌細(xì)胞活力、集落形成、細(xì)胞周期進(jìn)展，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，為甲狀腺癌的治療提供了潛在新途徑［19］。目前，還未見TCTN1影響皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生物學(xué)行為的相關(guān)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中TCTN1 mRNA和蛋白表達(dá)升高，沉默TCTN1表達(dá)可抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并抑制細(xì)胞中Ki-67和CyclinD1蛋白表達(dá)，促進(jìn)Cleaved caspase-3蛋白表達(dá)，提示TCTN1參與皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中miR-22-3p表達(dá)降低，TCTN1表達(dá)升高；過表達(dá)miR-22-3p可能通過靶向抑制抑制TCTN1表達(dá)降低皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖能力，并誘導(dǎo)其凋亡，miR-22-3p/TCTN1可能是皮膚鱗狀細(xì)胞癌靶向治療的新靶點(diǎn)。但本研究存在不足之處，僅在體外細(xì)胞層面研究了miR-22-3p/TCTN1軸對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌的影響，接下來將通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在體內(nèi)探討miR-22-3p/TCTN1對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌腫瘤生長(zhǎng)的影響，以期為皮膚鱗狀細(xì)胞癌的靶向治療提供新途徑。