γ-去氫駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿小鼠單次經(jīng)口給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

阿娜古麗·馬合木提，祖里皮亞·塔來提

（1.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，新疆 烏魯木齊830001；2.新疆維吾爾重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830001）

0 引言

β-咔啉類生物堿是在自然界分布最廣，數(shù)量最多，也是研究最為深入的咔啉類生物堿，呈現(xiàn)非常廣譜的生物活性，如抗腫瘤、抗病毒、抗真菌、抗炎、抗瘧疾、殺藻等，其中抗癌作用研究的最多[1]。然而，近年來，與β-咔啉類生物堿相比，γ-咔啉生物堿以更為顯著的抗癌活性引起人們的注意[2-3]。目前，天然產(chǎn)物當(dāng)中報(bào)道的γ-咔啉生物堿極少，對其研究主要集中在合成的化合物[4]。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠單次經(jīng)口給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)，以γ-去氫駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿兩種成分不同劑量小鼠死亡情況和死亡率，以改良寇氏法計(jì)算LD50[5]，為評價(jià)γ-去氫駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿兩種化合物的用藥安全性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 研究材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。KM小鼠，體重18～22g，雌雄各半，購于新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心，等級：SPF級。動(dòng)物飼養(yǎng)于小鼠塑料籠盒內(nèi)，每籠飼養(yǎng)同性別動(dòng)物不多于5只，自由飲水、攝食，室溫20℃～26℃，相對濕度40%～70%，光照12 h，黑暗12 h；實(shí)驗(yàn)開始前適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，經(jīng)一般行為觀察，選用符合要求的動(dòng)物作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

1.2 藥物。γ-去氫駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿，自制，含量大于98%。溶媒：0.5%羧甲基纖維素鈉CMC-Na溶液，批號：181104，購于天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所。

1.3 飼料、墊料及飲用水。SPF鼠維持飼料購于北京科澳協(xié)力飼料有限公司；SPF級木屑墊料購于北京科澳協(xié)力飼料有限公司；飲用水為通過高壓滅菌的純化水，墊料經(jīng)高壓滅菌后使用。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器。MP6001電子天平（上海恒平科學(xué)儀器有限公司）。

2 方法

2.1 小鼠經(jīng)口給藥實(shí)驗(yàn)。取KM健康小鼠120只，雌雄各半，按體重和性別隨機(jī)分5組，以γ-去氫駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿兩種化合物，在LD0與LD100間設(shè)計(jì)5個(gè)劑量，每組l0只，間距1∶0.75。每只0.2 mL/10 g經(jīng)口給藥。給藥后觀察14 d，觀察有無異常反應(yīng)，記錄小鼠死亡情況和計(jì)算死亡率，以改良寇氏法計(jì)算LD50。

2.2 數(shù)據(jù)處理[5]。改良寇氏法計(jì)算LD50：

Xm為最大劑量組劑量的對數(shù)值，P為各組小鼠的死亡率，用小數(shù)表示，i為相鄰兩劑量比值的對數(shù)，即l g（高/低），n為每組小鼠數(shù)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 一般癥狀及解剖觀察。γ-去氫駱駝蓬堿組死亡小鼠剛開始出現(xiàn)毒性時(shí)，出現(xiàn)自主運(yùn)動(dòng)減少，呼吸困難，紫紺等癥狀。去氫駱駝蓬堿組小鼠死亡前不同程度出現(xiàn)活動(dòng)減少，呼吸急促等癥狀。死亡小鼠解剖觀察：大部分小鼠心臟、血管瘀血，部分肝臟顏色呈深紅色，小部分小鼠肝臟有黃斑，胃腸道顏色脹氣等情況。

3.2 小鼠死亡情況，見表1和表2。

表1 γ-去氫駱駝蓬堿單次經(jīng)口給藥實(shí)驗(yàn)小鼠死亡情況表

表2 去氫駱駝蓬堿單次經(jīng)口給藥實(shí)驗(yàn)小鼠死亡情況表

3.3 計(jì)算半數(shù)死死量（LD50）。由表1和表2可見：γ-去氫駱駝蓬堿組最大劑量組劑量的對數(shù)值Xm為2.6049，去氫駱駝蓬堿組Xm為2.6631。用改良寇氏法計(jì)算經(jīng)口給藥LD50，LD5095%的可信區(qū)間，LD50的平均可信區(qū)間。γ-去氫駱駝蓬堿小鼠單次經(jīng)口給藥LD50為213.75mg/kg。LD5095%的可信區(qū)間是184.5～247.63（mg/kg）；LD50的平均可信區(qū)間是182.19～245.32（mg/kg）。去氫駱駝蓬堿小鼠單次經(jīng)口給藥LD50為274.22 mg/kg。LD5095%的可信區(qū)間是234.15～321.14（mg/kg）；LD50的平均可信區(qū)間是230.76～317.68（mg/kg）。

4 討論

近年來，國內(nèi)外學(xué)者對去氫駱駝蓬堿進(jìn)行大量的研究，并取得一定成果，但至今對γ-去氫駱駝蓬堿的研究報(bào)告極少。前期研究中，本課題組已從民族藥材駱駝蓬中分離制備了γ-去氫駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿，本實(shí)驗(yàn)研究針對γ-去氫駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿等兩種化合物進(jìn)行了安全性試驗(yàn)研究，對其安全性和毒性進(jìn)行了科學(xué)評價(jià)，并為臨床安全用藥的劑量設(shè)計(jì)提供參考依據(jù)，為臨床毒性反應(yīng)的監(jiān)護(hù)及生理生化指標(biāo)監(jiān)測提供依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)口給藥一定濃度的γ-去氫駱駝蓬堿小鼠可出現(xiàn)死亡，死亡小鼠急性毒性主要表現(xiàn)為自主運(yùn)動(dòng)減少，呼吸困難，紫紺；經(jīng)口給藥一定濃度的去氫駱駝蓬堿小鼠可出現(xiàn)死亡，死亡小鼠急性毒性主要表現(xiàn)為活動(dòng)減少，呼吸急促。死亡小鼠解剖觀察：大部分小鼠心臟、血管瘀血，部分肝臟顏色呈深紅色，小部分小鼠肝臟有黃斑，胃腸道顏色脹氣等情況。