蓬子菜總黃酮片劑的制備及質(zhì)量初步評(píng)價(jià)

孫志偉，張文君

(哈爾濱商業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱 150076)

蓬子菜(GaliumverumL.)為茜草科拉拉藤屬植物，其主要有效成分為總黃酮類化合物[1-2]，具有抗炎、抗腫瘤、抗血栓、抑菌和抗氧化等藥理作用[3-9].片劑是常見(jiàn)的固體劑型，具有劑量準(zhǔn)確，質(zhì)量穩(wěn)定，生物利用度良好，便于攜帶等優(yōu)點(diǎn)[10-15].本實(shí)驗(yàn)以蓬子菜總黃酮為研究對(duì)象，以片劑外觀、崩解度、硬度、片重差異為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化蓬子菜總黃酮片劑的制備工藝.

1 儀器與材料

UV-240紫外分光光度計(jì)(756 PC上海)；78X-2型片劑四用測(cè)定儀(承德金和儀器有限公司)；DHG-9140A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(濟(jì)南來(lái)寶醫(yī)療機(jī)械有限公司)；KQ5200超聲清洗儀(上海比郎儀器制備有限公司)；PTHW調(diào)溫控溫電熱套(上海一科儀器有限公司)；HH-WO水油浴鍋(上海夏豐事業(yè)有限公司)；TDP單沖壓片機(jī)(青州市精誠(chéng)醫(yī)藥裝備制造有限公司).

蓬子菜采于尚志市帽兒山，由哈爾濱商業(yè)大學(xué)張德連鑒定為茜草科拉拉藤屬植物蓬子菜(GaliumverunL.)；微晶纖維素(山東心萊娜化工有限公司)；乳糖(北京萬(wàn)佳首化生物科技有限公司)；淀粉(山東譽(yù)恒纖維有限公司)；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉(濟(jì)南元通化工有限公司)；硬脂酸鎂(廣州正浩新材料科技有限公司).

2 方法與結(jié)果

2.1 蓬子菜總黃酮有效部位的制備

將蓬子菜全草剪小段，90%乙醇回流提取2次，每次1 h，醇提液濃縮得蓬子菜浸膏，浸膏用20%乙醇稀釋后，通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱，依次用20%乙醇、60%乙醇、95%乙醇洗脫，將60%乙醇洗脫液減壓濃縮，得蓬子菜體積分?jǐn)?shù)60%乙醇有效部位，保存在干燥器中備用.

2.2 輔料的選擇

2.2.1 填充劑的選擇

按照2020版中國(guó)藥典規(guī)定，分別測(cè)定微晶纖維素、乳糖、淀粉的休止角、松密度、振實(shí)密度、壓縮度對(duì)填充劑進(jìn)行篩選，確定用不同配比的微晶纖維素和乳糖作為填充劑，進(jìn)一步考察二者的最優(yōu)比例，以片劑的外觀、硬度、崩解時(shí)間和片重差異為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果顯示微晶纖維素、乳糖為1∶1比例時(shí)硬度與崩解度適宜，片重差異相對(duì)較小，結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 填充劑的選擇試驗(yàn)結(jié)果(n=6)Table 1 Test filler selection (n=6)

2.2.2 黏合劑的選擇

對(duì)水和乙醇的性質(zhì)比較確定黏合劑.水在物料中非常容易被吸收，單獨(dú)使用可能引起物料凝結(jié)成塊，不易壓片，制得的片劑易有麻點(diǎn).乙醇多用于黏性較強(qiáng)的藥物，加熱干燥時(shí)易引起變質(zhì)的藥物，或在水中溶解度大而制粒困難的藥物，以及干燥后硬度過(guò)大壓片時(shí)易產(chǎn)生花斑以及崩解時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的藥物.因此本實(shí)驗(yàn)選擇乙醇作為黏合劑，選擇體積分?jǐn)?shù)分別為50.0%，70.0%和90.0%.

2.2.3 崩解劑的選擇

對(duì)干燥淀粉與交聯(lián)羧甲基纖維素鈉特點(diǎn)比較進(jìn)行篩選.干燥淀粉是一種親水性物質(zhì)，用作崩解劑可使片劑的孔隙率提高從而改變片劑的滲水性.通常適用于不溶性或微溶性藥物，但用量過(guò)多會(huì)使顆粒的流動(dòng)性降低并且影響片劑的硬度.交聯(lián)羧甲基纖維素鈉為無(wú)臭無(wú)味白色細(xì)顆粒狀粉末，吸水性強(qiáng)，能形成混懸液，同時(shí)具有較強(qiáng)的可壓性和崩解性，故崩解劑選擇交聯(lián)羧甲基纖維素鈉.

2.2.4 潤(rùn)滑劑的選擇

對(duì)滑石粉與硬脂酸鎂性質(zhì)比較確定潤(rùn)滑劑.滑石粉會(huì)刺激腸胃，顆粒細(xì)，比重大，并且附著力較差，一般與其他潤(rùn)滑劑同時(shí)使用.硬脂酸鎂為優(yōu)質(zhì)潤(rùn)滑劑，能有效降低粗糙性與摩擦力，使表面有不平處的輔料顆粒變光滑，降低輔料顆粒的粗糙性，還能降低沖模與沖頭之間的摩擦力.根據(jù)滑石粉和硬脂酸鎂的性質(zhì)比較，本處方的潤(rùn)滑劑選擇硬脂酸鎂，加入硬脂酸鎂的量為處方量的0.3%.

2.3 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化處方

采用正交實(shí)驗(yàn)的方法，選取3個(gè)因素(崩解劑占片重比、黏合劑乙醇體積分?jǐn)?shù)、崩解劑加入方法)，每個(gè)因素取3個(gè)水平，見(jiàn)表2，對(duì)影響片劑成型工藝的因素進(jìn)行系統(tǒng)性考察.選用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行試驗(yàn).每組以0.5 g蓬子菜總浸膏干粉(80目)為基礎(chǔ)，依照各組處方工藝加入相應(yīng)輔料，混合，濕法制顆粒，于60 ℃烘箱干燥1 h，取出后將顆粒過(guò)14目篩，整粒，加0.3%潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂，混合均勻后進(jìn)行壓片.以片劑的外觀、崩解度、硬度、重量差異為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用綜合評(píng)分法，對(duì)依據(jù)設(shè)計(jì)處方制備的片劑的成型質(zhì)量進(jìn)行綜合性評(píng)價(jià).片劑外觀觀察其完整性、色澤、光潔性、色麻斑畸形程度現(xiàn)象，外觀分?jǐn)?shù)為4分表現(xiàn)為完整光潔、顏色均勻、無(wú)色麻斑畸形；外觀完整光潔、顏色均勻，3分表現(xiàn)為偶見(jiàn)有色麻斑畸形；外觀分?jǐn)?shù)為2分表現(xiàn)為完整光潔、顏色均勻，見(jiàn)有色麻斑畸形；1分表現(xiàn)為外觀完整光潔、顏色不均勻；0分表現(xiàn)為外觀不光潔不完整.片劑硬度(N)的分?jǐn)?shù)采用原數(shù)值.崩解時(shí)限(min)分?jǐn)?shù)為原數(shù)值倒數(shù)的100倍.質(zhì)量差異的分?jǐn)?shù)為片重變異系數(shù)(%)百分?jǐn)?shù)倒數(shù)的10倍.設(shè)計(jì)因素水平，按L9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，所選因素、水平見(jiàn)表2.

表2 正交試驗(yàn)因素水平表Table 2 Factors and levels of orthogonal experiment

進(jìn)行綜合評(píng)分時(shí)則以各指標(biāo)最大值為參照數(shù)值，將數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化統(tǒng)計(jì)，再給出不同權(quán)重系數(shù).外觀和重量差異權(quán)重系數(shù)設(shè)為0.2，片劑硬度和崩解度的權(quán)重系數(shù)設(shè)為0.3.其中綜合評(píng)分計(jì)算公式為Y=0.2×100/4×X1+ 0.3×100/14 ×X2+0.3×100/6.3×X3+ 0.2×100/1.89×X4.評(píng)分結(jié)果愈高則代表成型性愈好.根據(jù)評(píng)分結(jié)果高低綜合篩選出最優(yōu)處方，并進(jìn)行驗(yàn)證.

蓬子菜總黃酮片劑最優(yōu)處方為A2B2C3，即崩解劑占片重比為7%，采用內(nèi)外加法，黏合劑為70%乙醇，綜合評(píng)分為89.29，見(jiàn)表3、4.

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 3 Experimental result of orthogonal analysis

表4 方差分析結(jié)果Table 4 Results of variance analysis

2.4 最優(yōu)處方驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

按照最優(yōu)處方A2B2C3進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果工藝穩(wěn)定，結(jié)果見(jiàn)表5.

表5 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Table 5 Results of verification test

2.5 片劑總黃酮的測(cè)定

2.5.1 對(duì)照品溶液的制備

稱取蘆丁對(duì)照品0.1 g，精密稱量，置50 mL錐形瓶中，加適量60%乙醇超聲溶解，靜置后，置100 mL容量瓶，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻即得.

2.5.2 供試品溶液的制備

取蓬子菜有效部位片劑20片，精密稱定，研細(xì)，取2 g，置50 mL錐形瓶，稱重，超聲提取30 min，用60%的乙醇補(bǔ)足，搖勻，備用.

2.5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取蘆丁對(duì)照品溶液1、2、3、4、5 mL分別置25 mL容量瓶中，各加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，使混勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液10 mL，再加60%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min.根據(jù)紫外-可見(jiàn)分光光度法在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度A為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度C(mg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為A=2.242 5C+0.210 5，R2=0.999 1，該方法在0.04～0.20 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.

2.5.4 方法學(xué)考察

精密度試驗(yàn)量：取對(duì)照品溶液適量，置25 mL容量瓶中，定容，搖勻，測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定5次，計(jì)算RSD為0.17%.穩(wěn)定性考察：準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)品試液10 mL置于試管中，于510 nm下測(cè)量吸光度，每隔30 min測(cè)量一次，計(jì)算吸光度RSD為0.29%.重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批蓬子菜有效部位片劑粉末，溶解，精密量取上清液1 mL，置25 mL容量瓶中，蒸餾水定容，分別量取0.5 mL置50 mL容量瓶中，定容，測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD為0.24%.加樣回收試驗(yàn)：精密稱取五份已知含量的樣品置10 mL容量瓶中，60%乙醇定容，分別量取0.2 mL置50 mL容量瓶中，向每個(gè)容量瓶中加10 mL質(zhì)量濃度為99.4 μg/mL的對(duì)照品溶液，定容，搖勻，按上述方法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率為97.28%～103.76%，RSD=0.29%.

2.5.5 樣品測(cè)定

取三批片劑根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定含總黃酮的量，結(jié)果見(jiàn)表6，結(jié)果表明片劑均勻穩(wěn)定，含總黃酮量無(wú)顯著性差異.

表6 樣品測(cè)定結(jié)果(n=6)Table 6 Results of content determination (n=6)

2.6 片劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.6.1 外觀檢查

隨機(jī)選取20片平鋪于白紙板上，置于光源下60 cm處，在距離片劑30 cm左右處以肉眼觀察，檢查片劑表面是否色澤均勻，完整光潔，是否無(wú)雜斑，無(wú)異物.蓬子菜總黃酮片為棕色圓形片劑，形狀完整，表面光滑潔凈，色澤較均勻.

2.6.2 質(zhì)量差異測(cè)定

隨機(jī)選取20片稱取總重，計(jì)算樣品的平均片重，并準(zhǔn)確稱量各片的質(zhì)量，計(jì)算每片蓬子菜有效部位片劑的片重與平均片重差異的百分率，結(jié)果見(jiàn)表7.

2.6.3 硬度檢查的測(cè)定

隨機(jī)選取6片用硬度儀測(cè)定片劑的硬度，結(jié)果見(jiàn)表7.

2.6.4 脆碎度的測(cè)定

隨機(jī)選取20片四用測(cè)定儀中脆碎度檔振搖 5 min取出后，除去粉末，對(duì)除去粉末的的片劑進(jìn)行精密稱重.檢查裂片、碎片情況，并計(jì)算減輕質(zhì)量，進(jìn)行記錄，結(jié)果見(jiàn)表7.

2.6.5 蓬子菜有效部位片劑崩解時(shí)限檢查

隨機(jī)選取6片，按2020年版《中國(guó)藥典》籃法測(cè)定蓬子菜總黃酮片劑的崩解時(shí)限，結(jié)果見(jiàn)表7.

表7 崩解時(shí)限測(cè)定結(jié)果Table 7 Results of disintegration

2.7 加速實(shí)驗(yàn)

將蓬子菜片劑供試品3批，每批選取6片，采用塑封銷膜包裝，用電熱恒濕恒溫培養(yǎng)箱控制在溫度(40±2)℃，濕度(75±5)%的條件下放置6個(gè)月后，分別對(duì)蓬子菜有效部位片劑的質(zhì)量差異、崩解時(shí)限以及含總黃酮量進(jìn)行檢查.結(jié)果如表8所示，6個(gè)月后崩解時(shí)限略有延長(zhǎng)，片重差異和含總黃酮量均無(wú)明顯變化，結(jié)果表明蓬子菜總黃酮片劑較為穩(wěn)定.

表8 加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)Table 8 Results of short-time test (n=6)

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)法，考察片劑的各項(xiàng)指標(biāo)，最優(yōu)處方為A2B2C3.即蓬子菜有效部位0.5 g，微晶纖維素5 g，乳糖5 g，采用內(nèi)外加法加入交聯(lián)羧甲基纖維素鈉0.8 g，硬脂酸鎂0.1 g，黏合劑為70%乙醇.優(yōu)選的蓬子菜總黃酮片劑制備工藝得到的片劑完整光潔，顏色均勻，硬度、質(zhì)量差異、崩解時(shí)限和含總黃酮量各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定.此工藝操作簡(jiǎn)單易行，片劑質(zhì)量可控，適合車間放大試驗(yàn)和工業(yè)連續(xù)生產(chǎn).

90%乙醇的提取能力較強(qiáng)，蓬子菜經(jīng)兩次回流提取后，所得浸膏含大量葉綠素，浸膏較為黏稠，不利于制備片劑，本研究將蓬子菜乙醇浸膏經(jīng)AB-8型大孔樹(shù)脂進(jìn)一步純化，去除了大量雜質(zhì)，所得有效部位為棕色粉末，流動(dòng)性和可壓性均較好.蓬子菜有效部位經(jīng)紫外分光光度法測(cè)定，含總黃酮量高達(dá)57%，達(dá)到了五類新藥的標(biāo)準(zhǔn).

本研究通過(guò)加速試驗(yàn)，初步考察了蓬子菜總黃酮片劑的穩(wěn)定性. 加速6個(gè)月后， 片劑的崩解時(shí)限略有延長(zhǎng)， 這可能是由于蓬子菜總黃酮有效部位在高溫、高濕條件下造成藥物與輔料部分凝結(jié)所致.片重差異和含總黃酮量均無(wú)明顯變化，表明蓬子菜總黃酮片劑在高溫、高濕的惡劣環(huán)境下較為穩(wěn)定.