替比夫定在小鼠自身免疫性肝炎中對(duì)血清IL-17的影響

張笛，李貞茂

（四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院/四川省人民醫(yī)院 消化內(nèi)科，四川 成都 610072）

0 引言

IL-17是輔助性T淋巴細(xì)胞17（Th17）分泌的一種重要的促炎因子。IL-17可誘導(dǎo)多種趨化因子積極參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)。IL-17可促進(jìn)Th17活化，通過(guò)激活肝臟內(nèi)細(xì)胞產(chǎn)生炎性介質(zhì)，分泌多種促炎因子影響肝臟的炎癥[1]。IL-17在自身免疫性肝炎（AIH）中表達(dá)明顯升高，在AIH發(fā)病過(guò)程中，IL-17可能介導(dǎo)了肝臟炎癥及纖維化[2]。替比夫定（Telbivudi-ne，LdT）是目前很多乙肝患者使用的抗病毒的藥物，它單獨(dú)使用及聯(lián)合阿德福韋酯的治療對(duì)乙肝抗病毒有較好作用[3]，特別是它的免疫調(diào)節(jié)作用如對(duì)IL-17的調(diào)節(jié)作用得到一些研究證實(shí)[4-5]。本次研究把重點(diǎn)放在了替比夫定對(duì)小鼠自身免疫性肝炎中血清IL-17水平的影響，希望為自身免疫性肝炎患者如果合并慢性乙型活動(dòng)性肝炎的選藥提供更好地選擇依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料及動(dòng)物造模。購(gòu)買(mǎi)6～8周C57BL/6雄性小鼠（體重在20 g左右）20只，取10只小鼠的肝臟經(jīng)過(guò)超聲破碎超速離心后，取其上清液含肝抗原S-100。0.5 mL新鮮S-100肝抗原與等體積的弗氏完全佐劑（CFA）充分乳化后，分別在第1 d和第7 d經(jīng)腹腔注射入10只小鼠體內(nèi)造模，繼續(xù)飼養(yǎng)小鼠到21 d。

1.2 方法。造模結(jié)束后，在治療給藥前，從小鼠眼底靜脈叢取血，測(cè)IL-17的值（ELISA法）和肝功（ALT、AST、ALP、GGT）。后使用灌胃給藥，每天一次，劑量通過(guò)小鼠與人體表面積折算的等效劑量比值表進(jìn)行計(jì)算后給予替比夫定（素比伏，諾華公司）86.5 mg/kg，每日一次，持續(xù)30天后再次從小鼠眼底靜脈叢取血測(cè)IL-17的值（ELISA法）和肝功（ALT、AST、ALP、GGT）。

1.3 檢測(cè)方法。血清IL-17使用ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)（美國(guó)R&D公司試劑）；使用雅培 C-16000 全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝功能等生化指標(biāo)（北京中生北控生物科技股份公司）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 給予替比夫定治療前，10只小鼠IL-17、ALT（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）、AST（天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）均較正常值明顯升高，ALP（堿性磷酸酶）、GGT（谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶）較正常值輕微升高。

2.2 IL-17等在替比夫定治療前后情況比較。從表1可以看出，IL-17、ALT治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），AST、GGT和ALP治療前后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 IL-17等在替比夫定治療前后情況比較（）

表1 IL-17等在替比夫定治療前后情況比較（）

項(xiàng)目 組別 n 治療前后值 F P IL17 治療前 10 819.20±12.639（pg/mL） 2.165 0.001治療后 10 501.70±23.571（pg/mL）ALT 治療前 10 266.00±26.774（U/L） 2.092 0.001治療后 10 110.30±14.376（U/L）AST 治療前 10 176.00±15.470（U/L） 3.340 0.093治療后 10 167.20±8.618（U/L）GGT 治療前 10 76.40±7.120（U/L） 2.179 0.086治療后 10 61.50±4.080（U/L）ALP 治療前 10 128.50±10.550（U/L） 0.313 0.203治療后 10 107.00±12.367（U/L）

3 討論

自身免疫性肝炎（AIH）是一種與免疫相關(guān)的慢性炎癥性肝臟疾病，AIH主要表現(xiàn)為肝功能異常、轉(zhuǎn)氨酶升高（主要表現(xiàn)為ALT、AST明顯升高，GGT、ALP輕度升高或正常）、自身抗體陽(yáng)性及高免疫球蛋白血癥（以IgG升高為主）等的自身免疫性疾病。目前AIH的發(fā)病機(jī)制至今尚未闡明，目前認(rèn)為針對(duì)宿主肝抗原的免疫反應(yīng)是AIH肝臟損傷的主要機(jī)制[6]，研究已表明，T淋巴細(xì)胞在AIH免疫調(diào)解機(jī)制中發(fā)揮重要作用[7]。IL-17是Th17細(xì)胞分泌并參與生物功能的主要細(xì)胞因子，Th17細(xì)胞作為一種新型的輔助T細(xì)胞亞型正是主要通過(guò)分泌IL-17和IL-22等細(xì)胞因子，從而參與機(jī)體的免疫作用，在介導(dǎo)自身免疫性疾病、炎癥反應(yīng)等過(guò)程中發(fā)揮重要作用[8]。目前研究表明發(fā)現(xiàn)IL-17廣泛表達(dá)于AIH、PBC以及重疊綜合征患者肝組織中炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯的匯管區(qū)，主要在單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的胞漿中有IL-17的大量表達(dá)。造模小鼠IL-17及肝臟功能出現(xiàn)異常，在造模后第7 d開(kāi)始增加，并在第21 d達(dá)到高峰。有研究表明IL-17可以促進(jìn)組織局部中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)，在自身免疫性肝炎中IL-17可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞局部的趨化，IL-17可以促進(jìn)自身免疫性肝炎肝臟局部炎癥的進(jìn)展，控制IL-17可以改善AIH患者的肝臟炎癥[9]。

替比夫定（LdT）是胸腺嘧啶脫氧核苷類(lèi)抗病毒藥物，目前很多研究表明，其具有抑制病毒之外的免疫調(diào)節(jié)作用，LdT對(duì)免疫主體包括適應(yīng)性免疫（CD4+/CD8+T cells，Th1/Th2，Treg，Th17，IL-21等）和固有免疫（NK，NKT和巨噬細(xì)胞等）等均有調(diào)節(jié)作用，對(duì)IL-17有明顯的調(diào)節(jié)作用。

本次研究最開(kāi)始的想法是，既然LdT對(duì)IL-17有調(diào)節(jié)作用，IL-17 在AIH免疫調(diào)解機(jī)制中起著重要作用，那對(duì)于AIH患者如果合并慢性乙型病毒性活動(dòng)性肝炎時(shí)，在抗病毒藥物選擇中使用LdT可能同時(shí)更有利于兩種慢性肝臟疾病的恢復(fù)。從本次研究中發(fā)現(xiàn)，LdT的免疫調(diào)節(jié)作用對(duì)AIH小鼠的血清IL-17及部分肝臟功能改善有明顯的作用，因而從一方面表明AIH患者如果合并慢性乙型病毒性活動(dòng)性肝炎時(shí)，在抗病毒藥物選擇中使用LdT可能更加合適。

本次研究的小鼠例數(shù)較少，且在造模過(guò)程中，一直無(wú)法很好完成同時(shí)合并AIH和慢性乙型病毒性活動(dòng)性肝炎的小鼠模型。如果AIH和慢性乙型病毒性活動(dòng)性肝炎同時(shí)合并的情況下，肝臟損害情況更加復(fù)雜，LdT是否同樣能明顯改善肝臟情況，特別是運(yùn)用到患者身上的情況需進(jìn)一步觀察研究，與其他抗病毒藥物的比較仍需進(jìn)一步研究。