2020年貴州省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對結(jié)果分析

李照偉， 李 濤， 劉 霞， 毛以智， 王 慧， 張 霞， 倪興維

(貴州省動物疫病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽 550008)

按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局和貴州省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳開展獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的要求，貴州省動物疫病預(yù)防控制中心于2020年9月組織實施了全省市、縣級獸醫(yī)實驗室檢測能力比對工作[1～3]。此次比對工作充分評估了各級獸醫(yī)實驗室的檢測技術(shù)水平，也真實客觀地反映出一些存在的問題，達(dá)到了預(yù)期的比對效果和目的，為加強(qiáng)貴州省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力建設(shè)，提升各級獸醫(yī)實驗室動物疫情預(yù)警監(jiān)測能力和動物疫病檢測診斷水平提供了一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 待測盲樣口蹄疫病毒O/A亞型鑒別檢測、禽流感病毒H5/H7/H9亞型鑒別檢測設(shè)置待檢盲樣各54份，非洲豬瘟病毒核酸檢測設(shè)置待檢盲樣210份，禽流感病毒H7亞型抗體檢測、口蹄疫病毒O型抗體檢測、小反芻獸疫抗體檢測設(shè)置待檢盲樣各222份，均由貴州省動物疫病預(yù)防控制中心準(zhǔn)備。

1.2 主要試劑口蹄疫病毒O/A亞型鑒別檢測試劑盒、口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒、小反芻獸疫抗體檢測試劑盒，購自武漢科前生物股份有限公司；禽流感病毒H5/H7/H9亞型鑒別檢測試劑盒、禽流感病毒H7亞型抗體檢測試劑盒，購自哈爾濱國生生物科技股份有限公司；非洲豬瘟病毒核酸檢測試劑盒，購自青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心。

1.3 比對項目設(shè)計市(州)級獸醫(yī)實驗室共設(shè)置3個檢測比對項目，分別為口蹄疫病毒O/A亞型鑒別檢測、禽流感病毒H5/H7/H9亞型鑒別檢測、非洲豬瘟病毒核酸檢測?？h(市、區(qū))級獸醫(yī)實驗室共設(shè)置4個檢測比對項目，分別為禽流感病毒H7亞型抗體檢測、口蹄疫病毒O型抗體檢測、小反芻獸疫抗體檢測、非洲豬瘟病毒核酸檢測。所有比對項目均采用相應(yīng)的國家現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公布或推薦的檢測方法進(jìn)行比對，包括熒光RT-PCR、熒光PCR、HI、ELISA，具體方法見表1。各比對項目針對每個比對單位，分別設(shè)置檢測盲樣 6份并隨機(jī)分發(fā)，所有盲樣及檢測試劑均經(jīng)過統(tǒng)一制備、分裝、編號、測試及留存，統(tǒng)一發(fā)放并保證運輸條件和時間。

表1 2020年貴州省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對項目

1.4 比對結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)與分析口蹄疫病毒O/A亞型鑒別檢測、禽流感病毒H5/H7/H9亞型鑒別檢測、非洲豬瘟病毒核酸檢測、口蹄疫病毒O型抗體檢測、小反芻獸疫抗體檢測項目判定標(biāo)準(zhǔn)為：盲樣檢測值與參考值完全一致判為正確，否則判為錯誤，各參考值樣品數(shù)目不確定；在判定“陽性”及“陰性”的同時，填寫樣品對應(yīng)的“CT”值或“OD”值。禽流感病毒H7亞型抗體檢測項目判定標(biāo)準(zhǔn)為：檢測值與參考值的偏差不超過1個滴度，判為正確，否則判為錯誤。對各實驗室檢測結(jié)果正確率進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 全省獸醫(yī)實驗室檢測能力整體情況分析全省共計9個市(州)、37個縣(市、區(qū))獸醫(yī)實驗室參加此次檢測能力比對，其中8個市(州)級、26個縣(市、區(qū))級獸醫(yī)實驗室所有比對項目的檢測結(jié)果完全正確，市、縣級實驗室正確率分別為88.89%、70.27%。比對共計完成盲樣檢測984份，市(州)級、縣(市、區(qū))級樣品正確率分別為98.77%、96.59%，見表2。

表2 2020年貴州省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對整體情況統(tǒng)計

2.2 市級獸醫(yī)實驗室比對情況在參與檢測能力比對的9個市(州)級獸醫(yī)實驗室中，口蹄疫病毒O/A亞型鑒別檢測項目、禽流感病毒H5/H7/H9亞型鑒別檢測項目、非洲豬瘟病毒核酸檢測項目發(fā)放盲樣各54份，結(jié)果正確率分別為96.30%、100%、100%。其中1個實驗室在口蹄疫病毒O/A亞型鑒別檢測項目中有2份比對盲樣檢測值與參考值存在偏差(見表3)，分析原因可能為涉及檢測的關(guān)鍵儀器設(shè)備未及時進(jìn)行周期性的檢定校準(zhǔn)和維護(hù)保養(yǎng)，影響儀器設(shè)備運行的穩(wěn)定性和檢測結(jié)果的判定。

2.3 縣級獸醫(yī)實驗室比對情況(1)在參與檢測能力比對的37個縣(市、區(qū))級獸醫(yī)實驗室中，禽流感病毒H7亞型抗體檢測項目、口蹄疫病毒O型抗體檢測項目、小反芻獸疫抗體檢測項目發(fā)放盲樣各222份，非洲豬瘟病毒核酸檢測項目發(fā)放盲樣156份，結(jié)果正確率分別為89.64%、100%、100%、96.79%，能力比對獸醫(yī)實驗室正確率均大于85%(見表3)。(2)在禽流感病毒H7亞型抗體檢測項目中，4個實驗室有3份比對盲樣檢測值與參考值存在偏差，5個實驗室有2份比對盲樣檢測值與參考值存在偏差，1個實驗室有1份比對盲樣檢測值與參考值存在偏差。分析結(jié)果偏差的可能原因：一是1%紅細(xì)胞懸液配置不準(zhǔn)確，洗滌紅細(xì)胞及移取過程中未輕吸輕放，導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂造成紅細(xì)胞懸液濃度偏低；二是產(chǎn)生紅細(xì)胞“掛滴”現(xiàn)象，在滴加1%紅細(xì)胞懸液時有部分紅細(xì)胞掛在滴頭上未全部加入血凝孔中；三是禽流感病毒H7亞型抗體4單位抗原配置后未進(jìn)行抗原回溯，無法通過抗原回溯顯示抗原濃度過高或者過低，對實驗結(jié)果判定準(zhǔn)確性造成影響；四是未嚴(yán)格按照禽流感HA/HI現(xiàn)行檢測標(biāo)準(zhǔn)開展檢測，使用生理鹽水替代PBS緩沖液進(jìn)行倍比稀釋。(3)在非洲豬瘟病毒核酸檢測項目中，1個實驗室有4份比對盲樣檢測值與參考值存在偏差，1個實驗室有1份比對盲樣檢測值與參考值存在偏差。導(dǎo)致偏差的原因可能與實驗室生物安全柜臺面擦拭消毒不徹底，部分使用耗材未進(jìn)行高壓滅菌干燥，部分檢測人員操作不夠嚴(yán)謹(jǐn)熟練，檢測程序設(shè)置漏項、錯項等有關(guān)，造成檢測過程中出現(xiàn)交叉污染、結(jié)果判定差異性大等情況。

表3 2020年貴州省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對結(jié)果

3 討論

3.1獸醫(yī)實驗室作為動物疫病防控體系中的重要組成部分，對動物疫病的檢測診斷具有重要的支撐作用[4]。切實強(qiáng)化獸醫(yī)實驗室管理，不斷完善實驗室質(zhì)量管理體系和檢測能力建設(shè)，有助于提高獸醫(yī)實驗室的服務(wù)能力和技術(shù)水平。實驗室能力驗證是為確保實驗室維持較高的檢測水平而對其能力進(jìn)行考核、監(jiān)督和確認(rèn)的一種活動[5]。在獸醫(yī)實驗室能力驗證中，實驗室檢測能力比對作為當(dāng)前常用的驗證方法和體現(xiàn)實驗室綜合能力的重要技術(shù)手段，直觀地反映了獸醫(yī)實驗室的質(zhì)量管理和生物安全水平。定期開展獸醫(yī)實驗室檢測能力比對，評估各級獸醫(yī)實驗室檢測能力，對獸醫(yī)實驗室的建設(shè)、運行及管理可起到促進(jìn)和警示作用[6～8]。

3.2通過比對情況梳理，在全省參加的9個市(州)級獸醫(yī)實驗室中，有8個實驗室比對結(jié)果全部符合參考值，1個實驗室有1個比對項目存在偏差，實驗室正確率為88.89%；參加的37個縣(市、區(qū))級獸醫(yī)實驗室中，有26個實驗室比對結(jié)果全部符合參考值，1個實驗室有2個比對項目存在偏差，10個實驗室有1個比對項目存在偏差，實驗室正確率為70.27%。相關(guān)研究表明，實驗室檢測能力主要受人員、儀器設(shè)備工作狀態(tài)、環(huán)境條件等多方面因素影響[9，10]。結(jié)合此次檢測能力比對，分析各級獸醫(yī)實驗室檢測比對結(jié)果的符合情況及偏差情況，進(jìn)一步證實了上述觀點。首先是人員方面：檢測人員的專業(yè)技術(shù)水平和專業(yè)素質(zhì)對于檢測結(jié)果有重要影響。專業(yè)技術(shù)水平不足可能造成檢測操作不熟練，對現(xiàn)行的檢測標(biāo)準(zhǔn)及方法掌握不到位，增加檢測失誤概率。由于缺乏檢測經(jīng)驗，在預(yù)判檢測過程中可能突發(fā)的問題時也會處理、解決得不到位。其次是儀器設(shè)備工作狀態(tài)：正常工作狀態(tài)下運轉(zhuǎn)的儀器設(shè)備可保證檢測結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性，因此對實驗室的關(guān)鍵及常用儀器設(shè)備進(jìn)行周期性的檢定、校準(zhǔn)、期間核查及維護(hù)保養(yǎng)至關(guān)重要。如果未能認(rèn)真做好儀器設(shè)備的日常管理和工作記錄，及時追蹤儀器設(shè)備運行使用狀態(tài)，就可能會降低儀器設(shè)備的穩(wěn)定性，增加使用誤差，嚴(yán)重者甚至?xí)?dǎo)致功能障礙無法開展檢測。最后是環(huán)境條件：實驗室檢測對于實驗室的功能布局、環(huán)境溫濕度、壓力、通風(fēng)系統(tǒng)、照明等有嚴(yán)格要求，如果不能將這些關(guān)鍵因素控制在有效限定范圍內(nèi)，就會出現(xiàn)檢測失敗、檢測結(jié)果偏差較大、交叉污染等情況。

3.3根據(jù)梳理比對情況及分析偏差原因，各級獸醫(yī)實驗室應(yīng)將此次檢測能力比對工作作為抓手，強(qiáng)化監(jiān)管實驗室檢測工作流程，嚴(yán)格控制檢測質(zhì)量，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。結(jié)合日常工作有針對性地開展技術(shù)培訓(xùn)，強(qiáng)化實驗室人員的業(yè)務(wù)理論水平和專業(yè)操作技能，使各級獸醫(yī)實驗室作為我省動物疫病防控的有力支撐平臺。