IL-6/STAT3信號(hào)通路與肝癌研究進(jìn)展①

柳輝 郭樂(lè) 丁淑琴 李元 姜中佳（寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，銀川750004）

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是肝臟常見(jiàn)腫瘤，惡性程度較高，臨床治療難度大，且預(yù)后極差。全球每年約有80萬(wàn)人罹患肝癌。我國(guó)每年新發(fā)肝癌病例約為35～40萬(wàn)例，HCC死亡總?cè)藬?shù)占全球死亡病例50%以上［1］。肝癌發(fā)生發(fā)展是多基因調(diào)控及多因素相互作用的復(fù)雜過(guò)程。研究認(rèn)為，“非可控性炎癥”是HCC的重要特征，持續(xù)或低強(qiáng)度的炎癥刺激可導(dǎo)致過(guò)量炎癥因子表達(dá)，引發(fā)原癌基因活化和抑癌基因失活，促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。因此，深入研究炎癥因子在HCC發(fā)生發(fā)展中的功能及分子機(jī)制，同時(shí)抑制其在HCC中的過(guò)度表達(dá)，是基礎(chǔ)科研及臨床治療的重要目標(biāo)。

1 肝癌組織中IL-6表達(dá)

IL-6可由單核細(xì)胞、T細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞合成和分泌，是一種多效性細(xì)胞因子，在腫瘤微環(huán)境中含量豐富，對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展具有潛在作用［2］。研究認(rèn)為，IL-6高表達(dá)及異常信號(hào)通路與HCC患者免疫缺陷及預(yù)后密切相關(guān)。田愛(ài)平［3］發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)性肝癌組織中IL-6表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)IL-6，腫瘤重量及體積明顯高于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒載體的陰性對(duì)照組，同時(shí)細(xì)胞活力、增殖能力顯著增強(qiáng)。LIU等［4］研究發(fā)現(xiàn)，IL-6高表達(dá)可通過(guò)募集免疫抑制細(xì)胞，如髓系來(lái)源抑制細(xì)胞，在HCC微環(huán)境中誘導(dǎo)強(qiáng)免疫抑制。研究顯示，阻斷IL-6可顯著增強(qiáng)HCC抗腫瘤免疫作用。此外，徐倩［5］通過(guò)制備新型單克隆抗體HC6R1證實(shí)，阻斷IL-6可顯著抑制HCC細(xì)胞HepG2和Huh7增殖、遷移、黏附和侵襲。

2 IL-6/STAT3信號(hào)通路

IL-6受體系統(tǒng)由2種跨膜蛋白組成：一是負(fù)責(zé)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，相對(duì)分子質(zhì)量為13 0000的非配基結(jié)合鏈糖蛋白130（gpl30，也稱(chēng)CD130或IL-6R0）；另一部分是可與IL-6直接結(jié)合，相對(duì)分子質(zhì)量為80 000的配基結(jié)合鏈IL-6Rα（又稱(chēng)CD126或gp80）。其中IL-6Rα可分為膜結(jié)合型（membrane-bound IL-6R，mIL-6R）和可溶型（soluble IL-6R，sIL-6R）2種，研究認(rèn)為mIL-6R是觸發(fā)IL-6信號(hào)傳導(dǎo)的最主要途徑。相應(yīng)靶細(xì)胞表面，IL-6與mIL-6R首先結(jié)合，并誘導(dǎo)mIL-6R自身構(gòu)型變化，繼而與gp130胞外端緊密結(jié)合，誘導(dǎo)mIL-6R/gp130蛋白復(fù)合物形成，促使gp130迅速發(fā)生同二聚化作用，激活信號(hào)，這種信號(hào)激活途徑即為經(jīng)典信號(hào)傳導(dǎo)途徑（圖1A）［6］。mIL-6R僅表達(dá)于肝細(xì)胞和部分白細(xì)胞亞型，不表達(dá)mIL6-R的 細(xì) 胞 中，IL-6還 可 與sIL-6R結(jié) 合 激 活gp130，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，這種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方式稱(chēng)為反式信號(hào)途徑（圖1B）。近年研究發(fā)現(xiàn)，sIL6-R主要由mIL6-R胞外部分裂解產(chǎn)生，依賴(lài)于解聚素和金屬蛋白酶（a disintegrin and metalloproteinase，ADAM）基因家族成員的限制性蛋白水解作用及mRNA的選擇性剪接作用［7］。信號(hào)被激活后，二聚化gp130通過(guò)Janus激酶（Janus kinase，JAK）磷酸化進(jìn)一步級(jí)聯(lián)誘導(dǎo)STAT3磷酸化，磷酸化的STAT3形成二聚體，轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核，激活調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄活性，通過(guò)級(jí)聯(lián)信號(hào)傳遞發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。

圖1 IL-6參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制Fig.1 Mechanism of IL-6 involved in tumorigenesis and development

大多數(shù)HCC患者體內(nèi)IL-6/STAT3信號(hào)均異常激活，研究表明，幾乎所有IL-6家族的細(xì)胞因子均能激活STAT3蛋白，同時(shí)，STAT3也被認(rèn)為是介導(dǎo)IL-6功能的最主要轉(zhuǎn)錄因子［8］。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducer and activator of transcription proteins，STATs）在細(xì)胞信號(hào)傳遞方面具有重要作用，其家族成員分別為STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5A、STAT5B和STAT6，其中STAT3在炎癥和腫瘤形成中具有重要作用。STAT3在肝癌細(xì)胞中異常激活，除影響腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化、侵襲、血管生成和凋亡等過(guò)程，還可通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境促進(jìn)腫瘤細(xì)胞糖酵解，同時(shí)降低其線(xiàn)粒體活性［9］。最近研究發(fā)現(xiàn)，IL-6/STAT3信號(hào)不僅對(duì)原發(fā)性肝癌有影響，其與繼發(fā)性肝癌形成也有密切聯(lián)系。其他部位腫瘤發(fā)生時(shí)，非惡性細(xì)胞釋放IL-6，激活肝細(xì)胞中STAT3信號(hào)，促進(jìn)血清淀粉樣蛋白A1和A2（serum amyloid A，SAA）產(chǎn)生，通過(guò)形成促轉(zhuǎn)移生態(tài)位導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移至肝臟，導(dǎo)致繼發(fā)性肝癌［10］。

3 IL-6/STAT3信號(hào)通路在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制

3.1 對(duì)肝癌細(xì)胞增殖能力的影響STAT3可能是抑制肝癌細(xì)胞過(guò)度增殖的重要靶點(diǎn)，活化的IL-6/STAT3信號(hào)可通過(guò)激活增殖相關(guān)因子轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，肝癌組織中STAT3和p-STAT3蛋白表達(dá)明顯高于癌旁組織，同時(shí)其下游增殖相關(guān)因子cyclin D1和P21表達(dá)也顯著提高［11］。采用STAT3-siRNA體外轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株HepG2后發(fā)現(xiàn)其下游分子cyclin D1表達(dá)在不同時(shí)間點(diǎn)均顯著下調(diào)，同時(shí)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，沉默STAT3表達(dá)，各檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞增殖率均明顯下調(diào)［11］。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19（fibroblast growth factor 19，F(xiàn)GF19）是成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族成員，通過(guò)與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（FGFR4）結(jié)合，參與HCC發(fā)生發(fā)展，在細(xì)胞增殖和分化中起重要作用。ZHOU等［12］在對(duì)小鼠HCC的研究中發(fā)現(xiàn)，IL-6/STAT3信號(hào)通路在促進(jìn)FGF19驅(qū)動(dòng)HCC發(fā)展中發(fā)揮鍵作用，阻斷IL-6/STAT3通路可抑制FGF19誘導(dǎo)的肝癌進(jìn)展。組蛋白去乙酰化酶3（histone deacetylase 3，HDAC3）在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期中起重要作用，高表達(dá)HDAC3可通過(guò)STAT3途徑促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖，沉默HDAC3可導(dǎo)致STAT3信號(hào)中斷，顯著抑制肝癌細(xì)胞增殖［13］。甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）主要由胚胎期肝細(xì)胞分泌，成年后正常人體內(nèi)幾乎檢測(cè)不到其表達(dá)，但約70%肝癌患者體內(nèi)AFP含量顯著升高，因此AFP目前作為特異性肝癌標(biāo)志物廣泛應(yīng)用。AFP的生物學(xué)功能發(fā)揮可能部分通過(guò)持續(xù)激活STAT3完成。張澤亮等［14］研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)AFP，STAT3蛋白磷酸化水平顯著上調(diào)，HepG2細(xì)胞增殖能力明顯提高，在細(xì)胞生長(zhǎng)48 h后分析細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組S期細(xì)胞明顯增多，提示AFP可能通過(guò)STAT3磷酸化信號(hào)促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖。

3.2 對(duì)肝癌細(xì)胞遷移、侵襲的影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial to mesenchymal transition，EMT）是細(xì)胞通過(guò)失去極性，去分化為間充質(zhì)表型，導(dǎo)致上皮細(xì)胞可塑性改變的生物學(xué)過(guò)程。目前普遍認(rèn)為EMT廣泛參與肝纖維化和肝癌進(jìn)程，與肝癌早期轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EMT發(fā)生時(shí)，分子水平表現(xiàn)為上皮細(xì)胞分子標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)降低，間質(zhì)細(xì)胞分子標(biāo)志物Vimentin表達(dá)增加。劉婷等［15］在HepG2和HCCLM3細(xì)胞研究中發(fā)現(xiàn)，體外單純添加IL-6可顯著提高p-STAT3水平，但無(wú)法直接誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞EMT。IL-6和TGF-β共同刺激時(shí)，p-STAT3、p-Smad3、Snail、Vimentin表達(dá)水平比單獨(dú)刺激組顯著上調(diào)，相反E-cadherin表達(dá)明顯下調(diào)。提示IL-6/STAT3信號(hào)有望作為正向調(diào)節(jié)因子增強(qiáng)TGF-β1誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞EMT。

Twist是HCC進(jìn)展中重要的EMT誘導(dǎo)劑，上調(diào)其表達(dá)可顯著抑制E-cadherin表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)移以提高腫瘤細(xì)胞惡性程度。ZHANG等［16］在人肝癌細(xì)胞株SMMC7721和MHCC97H研究中發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)STAT3可顯著下調(diào)E-cadherin和β-cadherin表達(dá)，同時(shí)上調(diào)Vimentin表達(dá)，而敲除實(shí)驗(yàn)則結(jié)果相反。進(jìn)一步機(jī)制研究中，雙熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)結(jié)果顯示，STAT3可能通過(guò)結(jié)合Twist的啟動(dòng)子增強(qiáng)Twist轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)肝癌細(xì)胞EMT。腫瘤組織中，異常的基質(zhì)降解可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無(wú)序生長(zhǎng)，促發(fā)炎癥反應(yīng)，并伴隨浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metallo proteinases，MMPs）除可降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜外，還可促進(jìn)腫瘤組織血管生成，與腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。祝普利等［17］研究人肝癌細(xì)胞株HepG2、HuH7、SMMC7721和MHCC97H時(shí)發(fā)現(xiàn)，STAT3特異性抑制劑JSI-124可顯著抑制肝癌細(xì)胞p-STAT3表達(dá)，同時(shí)降低肝癌細(xì)胞侵襲能力，且呈濃度依賴(lài)性，同時(shí)發(fā)現(xiàn)抑制STAT3表達(dá)可降低MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)及活性，且呈濃度依賴(lài)性。表明STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝癌侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用，其作用機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)控下游MMPs表達(dá)參與肝癌發(fā)生發(fā)展。黃芩甙是從植物黃芩中提取、分離的黃酮類(lèi)化合物，近年發(fā)現(xiàn)其具有顯著抗腫瘤作用。多項(xiàng)研究表明，其可明顯抑制肝 癌 細(xì) 胞 增 殖 和 轉(zhuǎn) 移［18］。LIU等［19］在HepG2和MHCC97H細(xì)胞系研究中發(fā)現(xiàn)，黃芩甙可通過(guò)重塑細(xì)胞骨架顯著降低肝癌細(xì)胞侵襲能力，這一過(guò)程可能通過(guò)下調(diào)STAT3信號(hào)實(shí)現(xiàn)。

3.3 對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡的影響多項(xiàng)研究表明，HCC發(fā)生發(fā)展不僅是細(xì)胞增殖分化失控、轉(zhuǎn)移侵襲失調(diào)的結(jié)果，細(xì)胞異常凋亡也具有重要作用。在肝癌起始、促動(dòng)、進(jìn)展等各階段均伴有細(xì)胞凋亡，但其具體作用尚未闡明。IL-6是一種重要的抗腫瘤凋亡誘導(dǎo)劑。流式雙標(biāo)記染色法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，將STAT3-siRNA轉(zhuǎn)入人正常肝細(xì)胞LO2和肝癌HepG2細(xì)胞株，24 h、48 h、72 h細(xì)胞凋亡率均顯著高于同時(shí)間點(diǎn)的空白對(duì)照組［19］。LIU等［20］研究人肝癌細(xì)胞系SNU-499發(fā)現(xiàn)，IL-6可通過(guò)活化STAT3信號(hào)提高阿霉素處理后的細(xì)胞生存率，同時(shí)降低細(xì)胞凋亡率。進(jìn)一步研究表明，采用STAT3 siRNA或其小分子抑制劑LLL12阻斷IL-6/STAT3信號(hào)后，阿霉素處理后的肝癌細(xì)胞凋亡率明顯上調(diào)，提示靶向阻斷IL-6/STAT3信號(hào)通路可能通過(guò)促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡發(fā)揮抗腫瘤作用。藏紅花是鳶尾科番紅花屬的球根類(lèi)花卉，作為藥物、香料或染料被廣泛應(yīng)用，近年發(fā)現(xiàn)藏紅花素具有良好的抗癌活性，對(duì)前列腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、肝癌等多種腫瘤有潛在治療作用。KIM等［21］在HepG2和Hep3B細(xì)胞系研究中發(fā)現(xiàn)，藏紅花素可通過(guò)抑制IL-6誘導(dǎo)的STAT3活化導(dǎo)致STAT3去磷酸化，下調(diào)下游抗凋亡基因Bcl-2和survivin表達(dá)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡，同時(shí)下調(diào)特異性細(xì)胞周期蛋白cyclin D1表達(dá)，抑制肝癌細(xì)胞增殖。雷洛昔芬（Raloxifene）是一種選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，近年發(fā)現(xiàn)其對(duì)某些受體誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有抑制作用，有望用于肝癌治療［22］。WANG等［23］體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，每日給予一定量雷洛昔芬可顯著抑制小鼠體內(nèi)HepG2腫瘤生長(zhǎng)，機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，雷洛昔芬對(duì)IL-6刺激的STAT3磷酸化具有抑制作用，通過(guò)抑制STAT3下游促凋亡因子Bcl-2、Bcl-xl及survivin表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡。此外，WEN等［24］發(fā)現(xiàn)，阿帕替尼（Apatinib）可抑制人肝癌SMCC7721細(xì)胞系VEGFR2/STAT3信號(hào)活化，顯著下調(diào)VEGFR2和STAT3磷酸化水平，其下游BAX/Bcl-2比值升高，促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡，提示IL-6/STAT3信號(hào)通路可能通過(guò)Bcl家族影響細(xì)胞凋亡。細(xì)胞自噬是機(jī)體在應(yīng)激條件下通過(guò)降解自身蛋白和衰老細(xì)胞器以適應(yīng)外界環(huán)境變化的重要生理過(guò)程。自噬與肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)。LU等［25］研究 表明，人IL-6重 組蛋白可 誘 導(dǎo)HepG2細(xì)胞自噬，而沉默或采用單克隆抗體阻斷IL-6表達(dá)或活性后，自噬水平明顯降低。IL-6可能通過(guò)誘導(dǎo)自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3B及NS5ATP9表達(dá)激活自噬過(guò)程。提示在肝癌發(fā)生發(fā)展中，自噬可能通過(guò)降解細(xì)胞衰老蛋白及細(xì)胞器為腫瘤細(xì)胞過(guò)度增殖提供物質(zhì)保障，維持腫瘤細(xì)胞線(xiàn)粒體功能及能量平衡。

3.4 對(duì)血管生成的影響血管生成在腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用，抑制這一過(guò)程可明顯阻止腫瘤發(fā)展和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。血管生成機(jī)制復(fù)雜，現(xiàn)已證實(shí)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在腫瘤血管生成和腫瘤進(jìn)展中扮演重要角色。VEGF是一種高度特異性的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，具有增加血管通透性、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)變性、血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖和血管形成等作用，可通過(guò)與其受體VEGFR1和VEGFR2結(jié)合，迅速加快新生血管生長(zhǎng)。盡管VEGF的誘導(dǎo)物種類(lèi)豐富，但其啟動(dòng)子的主要轉(zhuǎn)錄激活子僅有HIF-1（hypoxia inducible factor-1）和STAT3，提 示HIF-1和STAT3是VEGF表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)器［26-27］。WEN等［24］研究肝癌SMCC7721細(xì)胞系時(shí)發(fā)現(xiàn)，其VEGF和VEGFR2表達(dá)在mRNA水平和蛋白水平均明顯高于正常肝細(xì)胞。阿帕替尼是一種特異性VEGFR2抑制劑，可通過(guò)抑制p-STAT3和p-VEGFR2表達(dá)顯著下調(diào)肝癌細(xì)胞存活率，并上調(diào)其細(xì)胞凋亡率。特異性阻斷STAT3表達(dá)可進(jìn)一步增強(qiáng)這一效應(yīng)，提示STAT3在腫瘤細(xì)胞血管生成中具有重要作用。阿帕替尼可能通過(guò)下調(diào)p-STAT3和p-VEGFR2表達(dá)誘導(dǎo)其下游Bax/Bcl-2比值升高，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。田愛(ài)平［3］研究發(fā)現(xiàn)，小鼠慢性誘導(dǎo)性肝癌組織中IL-6、STAT3與VEGF、VEGFR2及CD31等相關(guān)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子蛋白表達(dá)明顯高于癌旁組織，且表達(dá)水平呈正相關(guān)。而采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)IL-6，血管再生相關(guān)因子分子及蛋白水平表達(dá)也顯著提升，細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)，提示IL-6在肝癌患者腫瘤血管再生中具有重要調(diào)控作用。此外，XU等［27］證實(shí)STAT3是抑制腫瘤VEGF表達(dá)和血管生成的有效靶點(diǎn)，包括IL-6R、c-Src、her2/neu等多種誘導(dǎo)子激活的VEGF表達(dá)均在靶向阻斷STAT3信號(hào)的細(xì)胞中減弱。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用小分子抑制劑靶向抑制STAT3將明顯下調(diào)HIF-1和VEGF表達(dá)，腫瘤細(xì)胞體內(nèi)血管生成能力減弱，這一過(guò)程可能通過(guò)同時(shí)影響JAK/STAT和PI3K/AKT信號(hào)通路完成。證明STAT3可能是抑制腫瘤血管再生相關(guān)因子表達(dá)、影響血管生成的有效靶點(diǎn)。

4 針對(duì)IL-6/STAT3信號(hào)的肝癌靶向治療

HCC患者5年生存率僅為10%，其中手術(shù)患者的5年生存率可達(dá)40%～80%，但多數(shù)患者就診時(shí)已屬晚期，失去了手術(shù)機(jī)會(huì)［28］。因此，提高藥物治療的有效性是延長(zhǎng)患者生存期限的關(guān)鍵。HCC發(fā)生發(fā)展因素復(fù)雜，涉及炎癥、死亡、新生血管及基因突變等多個(gè)領(lǐng)域，因此尋找潛在治療靶點(diǎn)是當(dāng)前臨床研究熱點(diǎn)。

4.1 直接靶向IL-6/STAT3信號(hào)治療肝癌的策略

近年來(lái)，HCC治療藥物發(fā)展迅速，尤其是以免疫檢查點(diǎn)抑制劑為主的分子靶向藥物被先后用于臨床，療效和安全性等較好。但最近臨床試驗(yàn)顯示，免疫檢查點(diǎn)抑制劑單藥對(duì)肝癌的治療效果有限，聯(lián)合用藥效果更佳。LIU等［4］研究IL-6在肝癌模型中的免疫調(diào)節(jié)作用，證實(shí)IL-6阻斷可增強(qiáng)HCC患者抗腫瘤免疫，與抗程序性死亡-1-配體1（PD-L1）檢查點(diǎn)抑制劑協(xié)同治療HCC可在一定程度上逆轉(zhuǎn)HCC對(duì)PD-L1抗體的耐藥性。高表達(dá)IL-6可通過(guò)上調(diào)抑制性免疫檢查點(diǎn)影響腫瘤浸潤(rùn)性T細(xì)胞功能，表明靶向抑制IL-6可提高HCC抗PD-L1療效，為HCC分子靶向治療提供策略。徐倩［5］采用新型IL-6單克隆抗體HC6R1處理肝癌細(xì)胞系HepG2和Huh7發(fā)現(xiàn)，HC6R1可顯著抑制肝癌細(xì)胞增殖、遷移、黏附和侵襲，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HC6R1可抑制小鼠腫瘤生長(zhǎng)，并延長(zhǎng)原位成瘤小鼠生存時(shí)間，其機(jī)制可能是通過(guò)抑制STAT3活化從而將細(xì)胞阻滯在G1/S期，抑制腫瘤細(xì)胞增殖的同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞凋亡。近年細(xì)胞膜受體gp130與腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移和凋亡等的關(guān)系備受關(guān)注，湯嵩［29］研究發(fā)現(xiàn)，gp130在人肝癌細(xì)胞中呈高表達(dá)，采用具有口服活性的gp130小分子抑制劑SC144處理肝癌細(xì)胞株后，可有效促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡，并具有一定抑制腫瘤增殖作用。提示gp130可能是肝癌治療的另一重要靶點(diǎn)。當(dāng)前，全細(xì)胞腫瘤疫苗已在癌癥防治中表現(xiàn)出巨大潛力，HAN等［30］研究肝癌細(xì)胞系H22和Hepa1-6時(shí)發(fā)現(xiàn)，STAT3阻斷全肝癌細(xì)胞裂解物可抑制腫瘤發(fā)生和生長(zhǎng)，延長(zhǎng)荷瘤小鼠存活時(shí)間，同時(shí)刺激免疫T細(xì)胞及NK細(xì)胞活化，增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞在腫瘤組織中的浸潤(rùn)，增強(qiáng)細(xì)胞毒性，此外，樹(shù)突狀細(xì)胞成熟度提高，促進(jìn)肝癌免疫記憶產(chǎn)生，當(dāng)免疫小鼠被HCC細(xì)胞攻擊時(shí)，隨T細(xì)胞和NK細(xì)胞激活和浸潤(rùn)，可引發(fā)繼發(fā)性免疫反應(yīng)。STAT3阻斷的全肝癌細(xì)胞裂解物可阻止HCC介導(dǎo)的T細(xì)胞和NK細(xì)胞衰竭，表明免疫小鼠T細(xì)胞和NK細(xì)胞上的PD-1和TIGIT等免疫檢查點(diǎn)分子呈低表達(dá)，表明STAT3阻斷的全細(xì)胞肝癌疫苗具有腫瘤細(xì)胞免疫的潛力。

4.2 針對(duì)miRNAs靶向IL-6/STAT3信號(hào)治療肝癌的策略miRNAs為非編碼小分子RNA，在血管生成、細(xì)胞增殖、存活和分化等多個(gè)生理過(guò)程中起重要作用［31］。研究認(rèn)為，miRNAs在人類(lèi)惡性腫瘤發(fā)展中作為腫瘤抑制因子發(fā)揮作用［32］。目前開(kāi)發(fā)的藥物多數(shù)靶向單個(gè)位點(diǎn)，而miRNAs可靶向多個(gè)位點(diǎn)，因此其在肝癌治療方面具有巨大潛力。

HCC中miR-124表達(dá)顯著下調(diào)，過(guò)表達(dá)miR-124可促進(jìn)HCC細(xì)胞凋亡并抑制其增殖。LU等［33］機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，miR-124可通過(guò)直接結(jié)合STAT3 3'UTR區(qū)抑制STAT3和p-STAT3蛋白表達(dá)，轉(zhuǎn)染miR-124的HepG2細(xì)胞中過(guò)表達(dá)STAT3可有效消除miR-124對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用。提示miR-124可通過(guò)靶向STAT3發(fā)揮腫瘤抑制作用，有望成為肝癌診斷、治療的生物標(biāo)志物。

miR-197也被認(rèn)為是潛在的癌癥診斷分子標(biāo)志物，其表達(dá)水平與HCC患者生存期呈顯著正相關(guān)。WANG等［34］采用體外合成的膽固醇修飾的miR-197類(lèi)似物治療肝癌荷瘤小鼠，發(fā)現(xiàn)其可明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)，減小腫瘤體積，表明miR-197有望用于肝癌治療。肝癌組織芯片分析發(fā)現(xiàn)，miR-197與IL-6、STAT3蛋白水平呈負(fù)相關(guān)，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)miR-197在促進(jìn)細(xì)胞凋亡的同時(shí)，可通過(guò)將細(xì)胞阻滯在G1期從而抑制其增殖，同時(shí)將miR-197及STAT3過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)入肝癌細(xì)胞將顯著逆轉(zhuǎn)這一現(xiàn)象，表明miR-197可能作為潛在的治療靶點(diǎn)干預(yù)IL-6/STAT3信號(hào)通路在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用［34］。

裸鼠肝癌模型研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)miR-345對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及肺轉(zhuǎn)移具有抑制作用，進(jìn)一步機(jī)制研究顯示，體外過(guò)表達(dá)miR-345可顯著抑制STAT3及AKT蛋白表達(dá)，同時(shí)E-cadherin蛋白表達(dá)明顯增高，Claudin-1、N-cadherin及Snail蛋白表達(dá)降低，提示EMT過(guò)程被抑制［35］。雷帕霉素作為STAT3通路阻斷劑，已被證明可有效抑制肝癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。YU等［35］研究發(fā)現(xiàn)，雷帕霉素可降低EMT發(fā)生頻率，提示STAT3/AKT信號(hào)可能作為EMT上游因子發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用。表明miR-345可顯著調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，其機(jī)制可能是通過(guò)靶向STAT3/AKT信號(hào)抑制EMT，阻止肝癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。

肝癌miRNAs表達(dá)譜中也發(fā)現(xiàn)miR-26表達(dá)下調(diào)［36］。多項(xiàng)研究表明，IL-6 3'UTR區(qū)同時(shí)具有miR-26a和miR-26b的結(jié)合位點(diǎn)［37-38］。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-26b后HepG2細(xì)胞IL-6、p-STAT3蛋白表達(dá)被顯著抑制，同時(shí)自噬相關(guān)蛋白Beclin1表達(dá)下調(diào)，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上調(diào)，提示自噬發(fā)生，沉默IL-6表達(dá)，自噬水平上調(diào)［38］。證實(shí)miR-26b通過(guò)靶向抑制IL-6/STAT3信號(hào)通路激活誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自噬，為肝癌診治提供新的靶點(diǎn)。miR-26a也被證實(shí)與HCC轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)呈負(fù)相關(guān)［36］。YANG等［36］研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)miR-26a顯著抑制IL-6表達(dá)，同時(shí)STAT3下游靶基因，包括Bcl-2、Mcl-1、cyclin D1及MMP2表達(dá)明顯下調(diào)，提示細(xì)胞凋亡過(guò)程被促進(jìn)而增殖過(guò)程被抑制，過(guò)表達(dá)IL-6可拮抗這一作用。提示IL-6是miR-26a調(diào)節(jié)HCC微環(huán)境的功能靶分子，miR-26a可通過(guò)抑制IL-6/STAT3信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)HCC的抑制作用。臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，miR-26a和IL-6聯(lián)用對(duì)HCC預(yù)后的預(yù)測(cè)效果最好，優(yōu)于miR-26a或IL-6獨(dú)立預(yù)測(cè)［36］。

此外，研究發(fā)現(xiàn)，與癌旁組織相比，miR-125b及miR-543在HCC中表達(dá)顯著降低，腫瘤組織中高表達(dá)miR-125b或miR-543的HCC患者術(shù)后生存率更高，腫瘤復(fù)發(fā)率更低［39-40］。靶向抑制miR-543表達(dá)可顯著提高肝癌細(xì)胞增殖率，同時(shí)降低其凋亡率，可能通過(guò)降低p-JAK2、p-STAT3、c-Myc和Bcl-2表達(dá)完成。IL-6R和STAT3 3'UTR區(qū)均具有miR-125b的結(jié)合位點(diǎn)［37］。JIA等［39］體外研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)miR-125b可通過(guò)直接靶向調(diào)節(jié)IL-6R和Mcl-1抑制細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期循環(huán)，提示miR-125b可能在HCC發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵抑癌基因作用，進(jìn)一步研究其功能可能為HCC治療提供新靶點(diǎn)。

5 結(jié)語(yǔ)

體內(nèi)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)是一個(gè)復(fù)雜的體系，炎癥因子異常表達(dá)在HCC發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色。IL-6、STAT3、p-STAT3異常表達(dá)可通過(guò)影響肝癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移、凋亡和血管生成等方式促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。采用IL-6單克隆抗體、gp130抑制劑、STAT3沉默及靶向miRNAs等方式阻斷該信號(hào)通路在抗肝癌治療中療效較好。未來(lái)對(duì)該方向的深入研究將有助于HCC的靶向治療研究，為新的靶向藥物研發(fā)，并通過(guò)靶向干預(yù)與其他藥物聯(lián)用改善臨床治療效果提供新的思路。