美藤果葉中提取羥基酪醇方法①

肖培富

（海南啟星生物科技有限公司 海南三亞 572000）

羥基酪醇（hydroxytyrosol），化學(xué)名稱為3，4‐二羥基苯乙醇，分子式為C8H10O3，即可溶于醇、水，又能溶于脂類溶劑［1］。羥基酪醇具有抗腫瘤、抗血栓、調(diào)血脂和抗功脈硬化，抗病原微生物，防治視網(wǎng)膜黃斑變性，抑制DNA 氧化損傷，抗炎、鎮(zhèn)痛等藥效，具有保護(hù)軟骨和抗骨質(zhì)疏松作用，還能有效降低和抑制吸煙対人體的危害，快速恢復(fù)體能，増強(qiáng)抵抗力和運(yùn)動能力［2］。在食品工業(yè)中，羥基酪醇可作為天然防腐劑，防止食品的氧化變質(zhì)。在營養(yǎng)保健領(lǐng)域，羥基酪醇可作為營養(yǎng)補(bǔ)充劑、抗菌劑，添加到各種食品中。在美容方面，羥基酪醇能有效增強(qiáng)皮膚彈性和潤澤，減少紫外線對皮膚的損傷作用，延緩皮膚老化。在保健方面，可防止腦衰，延緩衰老，保持青春活力［3］。在防癌方面，可防治肺癌、乳腺癌、子宮癌、前列腺癌等，促進(jìn)癌癥后期恢復(fù)和提高化療效果。羥基酪醇也被廣泛用于農(nóng)業(yè)病蟲害防控［4］。

羥基酪醇主要分布在自然界，如橄欖枝葉中羥基酪醇含量為0.3%～0.8%［5］；美藤果葉中羥基酪醇的含量為0.7%～0.9%。目前，羥基酪醇的制備以化學(xué)合成法為主，以天然植物提取為輔。朱正紅等［6］以對羥基苯乙醇為原料制備了羥基酪醇。葉建中等［7］采用超聲波用90%的甲醇從油橄欖葉提取羥基酪醇。

美藤果（Plukenetia volubilis L.）又名印奇果、印加花生、南美油滕，原產(chǎn)于南美洲［8］。2006 年，我國云南、海南等地引種成功并推廣。通過研究浸泡時間、溫度因素、料液比等因素，探討水提美藤果葉中羥基酪醇的最佳工藝，為工業(yè)化加工美藤果葉提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

海南三亞紅花村產(chǎn)的美藤果葉。

1.2 方法

50～70 ℃，以水為溶劑，循環(huán)提取2～3 次，每次1.5～3.0 h，第一次加水量為原料8 倍，第二次加水量為原料6倍，合并提取液，離心去雜，所得清液經(jīng)等量D‐101樹脂吸附，柱層析藥液流速為2 BV/h，隨后用4 BV 水快速洗脫去雜，30%乙醇解吸附2 次，第一次乙醇用量為4 BV，流速為1 BV/h，第二次乙醇用量為1 BV，快速解吸附；最后將洗脫液合并，60 ℃下減壓蒸餾，回收乙醇并繼續(xù)蒸發(fā)濃縮至d≥1.05 g/mL，冷凍干燥［9‐10］。

1.2.1 浸泡時間

取100 g 烘干美藤果葉（羥基酪醇的含量為0.8%）5 份，各加水2 000 mL，分別浸泡0、1、2、3、4、5 h，循環(huán)提取2 h，提取液離心分離（≥2500 rpm，10 min），棄去沉淀物，所得清液在60℃下減壓濃縮至干，收集產(chǎn)品，稱量、測定。

1.2.2 溫度的影響

分別取100 g 烘干美藤果葉（羥基酪醇的含量為0.8%）5 份，各加水2 000 mL，不浸泡，提取 1 次，在30、40、50、60、70、80 ℃不同溫度下循環(huán)提取4 h。提取液經(jīng)離心分離（≥2 500 rpm，10 min），棄去沉淀物，所得清液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中在60 ℃下減壓濃縮至干，收集產(chǎn)品，稱量、測定。

1.2.3 清液的提取

分別取100 g 烘干美藤果葉（羥基酪醇的含量為0.8%）加水800 mL，不浸泡，60 ℃恒溫條件下循環(huán)提取2 次，每次2 h。提取液經(jīng)離心分離（≥2 500 rpm，10 min），棄去沉淀物，得到清液。

1.2.4 羥基酪醇的提純

大孔樹脂是中草藥提取的常用樹脂，將 D‐101 、 AB‐8、X‐5、HP‐20 樹脂各 100 g 濕法裝柱［11‐12］。各取 100 g 原料，加水 800 mL （第 2 次600 mL），升溫至60 ℃后，恒溫提取2 次，每次2 h，合并提取液，離心分離（≥2 500 rpm，10 min），棄去沉淀物，所得清液分別進(jìn)行柱層析，60 ℃下減壓濃縮至干，收集產(chǎn)品，稱量、測定。

1.2.5 料液比

在60 ℃的條件下循環(huán)提取4 h。其他條件與1.2.4 相同，考察料液比1∶4、1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14的提取效果。

1.2.6 提取時間

分別取100 g 原料，加水800 mL，在60 ℃恒溫條件下提取，考察了0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h不同提取時間因素的影響。

1.2.7 提取次數(shù)

分別取美藤果葉100 g，加水800 mL，不浸泡，60 ℃直接提取，每次提取時間為2 h，研究提取次數(shù)為1，2，3，4，5次，考察提取次數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 浸泡時間的影響

由表1可知，浸泡時間對于產(chǎn)量和提取率并無影響，基于羥基酪醇的化學(xué)性質(zhì)較為活潑，易被氧化，所以要盡可能地縮短生產(chǎn)周期。

表1 浸泡時間的影響

2.2 溫度影響

表2 可知，當(dāng)溫度為60 ℃時，產(chǎn)量9.4 g，純度是5.10%，提取率為60%，提取率最高。

表2 溫度的影響

2.3 料液比

由表3可知，當(dāng)料液比為1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14時，結(jié)果相差不大，但1∶4 的料液提取率相對要低一些。

表3 料液比的影響

2.4 提取時間因素

由表4 可知，提取時間低于2 h 時，產(chǎn)量和提取率有明顯差異，當(dāng)提取時間≥2 h 時，差異不大，這可能是由于當(dāng)提取時間過短（＜2 h），產(chǎn)量和提取率偏低，但提取時間過長，提取率增加并不明顯，反而增加生產(chǎn)成本。綜合考慮，提取時間2 h為最佳實(shí)驗(yàn)條件。

表4 提取時間的影響

2.5 提取次數(shù)

由表5 可知，最佳提取次數(shù)為2 次，產(chǎn)量為13.8 g，提取率86.8%。

表5 提取次數(shù)的影響

2.6 純化方法研究

由表6 可知，4種樹脂的純化效果無明顯差別?；贒‐101的價格、使用周期、供應(yīng)來源、再生等因素考慮，選擇D‐101樹脂作為最佳純化樹脂。

2.7 干操方法的篩選

結(jié)合輕基酪醇的化學(xué)性質(zhì)及生產(chǎn)實(shí)際，首選冷凍干燥方式。將洗脫液在60 ℃下減壓蒸餾回收乙醇，并繼續(xù)蒸發(fā)濃縮至d≥1.05 g/mL，冷凍干燥。

3 結(jié)論

水提美藤果葉提取羥基酪醇最佳條件為：取烘干美藤果葉（羥基酪醇的含量為0.8%），以水作為溶劑，提取溫度為60 ℃，提取時間為2 h，料液比為1∶8，純化用樹脂為D‐101，冷凍干燥，原料提取物產(chǎn)率為2.5%～3.1%，其中羥基酪醇的含量為25%～30%，美藤果葉中提取的羥基酪醇含量為28.44%，原料產(chǎn)物有效成分的提取率為82%～85%。采用水提美藤果葉羥基酪醇，大大降低了生產(chǎn)成本，提取工藝合理，安全，操作簡單，提取物雜質(zhì)少。