間質(zhì)標(biāo)志物巢蛋白在宮頸癌表達(dá)水平與預(yù)后的關(guān)系

陳熙，曹軼林，唐澄海，邱小芬，林高娟，趙慧玲，鄧戀

(廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院腫瘤二科，廣西 桂林 541002)

0 引言

宮頸癌在婦女惡性腫瘤居第二位，是嚴(yán)重威脅女性健康，呈年輕化趨勢(shì)，治療關(guān)鍵點(diǎn)是及早發(fā)現(xiàn)、及早治療且阻止其轉(zhuǎn)移。上皮一間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)在惡性腫瘤的早期侵襲和演進(jìn)過(guò)程起到重要的作用[1]，其中的間質(zhì)分子標(biāo)志物巢蛋白(N-cadherin)在多種惡性腫瘤組織中的表達(dá)異常與腫瘤的轉(zhuǎn)移及患者的不良預(yù)后密切有關(guān)[2-4]。本研究采用免疫組化方法，檢測(cè)宮頸癌中N-cadherin的表達(dá)情況，并分析其與宮頸癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本的采集

隨機(jī)選取廣西南溪山醫(yī)院2011年1月至2013年1月確診的80例初治宮頸癌患者，患者年齡25 ～68歲，中位年齡48歲。入選條件：病理學(xué)診斷為宮頸癌，從未接受過(guò)任何治療；根據(jù)2002年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期標(biāo)準(zhǔn)：FIGO分期為ⅡB期35例。ⅢA期29例，ⅢB期10例，ⅣA期5例，ⅣB期1例。其中鱗癌78例，腺癌2例。患者平均年齡44.5歲，病灶平均直徑4.2 cm。所有患者均進(jìn)行常規(guī)檢查以及必要的特殊檢查。所有患者簽署知情同意書。隨機(jī)選取30例正常宮頸組織病理標(biāo)本作為對(duì)照組。本次研究經(jīng)過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2 檢測(cè)方法

應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)間質(zhì)標(biāo)志物巢蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)，并隨機(jī)選取30例正常宮頸組織病理標(biāo)本作為對(duì)照組。用鼠抗人單克隆神經(jīng)鈣黏蛋白(N-cadherin)單克隆抗體，sp試劑盒及DAB底物顯色劑均購(gòu)自北京中杉金橋公司。采用免疫組織方法，先石蠟組織切片→脫蠟→酒精水化→抗原修復(fù)，后阻斷內(nèi)源性氧化物酶活性(用3%過(guò)氧化氫)，再予鼠抗人N-cadherin單克隆抗體滴加，4°過(guò)夜，加快速型第二抗體。DAB顯色后自來(lái)水充分沖洗→復(fù)染→脫水→樹(shù)膠封片→鏡檢。

1.3 結(jié)果判定

由病理學(xué)專家協(xié)助完成結(jié)果判定。N-cadherin陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)近細(xì)胞膜處，細(xì)胞膜呈線狀棕黃色或細(xì)胞質(zhì)有棕黃色顆粒為具體表現(xiàn)。綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞率進(jìn)行半定量處置：在(×200)的顯微鏡下，取陽(yáng)性表達(dá)率比較集中互不重疊的視野。細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)不顯示標(biāo)本患者的臨床病理資料。結(jié)果判斷：著色強(qiáng)度以多數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)的染色強(qiáng)度計(jì)分：呈淺黃色及無(wú)明顯顆粒為1分；呈黃棕色及可見(jiàn)明顯顆粒為2分；呈深棕色并可見(jiàn)明顯顆?；驖馊绢w粒為3分。計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分比，>75%為4分，51%～75%為3分，26%～50%為2分，5%～25%為1分，0%～4%為0分。兩者得分相加后計(jì)總分：4～7分為強(qiáng)陽(yáng)性(++～+++)、2～3分為陽(yáng)性(+)、0～1分為陰性(-)。

1.4 治療方法

80例患者中有60例患者接受化療和放療綜合治療模式，有20例患者由于各種原因無(wú)法化療而單用放療治療?；煼桨笧轫樸K+5-FU聯(lián)合：順鉑30 mg/m2，靜滴，1～3d；5-FU500 mg/m2，靜滴6h，1～5d，21d為一療程，完成4個(gè)療程。放療采用直線加速器，常規(guī)分割外照射+后裝腔內(nèi)照射治療，外照射5次/周，1.8～2.0Gy/次，宮頸劑量：50Gy；后裝腔內(nèi)照射每周1次，每次A點(diǎn)劑量500cGy，共4～5次。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行c2檢驗(yàn)，以P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化檢測(cè)中N-cadherin在宮頸癌組織與正常組織中的表達(dá)(表1),對(duì)照組30例正常宮頸組織的N-cadherin陽(yáng)性率26.67%，強(qiáng)陽(yáng)性率0%。宮頸癌組織中的N-cadherin陽(yáng)性率92.5%，強(qiáng)陽(yáng)性率65%，陽(yáng)性表達(dá)顯著高于正常宮頸組織的N-cadherin, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c2=49.834,P<0.001)。

表1 免疫組化檢測(cè)中 N-cadherin在宮頸癌組織與正常組織中的表達(dá)

圖1 不同病例中N-cadherin的表達(dá)(×200)

2.2 N-cadherin表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系(表2)。

表2 N-cadherin表達(dá)與80例宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系

本研究N-cadherin表達(dá)與宮頸癌病理分級(jí)、臨床分期有關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡無(wú)關(guān)。在宮頸癌不同分化程度組織中，高級(jí)別組N-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率98.08%，低級(jí)別組82.14%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；FIGO分期Ⅲ～I(xiàn)V期N-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率97.78%顯著高于Ⅱ期85.71%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組N-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率100%，淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組90.63%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；以45歲為分界點(diǎn)的年齡段表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 生存分析

以完成全程治療作為隨訪起點(diǎn)，本研究隨訪時(shí)間為6～72個(gè)月，以5年生存率作為觀察指標(biāo)，觀察宮頸癌組織中間質(zhì)標(biāo)志物巢蛋白(N-cadherin)的表達(dá)與5年生存率的關(guān)系。N-cadherin強(qiáng)陽(yáng)性52例，5年存活人數(shù)19人，5年生存率OS 36.53%，N-cadherin陽(yáng)性22例，5年存活人數(shù)17人，5年生存率OS 77.27%，N-cadherin陰性6例，5年存活人數(shù)6人，5年生存率OS 100%，Log-rank 檢驗(yàn)結(jié)果顯示，3組預(yù)后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c2=15.384P<0.01)。三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，陰性組生存曲線高于弱陽(yáng)性，弱陽(yáng)性高于強(qiáng)陽(yáng)性組，說(shuō)明宮頸癌N-cadherin表達(dá)陽(yáng)性與生存率呈負(fù)相關(guān)。

3 討論

間質(zhì)標(biāo)志物巢蛋白(N-cadherin)是神經(jīng)型鈣黏附蛋白，作為一種介導(dǎo)細(xì)胞間黏附、遷移作用的Ca2+依賴性跨膜蛋白，依賴鈣在細(xì)胞軸附中發(fā)揮作用，有親同種抗原的特性。N-cadherin與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)有主要關(guān)系，在上皮組織中的N- cadherin 異位表達(dá)能夠影響上皮細(xì)胞的形態(tài)和行為，誘導(dǎo)其向間質(zhì)轉(zhuǎn)化[5]，研究證實(shí)，N-cadherin 的異常表達(dá)將增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞侵襲遷移能力，促進(jìn)細(xì)胞間相互作用，在腫瘤的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要的作用[6]。研究顯示在多種惡性腫瘤中N-cadherin存在突變與異常表達(dá)，它與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有相關(guān)性[7-10]。

圖2 N-cadherin高表達(dá)組和低表達(dá)組之間總生存率(overall su1-vival，OS) 差異具有顯著性

本研究結(jié)果顯示，N-cadherin在宮頸癌中表達(dá)顯著增強(qiáng)甚至強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，正常宮頸組織中不表達(dá)或弱陽(yáng)性表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c2=49.834，P<0.001)。有報(bào)道在口腔鱗癌中N-cadherin高表達(dá)，且高表達(dá)與腫瘤分化程度、TNM分期密切相關(guān)[11]。在本研究中N-cadherin的表達(dá)與宮頸癌的臨床分期、組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，表明其與腫瘤失分化、浸潤(rùn)性生長(zhǎng)明顯相關(guān)。與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及年齡無(wú)關(guān)。范瓊等報(bào)道N-cadherin表達(dá)參與宮頸癌浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[12]。本研究可能是標(biāo)本數(shù)量有限或由于都是FIGO分期分組(入組患者均未做手術(shù))而非術(shù)后病理分期，有可能有些N-cadherin表達(dá)陽(yáng)性患者盆腔已有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而CT或MRI未能檢查出來(lái)，導(dǎo)致結(jié)果顯示N-cadherin表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。N-cadherin高表達(dá)與多種惡性腫瘤轉(zhuǎn)移預(yù)后相關(guān)[13-16]，kamikihara等[17]在胃癌的臨床病理研究，發(fā)現(xiàn)N-cadherin獨(dú)立于上皮鈣軸蛋白的表達(dá)，對(duì)胃癌的預(yù)后有重要的參考價(jià)值。N-cadherin在宮頸癌是否存在同樣的情況，本研究發(fā)現(xiàn)N-cadherin表達(dá)水平與總生存率存在負(fù)相關(guān)性，宮頸癌N-cadherin強(qiáng)陽(yáng)性患者5年生存率顯著低于N-cadherin陽(yáng)性及陰性患者，預(yù)后不佳。當(dāng)然臨床還需更大樣本的研究以提供更明確可靠的結(jié)論。

總而言之，N-cadherin在宮頸癌中表達(dá)增強(qiáng)甚至多數(shù)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，表明其在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)中有一定作用，對(duì)預(yù)后生存有一定影響，可為宮頸癌的診斷和醫(yī)療提供一種新的有效指標(biāo)，有望成為治療宮頸癌的潛在分子靶點(diǎn)，為宮頸癌早期診斷、治療和預(yù)后判斷提供參考依據(jù)。