杜仲、鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片制備及其質(zhì)量評價研究

天津市濱海新區(qū)中醫(yī)醫(yī)院（300450）劉海

杜仲作為一種名貴的滋補中藥材，味甘性溫，具有補肝腎、養(yǎng)胎、強筋骨等功效，中醫(yī)上常將其用于治療肝腎虛匱、腰膝酸軟等病癥[1][2][3]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)杜仲含有黃酮類、木質(zhì)素類、多糖類等多種活性成分，具有加速細(xì)胞代謝、分解膽固醇、利尿清熱、廣譜抗菌、平衡血壓等作用。杜仲炮制品種類較多，其中尤以鹽杜仲應(yīng)用最多[4][5]。杜仲經(jīng)過鹽炙，可以促進其有效成分溶出，有助于強化藥效，《中國藥典》2015版將鹽杜仲正式收錄[6][7]。由于中藥炮制機制復(fù)雜，直接造成了中藥飲片與原藥材的差異，因此，建立科學(xué)合理的中藥飲片炮制標(biāo)準(zhǔn)并進行質(zhì)量評價，在臨床上具有重要的實際價值。

1 杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片的標(biāo)準(zhǔn)化研究

收集市面上優(yōu)質(zhì)杜仲藥材并委托某中藥飲片責(zé)任有限公司根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)炮制流程制備杜仲原形飲片、鹽杜仲原形飲片各3批，并選取市場上廣泛流通的兩家主流中藥飲片公司制備的不同批次的杜仲、鹽杜仲飲片作為參考對象。依次選取普通粉碎、超微粉碎下的杜仲以及鹽杜仲飲片粉末各100克，篩分法計算粉末粒徑分布，結(jié)果顯示，與超微粉碎方式相比，普通粉碎方式下杜仲和鹽杜仲粉末粒徑分布不集中。選取超微粉碎方式下杜仲、鹽杜仲飲片粉末樣品適量，以近紅外光譜、外觀顏色、松脂醇二葡萄糖苷含量等方法對粉末均勻性進行研究。以光譜的整體偏差值（S）、粉末總色值（Eab）、松脂醇二葡萄糖苷含量的相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）作為評價參數(shù)。當(dāng)超微粉碎時間不超過30分鐘時，杜仲樣品粉末S值、Eab值以及RSD值均隨粉碎時間的增加而減少，即粉末粒徑越小，流動性更好；當(dāng)超微粉碎時間控制在45～60分鐘范圍內(nèi)時，樣品粉末S值、Eab值以及RSD值均有所增大。超微粉碎時間為15、30、45分鐘時，鹽杜仲樣品粉末的Eab值較??；超微粉碎時間為30、45分鐘時，鹽杜仲樣品粉末的RSD值較??；超微粉碎時間為30分鐘時，鹽杜仲樣品粉末的S值較小。即超微粉碎30分鐘是杜仲和鹽杜仲的最佳粉碎工藝。

2 標(biāo)準(zhǔn)飲片質(zhì)量保準(zhǔn)的建立及樣品質(zhì)量分析

下文主要對委托加工的杜仲鹽杜仲樣品、對照品以及均勻化工藝得到的飲片的性狀、水分、灰分、浸出物等指標(biāo)進行質(zhì)量分析研究。杜仲以及鹽杜仲飲片的性狀特征如下：前者多為絲、塊狀，外呈灰褐色，可見皺紋、凹槽，內(nèi)表面呈暗紫色，斷面可見細(xì)密橡膠絲，味稍苦；后者形同前者，味微咸，鹽杜仲飲片折斷時膠絲彈性差。以膠絲、石細(xì)胞、木栓細(xì)胞為觀察對象進行顯微鏡觀察結(jié)果顯示，不同批次的杜仲、鹽杜仲飲片顯微特征無明顯差異。薄層色譜鑒定結(jié)果顯示，研究所選取的杜仲和鹽杜仲飲片（原形飲片、市售飲片、均勻化所得飲片）色譜在相同的位置上顯示有相同顏色的斑點。對杜仲和鹽杜仲飲片的水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物、松脂醇二葡萄糖苷含量進行測定，結(jié)果顯示杜仲及鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片的水分含量、總灰分、酸不溶灰分最大閾值依次為13.0%、10.0%和4.0%，杜仲及鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片的浸出物含量、松脂醇二葡萄糖苷含量的最小閾值依次為11.0%、0.10%。根據(jù)該閾值范圍并結(jié)合薄層鑒別結(jié)果，可以為杜仲和鹽杜仲飲片質(zhì)量評價提供依據(jù)。

3 標(biāo)準(zhǔn)飲片HPLC特征圖譜分析

①特征圖譜方法研究。選用50%濃度的甲醇作為提取溶劑，選用Agilent Zorbax C18（150毫米×4.6毫米，5微米）色譜柱對實驗溶液進行分離，檢測波長為230納米，流動相系統(tǒng)為乙腈－0.1%磷酸水溶液系統(tǒng)，柱溫條件為30攝氏度。供試品溶液穩(wěn)定性考察、精密性考察顯示供試品溶液在24小時內(nèi)是穩(wěn)定的并且儀器精密度良好。②杜仲、鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片特征圖譜的建立。取杜仲、鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片適量，在上述色譜條件下采集杜仲及鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片的HPLC譜，通過中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件分析得到杜仲及鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片的HPLC特征圖譜，該圖譜共標(biāo)定27個共有峰，其中4號、7號、11號、12號峰分別對應(yīng)京尼平苷酸、綠原酸、京尼平、松脂醇二葡萄糖苷等成分。③杜仲原藥材、杜仲和鹽杜仲原形飲片以及均勻化飲片HPLC圖譜對比研究。在相同的色譜條件下采集HPLC圖譜，結(jié)果顯示，杜仲、鹽杜仲原形飲片與均勻化飲片之間的HPLC圖譜差異較小，即超微粉碎等工藝不會影響藥材的化學(xué)性質(zhì)，可以全面的展示飲片的化學(xué)信息。與杜仲原藥材HPLC圖譜相比，原形飲片和均勻化飲片的4、6、9、10等峰面積明顯偏高，且原藥材的2號峰消失，新增了33號峰。該對比研究顯示杜仲經(jīng)過炮制以后化學(xué)成分發(fā)生了變化，這種變化不僅僅體現(xiàn)在化學(xué)成分的含量上，也體現(xiàn)在化學(xué)成分的種類上。④杜仲、鹽杜仲市售飲片與標(biāo)準(zhǔn)飲片HPLC圖譜的一致性評價。采集HPLC圖譜，并將圖譜信息與標(biāo)準(zhǔn)飲片的圖譜進行對比，結(jié)果顯示，市售杜仲飲片與標(biāo)準(zhǔn)飲片峰數(shù)量、峰面積差異較小，即杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片具有代表性和適用性。市售鹽杜仲飲片與標(biāo)準(zhǔn)飲片總體匹配程度較好，但其中一批次市售飲片與標(biāo)準(zhǔn)飲片相對峰數(shù)量減少3個，分析認(rèn)為與不同廠家、不同批次鹽杜仲的炮制火候等因素有關(guān)。⑤杜仲炮制過程中化學(xué)成分的變化規(guī)律。下文重點分析炮制時間對于鹽杜仲性狀和有效成分的影響。取杜仲、鹽杜仲原形飲片適量，依次等分為三份，在200攝氏度下分別炒制3、7、10分鐘，得到三批不同的鹽杜仲樣品，其性狀及松脂醇二葡萄糖苷含量見附表。

附表 不同炮制程度鹽杜仲樣品的性狀特征及松脂醇二葡萄糖苷含量

4 穩(wěn)定性分析

經(jīng)過強光照射后，杜仲及鹽杜仲性狀、總灰分、浸出物等成分無明顯變化，但水分、松脂醇二葡萄糖苷等含量稍有下降，強光實驗表明杜仲及鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片需要避光保存。經(jīng)高溫實驗后，杜仲及鹽杜仲水分明顯減少、松脂醇二葡萄糖苷含量略有降低，其余成分變化較小，高溫實驗表明杜仲及鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片需要常溫保存。經(jīng)高濕實驗后，杜仲及鹽杜仲吸濕增重超過5%，浸出物及松脂醇二葡萄糖苷含量稍有降低，其余成分變化較小，高濕實驗表明杜仲及鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片需要置于干燥處保存。上述高溫、高濕、強光影響因素試驗結(jié)果表明，杜仲和鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片需要置于陰涼干燥處保存。受試驗時間等因素的限制，仍需要開展長期試驗對杜仲和鹽杜仲飲片的穩(wěn)定性進行研究。

5 討論

本文開展了杜仲及鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)飲片制備及其質(zhì)量評價研究，包括杜仲及鹽杜仲保準(zhǔn)飲片均勻化工藝、標(biāo)準(zhǔn)飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及市售飲片質(zhì)量分析、標(biāo)準(zhǔn)飲片HPLC特征圖譜研究以及穩(wěn)定性研究等。受試驗時間等因素的限制，仍需要開展長期試驗對杜仲、鹽杜仲飲片的穩(wěn)定性進行研究。此外，實驗研究發(fā)現(xiàn)杜仲蘊含的化學(xué)成分隨著炮制時間的增加呈動態(tài)變化的趨勢，為了提升飲片質(zhì)量評價的精度，亟待制定科學(xué)合理、參數(shù)明確的炮制規(guī)范。