免疫組化染色對(duì)病理技術(shù)質(zhì)量控制的影響

邢延青

（中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九六O醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250000）

0 引言

臨床病理學(xué)診斷的重要部分為病理技術(shù)，切片質(zhì)量直接影響了對(duì)疾病判斷的準(zhǔn)確率，所以病理技術(shù)質(zhì)量控制尤為重要。常規(guī)的病理制片，存在一定的診斷局限性，容易漏診或誤診。隨著現(xiàn)代醫(yī)療水平的不斷提高，免疫組化技術(shù)水平逐漸提升，這種技術(shù)切片質(zhì)量高，診斷準(zhǔn)確，已成為最普遍以及不可替代的輔助診斷技術(shù)[1]。本研究就100例患者為研究對(duì)象，對(duì)免疫組化染色對(duì)病理技術(shù)質(zhì)量控制的影響進(jìn)行探究。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取2019年12月至2020年12月在中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九六O醫(yī)院接受治療的100例患者作為此次研究對(duì)象，并將其隨機(jī)分為研究組與對(duì)照組，每組患者50例，其中，對(duì)照組男28例，女22例，年齡31～78歲，平均（48.38±6.76）歲；研究組男23例，女27例，年齡35～80歲，平均（52.56±4.73）歲。100例患者均自愿參與研究，簽署了《知情同意書》，比較兩組患者的基本資料，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法。對(duì)照組采用常規(guī)蘇木精-伊紅染色法（HE染色法），首先將組織蠟塊進(jìn)行常規(guī)切片、烤片處理，隨后二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各脫蠟5 min，無(wú)水乙醇、95%乙醇、85%乙醇洗滌各1 min，流水沖洗后，放入蘇木精染色5～10 min，水洗，1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，水洗，0.5%氨水反藍(lán)，水洗，醇溶性伊紅染色數(shù)秒鐘，最后85%乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ脫水，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明，中性樹膠封片。染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞漿呈粉紅色。研究組采用免疫組化染色，首先將切片在室溫下進(jìn)行常規(guī)脫蠟處理，在常溫下放入3%的雙氧水中浸泡20 min；浸泡完之后，用PBS將切片進(jìn)行沖洗，注意需要清洗三次以上，5 min一次，清洗時(shí)間要大于15 min；然后將700 mL+pH6.0的檸檬酸緩沖液倒入1000 mL的燒杯中，對(duì)其進(jìn)行加熱，加熱至沸騰；將記HBsAg、HBcAg、ki-67、CK19抗體的切片均放入燒杯中并做好標(biāo)記，加熱15 min后取出；在常溫下冷卻后用pH7.4的PBS對(duì)切片進(jìn)行清洗，次數(shù)與時(shí)間同上；所有切片均給予一抗處理，放置于4℃的冰箱內(nèi)過(guò)夜孵育；用pH7.4的PBS進(jìn)行沖洗，次數(shù)時(shí)間同上，再給予切片滴加二抗，放置于常溫下孵育，時(shí)間為10 min；最后一次用pH7.4的PBS進(jìn)行沖洗，次數(shù)時(shí)間同上，5～10 min的DAB顯色；水洗后用蘇木精進(jìn)行襯染，用脫水透明中型樹膠進(jìn)行封固；將陰性陽(yáng)性設(shè)置好以便針對(duì)不同的抗體[2]。常規(guī)病理制片的切片結(jié)構(gòu)要求完整、薄，最佳厚度為3μm，無(wú)破損無(wú)折疊，細(xì)胞的形態(tài)可以觀察清楚，染色較為明顯，能夠較好的進(jìn)行核物質(zhì)對(duì)比；免疫組化染色切片固定要及時(shí)，染色要清晰，對(duì)比鮮明，透光性好，結(jié)構(gòu)完好無(wú)損，能夠精確定位陽(yáng)性物質(zhì)，背景干凈，色澤艷麗，無(wú)特異性著色。

1.3 指標(biāo)觀察。觀察比較兩組患者的切片優(yōu)良總計(jì)率和確診率。切片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[3]：優(yōu)：患者病理活檢組織一致，細(xì)胞結(jié)構(gòu)沒有損壞、不收縮，細(xì)胞形態(tài)清楚，染色明顯，能夠很好的對(duì)比核質(zhì)染色，沒有脫片現(xiàn)象；良好：患者病理活檢組織不完全一致，細(xì)胞結(jié)構(gòu)沒有明顯損壞、不收縮，細(xì)胞形態(tài)較為清楚、染色較為明顯，能夠較好對(duì)比核質(zhì)染色，脫片現(xiàn)象不明顯；差：患者病理活檢組織不一致，細(xì)胞結(jié)構(gòu)有明顯損壞、細(xì)胞收縮，細(xì)胞形態(tài)模糊，染色無(wú)法分辨，核質(zhì)染色對(duì)比效果較差，有嚴(yán)重的脫片現(xiàn)象。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。將數(shù)據(jù)輸入SPSS 20.0中處理，計(jì)量資料用（）表示，用t、χ2檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料n/%表示，P＜0.05，組間數(shù)據(jù)比較存在意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者切片優(yōu)良率。經(jīng)過(guò)對(duì)比統(tǒng)計(jì)，研究組患者50例，其中優(yōu)良切片48例，切片優(yōu)良率為96%；對(duì)照組患者50例，其中優(yōu)良切片有40例，優(yōu)良切片率為80%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者切片優(yōu)良率[n（%）]

2.2 兩組患者的確診率。通過(guò)免疫組化染色的研究組確診率為（94.00%），常規(guī)HE染色對(duì)照組確診率為（74.00%），研究組確診率明顯高于對(duì)照組確診率，組間數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組患者的確診率[n（%）]

3 討論

隨著我國(guó)醫(yī)療水平的不斷提高，人們清楚的認(rèn)識(shí)到病理技術(shù)質(zhì)量控制的重要性。切片質(zhì)量對(duì)病理診斷具有重大意義，免疫組化染色能夠有效的提高切片質(zhì)量。

免疫組化染色原理是合酶聚合物與二抗相結(jié)合，形成了多聚螯合物，再結(jié)合一抗，使得抗原抗體的信號(hào)放大，由于不會(huì)有鏈霉菌抗生物素蛋白在多聚物中出現(xiàn)，所以不會(huì)發(fā)生背景染色的現(xiàn)象，也就提高了切片的質(zhì)量。在施行免疫組化染色時(shí)，最為重要的一步就是取材，在進(jìn)行取材時(shí)極易出現(xiàn)以下問(wèn)題[4]：①免疫組化取材時(shí)，對(duì)切片的質(zhì)量要嚴(yán)格把控，要保證選取的病變組織適宜且體積厚度一致，對(duì)標(biāo)本的描述要詳盡，對(duì)標(biāo)本的組織部位記載要準(zhǔn)確，對(duì)標(biāo)本要進(jìn)行及時(shí)處理和保存，避免標(biāo)本被污染，影響切片效果。②操作人員要在取材時(shí)就嚴(yán)格把控好切片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。后期進(jìn)行固定操作后，能讓新鮮組織保存好原來(lái)細(xì)胞形態(tài)，未能固定好，組織會(huì)形成自溶現(xiàn)象，在術(shù)后取得組織標(biāo)本后，需盡快放置在固定液之中，讓其充分固定好，固定時(shí)間依據(jù)樣本大小不同存在差異性，大樣本固定時(shí)間在18～24 h，小樣本固定時(shí)間在4～6 h。免疫組化染色操作時(shí)，需良好染色試劑，能直接影響染色效果，脫蠟、浸水、脫水及透明時(shí)，選用酒精及二甲苯等試劑，需及時(shí)更新和補(bǔ)充，每一種試劑是否穩(wěn)定會(huì)直接影響臨床病理診斷結(jié)果。常見問(wèn)題為[4]：①試劑的保存方法存在問(wèn)題，使得試劑產(chǎn)生揮發(fā)，造成純度下降；②長(zhǎng)時(shí)間未能更新制劑，未能及時(shí)添加缺漏制劑，延滯了切片工作，使得組織切片質(zhì)量下降，直接造成診斷準(zhǔn)確性受到影響；在日常工作中，應(yīng)定期更換免疫組化試劑，嚴(yán)格把關(guān)試劑使用、采購(gòu)及配置，保障所有切片質(zhì)量。在控制好免疫組化治療過(guò)程中，最為重要的步驟為[5]：①對(duì)抗原進(jìn)行高壓修復(fù)操作，對(duì)染色結(jié)果有著重大影響的操作就是抗原修復(fù)，一旦在抗原修復(fù)過(guò)程中，修復(fù)不當(dāng)或修復(fù)時(shí)間短和溫度低，會(huì)造成無(wú)色片或假陰性片的形成；②組建免疫組化抗原陽(yáng)性和陰性對(duì)比化學(xué)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，檢驗(yàn)免疫組化染色結(jié)果通過(guò)設(shè)置對(duì)照片來(lái)提升可信性，讓免疫組化形成標(biāo)準(zhǔn)化操作，這個(gè)步驟不可缺少，也是極為關(guān)鍵步驟，完善質(zhì)量技術(shù)指標(biāo)也是我院醫(yī)務(wù)人員形成自我保護(hù)的一種良好方式；③免疫組化染色操作時(shí)，對(duì)操作人員的要求非常高，所有操作嚴(yán)格依據(jù)要求進(jìn)行，這也是保障染色質(zhì)量和可重復(fù)性的重要依據(jù)。

本研究中通過(guò)對(duì)比常規(guī)HE染色與免疫組化染色對(duì)病理技術(shù)質(zhì)量控制的影響，發(fā)現(xiàn)，研究組患者50例，其中優(yōu)良切片48例，切片優(yōu)良率為96%；對(duì)照組患者50例，其中優(yōu)良切片有40例，優(yōu)良切片率為80%；研究組確診率為（94.00%），常規(guī)HE染色對(duì)照組確診率為（74.00%），結(jié)果顯示，使用免疫組化染色的研究組患者，切片優(yōu)良率明顯高于使用常規(guī)HE染色對(duì)照組；研究組的確診率比對(duì)照組確診率要高，這些結(jié)果都可以說(shuō)明免疫組化染色的有效性、準(zhǔn)確性，在常規(guī)HE染色切片不能對(duì)病例做出診斷時(shí)，可優(yōu)先選擇免疫組化染色技術(shù)進(jìn)行輔助診斷。

綜上所述，免疫組化染色對(duì)病理技術(shù)質(zhì)量控制起著積極作用，能夠有效地提高診斷的準(zhǔn)確性，讓患者能夠得到快速且全面的治療，同時(shí)也使病理技術(shù)的質(zhì)量更上一層樓。