在新生兒溶血三項試驗中應(yīng)用微柱凝膠法和試管法的效果對比

林樹振

（德州市武城縣人民醫(yī)院檢驗科，山東 德州 253300）

新生兒溶血病是指由于母子血型不合，母體內(nèi)產(chǎn)生與胎兒血型抗原不合的血型抗體，這種抗體通過胎盤進入到胎兒體內(nèi)，導致胎兒發(fā)生同族免疫性溶血[1]。新生兒溶血三項試驗包括直接抗球蛋白試驗（direct antiglobulin test，DAT）、抗體放散試驗及游離抗體試驗[2]。本次研究主要是對比在新生兒溶血三項試驗中應(yīng)用微柱凝膠法和試管法的臨床效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月至8月期間在德州市武城縣人民醫(yī)院接受新生兒溶血三項試驗的79例溶血病患兒的血液標本作為研究對象?；純旱募{入標準是：1）其病情符合新生兒溶血病的診斷標準[3]。2）患兒家屬對本研究知情同意，并簽署了參與本次研究的知情同意書。3）本次研究獲得了德州市武城縣人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會的批準?；純旱呐懦龢藴适牵?）合并有心、肝、腎等器官功能障礙。2）存在藥物過敏反應(yīng)。3）存在遺傳病或精神病家族史。抽取患兒的靜脈血，將每例患兒的血液標本平均分成兩份，分別將其設(shè)為研究組（79份）和對照組（79份）。在兩組血液標本所涉及的79例患兒中，有男43例，女36例；其日齡為1～16 d，平均日齡為（8.54±2.13）d。

1.2 方法

對對照組的血液標本用試管法進行新生兒溶血三項試驗：1）進行DAT的方法是：將離心機的轉(zhuǎn)速設(shè)置為3500 r/min，對血液標本進行3 min的離心處理后獲取壓積紅細胞。用生理鹽水對受檢的紅細胞進行3次洗滌后，配制濃度為2%～5%的紅細胞懸液。將1滴紅細胞懸液加入標記好的試管內(nèi)，再向試管內(nèi)加入50 μL的抗-IgG抗球蛋白血清后混勻。將離心機的轉(zhuǎn)速設(shè)置為2000 r/min，對試管內(nèi)的試劑進行1 min的離心處理后觀察結(jié)果。2）進行抗體放散試驗的方法是：將1 mL的壓積紅細胞與少量的生理鹽水放入試管內(nèi)，將恒溫水浴箱的溫度設(shè)置為56 ℃，將試管放置于水浴箱內(nèi)7 min后取出，放置于裝有溫度為56 ℃熱水的離心套管中。離心機的轉(zhuǎn)速設(shè)置為3500 r/min，對試管內(nèi)的試劑進行5 min的離心處理，留取放散液備用。將放散液分別加入已標明A、B、O的試管內(nèi)，再分別向3支試管中加入對應(yīng)的50 μL的濃度為3%～5%的A、B、O型酶。將恒溫水浴箱的溫度設(shè)置為37 ℃，將3支試管放置于水浴箱內(nèi)1 h后取出。若試劑凝集則說明血清內(nèi)存在相應(yīng)的抗體。若試劑未發(fā)生凝集，則用生理鹽水對試劑進行3次洗滌后，在試管中加入50 μL的抗-IgG抗球蛋白血清后混勻。將離心機的轉(zhuǎn)速設(shè)置為3200 r/min，對試管內(nèi)的試劑進行15 s的離心處理后觀察結(jié)果。3）進行游離抗體試驗的方法是：將離心機的轉(zhuǎn)速設(shè)置為3000 r/min，對血液標本進行3 min的離心處理后分離出血清。取3支試管，分別在其中加入100 μL的血清，再分別向3支試管中加入對應(yīng)的50 μL的濃度為3%～5%的A、B、O型酶。將恒溫水浴箱的溫度設(shè)置為37 ℃，將3支試管放置于水浴箱內(nèi)1 h后取出。若試劑凝集則說明血清內(nèi)存在相應(yīng)的抗體。若試劑未發(fā)生凝集，則用生理鹽水對試劑進行3次洗滌后，在試管中加入50 μL的抗-IgG抗球蛋白血清后混勻。將離心機的轉(zhuǎn)速設(shè)置為3200 r/min，對試管內(nèi)的試劑進行15 s的離心處理后觀察結(jié)果。對研究組的血液標本用微柱凝膠法進行新生兒溶血三項試驗，方法是：將離心機的轉(zhuǎn)速設(shè)置為3500 r/min，對2 mL的血液標本進行3 min的離心處理后獲取1管血漿。將10 μL的壓積紅細胞加入1 mL的達亞美2號稀釋液中，制備1管濃度為1%的樣本紅細胞。用生理鹽水洗滌剩余的血液標本，并制備1管上清液。使用酸放散試劑對洗滌過的紅細胞進行處理，并制備1管酸放散液。1）在抗人球蛋白溶血檢測卡的1、2號孔中分別加入50 μL的血漿，再向其中分別加入與患兒血型一致的標準紅細胞及“O”形標準紅細胞后進行游離抗體試驗。2）在抗人球蛋白溶血檢測卡的3、4號孔中分別加入75 μL的酸放散液，再向其中分別加入與患兒血型一致的標準紅細胞及“O”形標準紅細胞后進行抗體放散試驗。3）在抗人球蛋白溶血檢測卡的5號孔中加入上清液和與患兒血型一致的標準紅細胞，將其放入溫度為37 ℃的孵育器內(nèi)進行15 min的孵育。在抗人球蛋白溶血檢測卡的6號孔中加入濃度為0.8%的樣本紅細胞后進行DAT。將抗人球蛋白溶血檢測卡放入專用離心機內(nèi)，將離心機的轉(zhuǎn)速設(shè)置為900 r/min，對其進行2 min的離心處理，然后將離心機的轉(zhuǎn)速設(shè)置為1500 r/min，對其進行5 min的離心處理后觀察結(jié)果。紅細胞發(fā)生凝集則表示結(jié)果呈陽性，紅細胞呈游離狀態(tài)則表示結(jié)果呈陰性。

1.3 觀察指標

比較兩組血液標本中血型的檢出率及DAT、抗體放散試驗、游離抗體試驗結(jié)果的陽性率。

1.4 統(tǒng)計學方法

對本次研究中的數(shù)據(jù)均采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行處理，計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血液標本中血型檢出情況的比較

研究組血液標本中血型的檢出率高于對照組血液標本中血型的檢出率，P＜0.05。詳見表1。

表1 兩組血液標本中血型檢出情況的比較

2.2 兩組血液標本中DAT、抗體放散試驗及游離抗體試驗結(jié)果陽性率的比較

研究組血液標本中DAT、抗體放散試驗及游離抗體試驗結(jié)果的陽性率均高于對照組血液標本中DAT、抗體放散試驗及游離抗體試驗結(jié)果的陽性率，P＜0.05。詳見表2。

表2 兩組血液標本中DAT、抗體放散試驗及游離抗體試驗結(jié)果陽性率的比較[%（例）]

3 討論

妊娠期間胎兒與母體血型不相合、孕婦與丈夫血型不相合是導致新生兒罹患溶血病的主要因素[4]。進行新生兒溶血三項試驗可檢測出因血型不合所致的新生兒溶血病。以往，臨床上常采用試管法進行新生兒溶血三項試驗。在采用試管法進行新生兒溶血三項試驗時，對試劑中紅細胞的濃度、紅細胞的新鮮程度、紅細胞的抗體量及親和力、血清的加入量及操作者的專業(yè)水平、判讀者讀取結(jié)果的操作手法、判讀者觀測凝集強度的標準等均有較高的要求[5]。采用試管法進行新生兒溶血三項試驗具有操作步驟繁瑣、易受外界多種因素（包括血清與紅細胞懸液的濃度、紅細胞的占比、離心處理的速度、時間等）干擾、耗時長、紅細胞需要洗滌、操作可重復性差等缺點[6]。采用微柱凝膠法進行新生兒溶血三項試驗具有操作簡便、技術(shù)易掌握，靈敏度高、結(jié)果穩(wěn)定易判斷、可重復操作等優(yōu)勢[7]。在采用微柱凝膠法進行新生兒溶血三項試驗的過程中盡可能減少人為參與，可降低檢測結(jié)果發(fā)生偏差的風險，進而可增加結(jié)果的準確性[8]。本次研究的結(jié)果顯示，研究組血液標本中血型的檢出率及DAT、抗體放散試驗、游離抗體試驗結(jié)果的陽性率均高于對照組血液標本中血型的檢出率及DAT、抗體放散試驗、游離抗體試驗結(jié)果的陽性率，P＜0.05。此研究的結(jié)果與覃日吉等[9]的研究結(jié)果相似。

綜上所述，與用試管法進行新生兒溶血三項試驗相比，用微柱凝膠法進行新生兒溶血三項試驗結(jié)果的陽性率及血型的檢出率均更高。