具有α, β-不飽和酮的2-吲哚酮衍生物的設計、合成及抗腫瘤活性

何茂飛, 鄧璐璐, 范艷華, 李 江, 穆淑珍,*

(1.貴州大學 藥學院，貴州 貴陽 550025； 2. 貴州醫(yī)科大學 天然產(chǎn)物化學重點實驗室 藥用植物功效與利用國家重點實驗室，貴州 貴陽 550014)

活性天然產(chǎn)物在藥物發(fā)現(xiàn)中具有非常重要的作用[1]。值得關注的是2-吲哚酮骨架是許多具有重要生物活性的天然產(chǎn)物的核心結(jié)構(gòu)[2-7]，尤其是2-吲哚酮骨架在抗腫瘤藥物設計中起到重要作用[8-13]，例如舒尼替尼(sunitinib)和司馬沙尼(semaxanib)，前者已被廣泛用于治療胃腸道間質(zhì)瘤和轉(zhuǎn)移性腎細胞癌[14-15]，后者正在進行治療結(jié)直腸癌的臨床試驗[16]。

Chart 1

α,β-不飽和酮(Michael受體)的結(jié)構(gòu)單元是天然產(chǎn)物中常見的模塊[17-20]，例如姜黃素(curcumin)和查爾酮(chalcones)中都具有此單元，它們均具有多種重要的生物活性。在抗腫瘤方面，以其為母核設計合成的衍生物對多種腫瘤細胞表現(xiàn)出了顯著的抑制活性[21-25]，例如查爾酮衍生物，對人前列腺癌細胞(PC-3)細胞周期G2/M期具有阻滯作用，通過調(diào)節(jié)Bax和Bcl-2轉(zhuǎn)錄及增加caspase 3/7激活來誘導線粒體的凋亡[26]。從化學結(jié)構(gòu)上看，它們的抗腫瘤活性主要源于α,β-不飽和酮的存在，若沒有這一結(jié)構(gòu)片段的存在，它們的抗腫瘤活性將消失[27-28]。因此，α,β-不飽和酮可作為開發(fā)抗腫瘤藥物的核心結(jié)構(gòu)模塊。近年來，分子雜交(Molecular Hybridization)的策略廣泛應用于藥物化學領域，它能提高組成雜交分子的已知藥物或活性組分的活性或藥理作用[29-30]。

基于上述發(fā)現(xiàn)和分子雜交策略，本文以2-吲哚酮衍生物(1a～1c)與醛(2a～2n)為原料，通過克腦文格爾反應得到中間體3a～3p，此中間體再經(jīng)過?；磻罱K合成了17個含α,β-不飽和酮結(jié)構(gòu)的2-吲哚酮類衍生物1～17(Scheme 2)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1HNMR、13CNMR和MS(ESI)表征。1～17的E構(gòu)象是以化合物2為例通過分析其2D-NOEY譜及結(jié)合文獻來確定的。采用Cell Titer-Glo(CTG)法首次評價了1～17對人非小細胞肺癌細胞(A-549)，人乳腺癌細胞(MCF-7)和人胃腺癌細胞(BGC-823)增殖的抑制活性，并進一步探討了其初步的構(gòu)效關系。

Scheme 1

Scheme 2

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

WRX-4型微量熔點儀；Bruker AVANCE NEO 600 MHz型核磁共振儀(CDCl3為溶劑，TMS為內(nèi)標)；Bruker microTOF-Q型高分辨質(zhì)譜儀。

2p按照文獻[31]方法合成；其余所用試劑均為分析純。

1.2 合成

(1)2n的合成

取2p1.0 g(4.2 mmol)溶解于20 mL二氯甲烷中，加入活性二氧化錳3.6 g(42 mmol)，室溫反應24 h。過濾除去二氧化錳，濾液減壓除去溶劑，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=10/1，V/V) 純化得2n和2o，通過分析2D-NOEY譜圖對2n和2o進行區(qū)分。

2n： 白色固體422 mg，產(chǎn)率60%;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 9.78(s, 1H), 7.48(s, 1H), 6.98(dd,J=2.4 Hz, 4.2 Hz, 1H), 5.30(d,J=4.2 Hz, 1H), 3.74(s, 3H), 3.49(s, 3H), 3.35(td,J=4.2 Hz, 7.8 Hz, 1H), 3.27～3.30(m, 1H), 3.02～3.12(m, 1H), 2.54～2.62(m, 1H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 189.22, 167.43, 154.92, 152.26, 144.47, 110.59, 98.80, 56.63, 51.26, 45.14, 39.62, 33.44; MS(ESI)m/z: 261.0{[M+Na]+}。

2o： 白色固體136 mg，產(chǎn)率20%;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 9.77(s, 1H), 7.47(d,J=1.2 Hz, 1H), 7.10～7.03(m, 1H), 5.28(d,J=3.6 Hz, 1H), 3.76(s, 3H), 3.29(s, 3H), 3.25(dt,J=2.4 Hz, 5.4 Hz, 1H), 3.04～3.14(m, 2H), 2.44～2.54(m, 1H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 189.33, 167.71, 155.77, 150.70, 145.29, 110.45, 98.14, 56.29, 51.26, 42.15, 40.52, 32.66; MS(ESI)m/z: 261.3{[M+Na]+}。

(2)1～15的合成通法

在25 mL圓底燒瓶中加入1a～1c(3 mmol)，2a～2m(3.3 mmol)和8 mL無水乙醇，再加入25.0 mg(0.3 mmol)哌啶，在80 ℃加熱4 h。有沉淀生成，沉淀過濾后用乙醇洗滌，得中間體3a～3o。將3a～3o(3 mmol)溶于5 mL四氫呋喃中，加入乙酸酐1.5 g(15 mmol)和碳酸鈉1.6 g(15 mmol)，在室溫下攪拌24 h，加水稀釋，用乙酸乙酯萃取(3×50 mL)。有機層用飽和氯化鈉溶液洗滌(2×100 mL)，然后用無水MgSO4干燥，減壓除去溶劑，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=60/1～2/1，V/V) 純化得目標化合物1～15。

(E)-1-乙?；?3-亞芐基吲哚-2-酮(1)： 黃色固體542 mg，產(chǎn)率54%，m.p.145～146 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.34(d,J=8.4 Hz, 1H), 7.91(s, 1H), 7.72(d,J=7.2 Hz, 1H), 7.66(d,J=7.2 Hz, 2H), 7.50(ddd,J=8.4 Hz, 7.8 Hz, 6.0 Hz, 3H), 7.37～7.32(m, 1H), 7.05(td,J=7.8 Hz, 1.2 Hz, 1H), 2.79(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.91, 168.62, 140.28, 138.71, 134.42, 130.28, 130.07, 129.21, 128.81, 124.49, 122.16, 121.88, 116.75, 27.00, 26.93; MS(ESI)m/z: Calcd for C17H13NO2Na{[M+Na]+}286.0838, found 286.0831。

(E)-1-乙?；?6-氯-3-(3(三氟甲基)亞芐基)吲哚-2-酮(2)： 黃色固體321 mg，產(chǎn)率31%，m.p.142～143 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.41(d,J=1.8 Hz, 1H), 7.87(d,J=1.8 Hz, 2H), 7.81(d,J=12.0 Hz, 1H),7.75(d,J=12.0 Hz, 1H), 7.66(t,J=6.0 Hz, 1H), 7.46(d,J=6.0 Hz, 1H), 7.05(dd,J=12.0 Hz, 1.8 Hz, 1H), 2.74(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.84, 165.69, 139.53, 136.87, 134.59, 133.67, 128.91, 128.81, 128.49, 128.46, 127.32, 127.30, 125.61, 125.16, 122.65, 119.78, 117.32, 26.86. MS(ESI)m/z: Calcd for C18H11NO2F3ClNa{[M+Na]+} 388.0323, found 388.0311。

(E)-1-乙?；?6-氯-3-(4-(三氟甲基)亞芐基)吲哚-2-酮(3)： 黃色固體255 mg，產(chǎn)率25%，m.p.143～145 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.43(d,J=1.8 Hz, 1H), 7.84(s, 1H), 7.59～7.51(m, 3H), 7.49(s, 1H), 7.35(d,J=6.6 Hz, 1H), 7.06(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 2.78(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 168.22, 159.84, 140.92, 139.07, 135.88, 135.38, 130.05, 125.32, 124.64, 123.10, 121.49, 117.28, 116.10, 114.23, 77.25, 76.83, 55.42, 26.82; MS(ESI)m/z: Calcd for C18H11NO2F3ClNa{[M+Na]+} 388.0323, found 388.0311。

(E)-1-乙?；?6-氯-3-(2(三氟甲基)亞芐基)吲哚-2-酮(4)： 黃色固體254 mg，產(chǎn)率23%，m.p.131～133 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.66(d,J=6.0 Hz, 1H), 7.96(s, 1H), 7.56～7.60(m, 3H), 7.40(d,J=8.4 Hz, 1H), 7.04(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 2H), 2.98(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.59, 167.51, 141.34, 136.73, 129.50, 127.91, 126.56, 125.25, 124.94, 124.70, 124.50, 124.47, 123.26, 120.31, 119.72, 119.05, 117.47, 26.79; MS(ESI)m/z: Calcd for C18H11NO2FCl3Na+{[M+Na]+} 388.0323, found 388.0311。

(E)-1-乙?；?6-氯-3-(3-(三氟甲氧基)亞芐基)吲哚-2-酮(5)： 黃色固體302 mg，產(chǎn)率26%，m.p.135～136 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.41(d,J=1.8 Hz, 1H), 7.84(s, 1H), 7.59～7.51(m, 3H), 7.49(s, 1H), 7.35(d,J=6.6 Hz, 1H), 7.06(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 2.78(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.61, 167.89, 141.22, 136.58, 136.53, 136.12, 130.60, 127.48, 126.50, 124.81, 122.94, 122.53, 121.28, 119.74, 117.49, 26.87, 26.80; MS(ESI)m/z: Calcd for C18H12NO3F3Cl{[M+H]+}382.0452, found 382.0441。

(E)-1-乙?；?6-氯-3-(4-氯-3-(三氟甲基)亞芐基)吲哚-2-酮(6)： 黃色固體352 mg，產(chǎn)率29%，m.p.142～144 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.41(d,J=1.8 Hz, 1H), 8.36(d,J=1.8 Hz, 1H), 8.33(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 7.62(d,J=8.4 Hz, 1H), 7.55～7.51(m, 2H), 7.26(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 2.75(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.76, 165.76, 139.61, 136.07, 135.48, 132.22, 131.86, 131.56, 130.91, 130.88, 125.95, 125.24, 124.93, 122.48, 121.68, 119.84, 117.38, 26.87; MS(ESI)m/z: Calcd for C18H11NO2F3Cl2{[M+H]+} 400.0113, found 400.0121。

(E)-1-乙?；?6-氯-3-((2-(三氟甲基)吡啶-4-基)亞甲基)吲哚-2-酮(7)： 黃色固體354 mg，產(chǎn)率32%，m.p.143～144 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.79(d,J=6.0 Hz, 2H), 8.39(s, 1H), 7.46(d,J=5.4 Hz, 1H), 7.40(d,J=8.4 Hz, 1H), 7.04(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 2H), 2.77(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.49, 167.51, 150.64, 143.15, 142.16, 141.46, 137.03, 134.59, 128.01, 124.97, 123.30, 122.68, 119.38, 117.59, 26.78; MS(ESI)m/z: Calcd for C17H11N2O2F3Cl{[M+H]+} 367.0456, found 367.0447。

(E)-1-乙?；?3-(3-(三氟甲基)亞芐基)吲哚-2-酮(8)： 黃色固體284 mg，產(chǎn)率29%，m.p.121～123 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.36(d,J=8.4 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.87(s, 1H), 7.84(d,J=7.8 Hz, 1H), 7.74(d,J=7.8 Hz, 1H), 7.65(dd,J=18.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 7.56(d,J=7.8 Hz, 1H), 7.38(t,J=7.8 Hz, 1H), 7.07(t,J=7.8 Hz, 1H), 2.80(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.78, 168.21, 140.66, 136.05, 135.27, 132.19, 130.93, 129.45, 127.61, 126.44, 125.90, 124.68, 122.08, 121.28, 117.00, 26.92; MS(ESI)m/z: Calcd for C18H12NO2F3Na{[M+Na]+} 354.0712, found 354.0705。

(E)-1-乙?；?6-氯-3-(3-甲氧基-5-(三氟甲基)亞芐基)吲哚-2-酮(9)： 黃色固體296 mg，產(chǎn)率25%，m.p.140～142 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.40(d,J=1.8 Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 7.52～7.49(m, 1H), 7.23(s, 2H), 7.06(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 3.91(s, 3H), 2.77(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.74, 167.82, 160.29, 159.66, 141.19, 136.58, 136.26, 126.83, 124.84, 122.99, 119.70, 119.61, 117.91, 117.52, 117.27, 113.49, 112.23, 55.80, 26.79; MS(ESI)m/z: Calcd for C19H14NO3F3Cl {[M+H]+}396.0609, found 396.0616。

(E)-1-乙?；?6-氯-3-(3-甲氧基亞芐基)吲哚-2-酮(10)： 黃色固體311 mg，產(chǎn)率32%，m.p.141～143 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.39(d,J=1.8 Hz, 1H), 7.88(s, 1H), 7.67(d,J=8.4 Hz, 1H), 7.42(t,J=7.8 Hz, 1H), 7.21(d,J=7.2 Hz, 1H), 7.13(s, 1H), 7.06～6.99(m, 2H), 3.86(s, 3H), 2.77(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.73, 168.22, 159.84, 140.92, 139.07, 135.88, 135.38, 135.09, 130.05, 125.32, 124.64, 123.10, 121.49, 117.28, 116.10, 114.23, 55.42, 26.82; MS(ESI)m/z: Calcd for C18H14NO3ClNa{[M+Na]+} 350.0554, found 350.0546。

(E)-1-乙?；?5-氯-3-(3-氯-2-氟亞芐基)吲哚-2-酮(11)： 黃色固體268 mg，產(chǎn)率24%，m.p.141～142 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.30(d,J=9.0 Hz, 1H), 7.87(s, 1H), 7.59～7.55(m, 2H), 7.43(d,J=1.8 Hz, 1H), 7.36～7.31(m, 1H), 7.26(t,J=7.8 Hz, 1H), 2.78(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.58, 167.48, 141.32, 136.71, 132.48, 129.87, 128.15, 127.80, 125.23, 124.92, 124.78, 123.21, 120.28, 119.71, 117.46, 26.78; MS(ESI)m/z: Calcd for C18H11NO2FCl2{[M+H]+} 350.0547, found 350.0422。

(E)-1-乙?；?6-氯-3-(3-氯-2氟亞芐基)吲哚-2-酮(12)： 黃色固體284 mg，產(chǎn)率27%，m.p.135～136 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.40(d,J=1.8 Hz, 1H), 7.81(s, 1H), 7.58～7.53(m, 2H), 7.37(d,J=8.4 Hz, 1H), 7.27～7.19(m, 1H), 7.06(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 2.78(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.69, 167.48, 139.09, 132.80, 131.16, 130.69, 130.22, 130.13, 128.04, 127.68, 124.88, 124.85, 122.70, 122.40, 119.55, 118.07, 26.79; MS(ESI)m/z: Calcd for C18H10NO2FCl2Na{[M+Na]+}350.0547, found 350.0422。

(E)-1-乙?；?6-氯-3-(4-氯-3氟亞芐基)吲哚-2-酮(13)： 黃色固體275 mg，產(chǎn)率26%，m.p.151～153 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.35(d,J=1.8 Hz, 1H), 8.21(dd,J=10.8 Hz, 1.8 Hz, 1H), 7.81～7.71(m, 1H), 7.49(dd,J=15.6 Hz, 7.2 Hz, 3H), 7.24(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 2.75(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.80, 165.77, 139.44, 136.24, 136.22, 135.82, 133.24, 130.48, 128.81, 128.78, 125.15, 122.68, 119.69, 119.36, 119.21, 117.31, 26.88, 26.79; MS(ESI)m/z: Calcd for C18H11NO2FCl2{[M+H]+} 350.0547, found 350.0422。

(E)-1-乙?；?6-氯-3-(2,3-二氟亞芐基)吲哚-2-酮(14)： 黃色固體342 mg，產(chǎn)率34%，m.p.136～137 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.41(d,J=1.8 Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 7.40(d,J=7.8 Hz, 2H), 7.35～7.29(m, 1H), 7.26～7.18(m, 1H), 7.08(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 2.79(s, 3H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.59, 167.51, 141.34, 136.73, 129.50, 127.91,124.91, 124.72, 124.70, 124.47, 123.26, 120.31, 119.72, 119.16, 119.05, 117.47, 26.79； MS(ESI)m/z: Calcd for C17H10NO2F2ClNa{[M+Na]+}356.0260，found 356.0250。

叔丁基(E)-4-((1-乙?；?6-氯-2-氧吲哚-3-亞丙基)甲基)苯甲酸酯(15)： 黃色固體368 mg，產(chǎn)率31%，m.p.138～139 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.39(d,J=1.8 Hz, 1H), 8.11(d,J=8.4 Hz, 2H), 7.89(s, 1H), 7.66(d,J=8.4 Hz, 2H), 7.53(d,J=8.4 Hz, 1H), 7.03(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 2.77(s, 3H), 1.65(s, 9H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.63, 167.94, 164.91, 141.15, 138.12, 137.60, 136.37, 133.32, 129.93, 128.87, 126.40, 124.78, 123.04, 119.95, 117.41, 81.72, 28.19, 26.80; MS(ESI)m/z: Calcd for C22H20NO4ClNa{[M+Na]+} 420.0946, found 420.0963。

(3)16的合成

在25 mL圓底燒瓶中加入6-氯-2-吲哚酮1c500 mg(3 mmol)，2n785 mg(3.3 mmol)和4 mL 甲醇，緩慢滴加哌啶25 mg(0.3 mmol)，在室溫下攪拌24 h。有沉淀生成，沉淀過濾后用甲醇洗滌，中間體3p。將3p(3 mmol)溶于5 mL四氫呋喃中，加入乙酸酐 1.5 g(15 mmol)和碳酸鈉 1.6 g(15 mmol)，在室溫下攪拌12 h，加水稀釋，用乙酸乙酯萃取(3×50 mL)。有機層用飽和氯化鈉溶液洗滌(2×100 mL)，然后用無水MgSO4干燥，減壓除去溶劑，殘余物經(jīng)硅膠柱層析 (洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=10/1,V/V) 純化得黃色固體16： 386 mg，產(chǎn)率30%，m.p.136～137 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.38(d,J=1.8 Hz, 1H), 7.78(d,J=8.4 Hz, 1H), 7.56(s, 1H), 7.42(s, 1H), 7.12(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 6.57(s, 1H), 4.65(d,J=7.2 Hz, 1H), 3.78(s, 3H), 3.54(s, 3H), 3.37(q,J=7.8 Hz, 1H), 3.17(dd,J=18.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 2.97(t,J=7.2 Hz, 1H), 2.74(s, 3H), 2.47～2.40(m, 1H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 170.74, 168.06, 167.55, 152.33, 140.70, 138.79, 138.07, 135.53, 134.78, 125.29, 124.70, 122.99, 120.73, 117.29, 110.56, 101.90, 57.25, 51.39, 49.14, 40.43, 34.48, 26.78; MS(ESI)m/z: Calcd for C22H20NO6ClNa{[M+Na]+} 452.0871, found 452.0858。

(4)17的合成

在25 mL圓底燒瓶中加入3b323 mg(1 mmol)，加入二氯甲烷溶解，再加入4-二甲基氨基吡啶12 mg(DMAP, 0.1 mmol)和(Boc)2O 327 mg(1.5 mmol)在室溫下攪拌6 h，加水稀釋，用乙酸乙酯萃取(3×50 mL)。有機層用飽和氯化鈉溶液洗滌(2×100 mL)，然后用無水MgSO4干燥，減壓除去溶劑，殘余物經(jīng)硅膠柱層析 (洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=80/1，V/V) 純化得黃色固體17： 452 mg，產(chǎn)率36%，m.p.151～152 ℃;1H NMR(600 MHz, CDCl3)δ: 8.03(d,J=1.8 Hz, 1H), 7.86(d,J=4.2 Hz, 2H), 7.78(d,J=7.8 Hz, 1H), 7.73(d,J=7.8 Hz, 1H), 7.64(t,J=7.8 Hz, 1H), 7.43(d,J=8.4 Hz, 1H), 7.01(dd,J=8.4 Hz, 1.8 Hz, 1H), 1.70(s, 9H);13C NMR(150 MHz, CDCl3)δ: 165.79, 150.21, 141.23, 136.46, 136.09, 135.23, 132.16, 129.51, 126.81, 125.78, 125.26, 125.13, 124.05, 122.95, 119.35, 116.18, 85.02, 28.10; MS(ESI)m/z: Calcd for C21H17NO3F3ClNa{[M+Na]+} 446.0741, found 446.0733。

1.3 體外抗腫瘤活性評價

以阿霉素為陽性對照，采用Cell Titer Glo(CTG)法，以A549、 MCF-7和BGC-823為受試細胞，測試化合物1～17在體外對腫瘤細胞株的生長抑制作用。將藥物用DMEM培養(yǎng)液稀釋成實驗設計濃度，按照實驗分組，細胞經(jīng)計數(shù)后接種于96孔培養(yǎng)板，2000細胞/100 μL/孔，每孔加入90 μL培養(yǎng)液(含血清)培養(yǎng)過夜，再加入10 μL藥物溶液，培養(yǎng)72 h后，每孔加入CTG 100 μL，室溫避光孵育10 min，酶標儀測定各孔化學發(fā)光值，每孔檢測時間為500 ms，重復3次，取平均值，計算得IC50。

2 結(jié)果與討論

2.1 合成

在制備中間體2n時，開始采用了戴斯-馬丁氧化劑，但是其產(chǎn)率不高且后處理也比較繁瑣，因而改采用二氧化錳氧化，產(chǎn)率有所提高且后處理更簡單。

在制備中間體3p時，采用合成3a～3o的方法產(chǎn)物無法沉淀出來，這將增加化合物的純化步驟，后續(xù)經(jīng)過反應條件優(yōu)化，將反應溶劑換為甲醇，反應溫度為室溫，反應時間為24 h，3p能以沉淀形式析出，直接過濾可得到產(chǎn)物，縮短了化合物的純化步驟。

2.2 抗腫瘤活性

首先測試了目標化合物(1～17)在10 μM濃度下對A-549， MCF-7和BGC-823的抑制率，由表1可知：化合物6、8、9、11～13和16對BGC-823均具有顯著的抑制作用，抑制率分別為61.32±0.36%、 80.03±1.90%、 80.03±1.90%、 72.47±1.39%、 71.67±0.78%、 78.22±1.38%和87.46±0.71%，說明這類化合物對BGC-823細胞的選擇性更強。

表1 10 μM 時1～17的體外抗腫瘤活性(抑制率/%)

進一步對抑制作用顯著的7個化合物(6、8、9、11～13和16)在不同濃度下對A-549， MCF-7和BGC-823的作用進行了進一步的研究，獲得了相應的IC50值。由表2可知，所測試的大部分化合物對BGC-823和MCF-7增殖的抑制活性更顯著，特別是化合物8和16，對MCF-7的IC50值為0.45±0.08和0.20±0.02 M，尤其是16對MCF-7增殖的抑制活性與陽性對照阿霉素相當，對BGC-823的IC50值為0.38±0.02和0.34±0.04 μM。從化合物8可以看出，在含有三氟甲基的化合物中，R和R1對這類化合物的抗腫瘤活性具有很大的影響，只有當R為H及R1為3-CF3時，才對腫瘤細胞具有抑制作用?；衔?6的合成[31-32]，發(fā)現(xiàn)京尼平苷元在抗腫瘤方面具有重要作用，且發(fā)現(xiàn)京尼平苷元的抗腫瘤活性與其結(jié)構(gòu)中α,β-不飽和酮的結(jié)構(gòu)單元密切相關，因此，基于本文的設計思路，引入了京尼平苷元結(jié)構(gòu)并通過分子雜交的手段將其與2-吲哚酮的結(jié)構(gòu)相結(jié)合，得到了化合物16，且該化合物對三種腫瘤細胞表現(xiàn)出了顯著的抗腫瘤作用。

表2 目標化合物的體外抗腫瘤活性

本文以2-吲哚酮和α,β-不飽和酮的結(jié)構(gòu)為核心骨架，通過分子雜交策略，設計并合成了17個目標化合物(1～17)。采用CTG法首次評價了它們對A549、 MCF-7和BGC-823細胞的抑制活性。結(jié)果顯示大多數(shù)化合物對MCF-7和BGC-823細胞增殖的抑制活性更顯著，特別是8和16，對MCF-7的IC50值為0.45±0.08和0.20±0.02 μM，尤其是16對MCF-7的抑制活性與陽性對照阿霉素相當，對BGC-823的IC50值為0.38±0.02和0.34±0.04 μM。初步的構(gòu)效關系分析表明在結(jié)構(gòu)中引入多個含有α,β-不飽和酮結(jié)構(gòu)的片段可能有利于增強這類化合物抗腫瘤活性。