• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    蠟樣芽孢桿菌致吐毒素的毒性作用與生物合成研究進(jìn)展

    2021-08-12 06:17:32崔一芳鄭敏丁雙陽朱奎
    關(guān)鍵詞:蠟樣基因簇芽孢

    崔一芳,鄭敏,丁雙陽,朱奎?

    1北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/畜禽疫病防控技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100097;2中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院/國(guó)家獸藥安全評(píng)價(jià)中心,北京 100193

    蠟樣芽孢桿菌是一種在自然環(huán)境中廣泛分布,可產(chǎn)生芽孢的革蘭氏陽性桿菌。致病性蠟樣芽孢桿菌可產(chǎn)生多種毒素,是引起食物中毒的常見食源性條件致病菌之一[1]。致吐毒素cereulide是蠟樣芽孢桿菌分泌的主要毒素之一,能夠引發(fā)以惡心和嘔吐為主要臨床癥狀的食物中毒,嚴(yán)重的可導(dǎo)致急性肝臟衰竭、肝性腦病,并致死[2-4]。由cereulide引起的食物中毒癥狀因與金黃色葡萄球菌腸毒素導(dǎo)致的臨床癥狀相似,且癥狀輕微、病程較短,因而被低估和忽視[5]。實(shí)際上,美國(guó)報(bào)告了 1998—2008年,由蠟樣芽孢桿菌引發(fā)了235起食源性疾病[6]。法國(guó)統(tǒng)計(jì)了2007—2014年發(fā)生的140起食源性疾病,其中74起與蠟樣芽孢桿菌相關(guān),是僅次于金黃色葡萄球菌的第二大常見食源性病原菌,并且產(chǎn)生 cereulide的蠟樣芽孢桿菌檢出率為16%[7]。同樣德國(guó)2007—2013年食源性疾病的調(diào)查結(jié)果顯示,產(chǎn)cereulide的蠟樣芽孢桿菌引起的食物中毒風(fēng)險(xiǎn)被低估[8]。目前對(duì)于cereulide的毒性作用機(jī)制研究局限于其刺激傳入迷走神經(jīng)引起嘔吐癥狀,以及作為鉀離子載體,誘導(dǎo)線粒體膜電位喪失,并最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡[9],而對(duì)于其導(dǎo)致的嚴(yán)重肝臟和腦部病變的毒性作用機(jī)制研究仍十分不足。

    另一方面,cereulide是由非核糖體肽合成酶(nonribosomal peptide-synthetase, NRPS)系統(tǒng)控制合成的一種親脂性小分子十二環(huán)肽,結(jié)構(gòu)性質(zhì)十分穩(wěn)定,并受基因及多種調(diào)節(jié)因子控制[1]。當(dāng)前對(duì)于cereulide導(dǎo)致的食物中毒癥狀并沒有良好的預(yù)防和治療方法[10-11],一般采用添加防腐劑抑制蠟樣芽孢桿菌生長(zhǎng)的方法保障食品安全,但cereulide可在菌株被抑制前合成,并且一旦產(chǎn)生就難以被消除[12],因此缺乏針對(duì)cereulide的有效防控策略。此外,目前對(duì)于cereulide的生物合成過程,如合成基因簇各結(jié)構(gòu)域功能和調(diào)節(jié)因子的具體作用均不夠明確。

    值得注意的是,部分蠟樣芽孢桿菌作為益生菌被廣泛應(yīng)用于人類醫(yī)療保健、畜牧業(yè)、農(nóng)業(yè)和水產(chǎn)環(huán)境等多個(gè)領(lǐng)域[13]。例如,美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(Food and Drug Administration, FDA)和飼料工業(yè)協(xié)會(huì)(American Feed Industry Association, AFIA)在1989年就批準(zhǔn)了蠟樣芽孢桿菌可作為直接應(yīng)用于畜牧生產(chǎn)的菌種之一[14]。我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部 1996年也正式批準(zhǔn)蠟樣芽孢桿菌可作為飼料級(jí)微生物添加劑的菌種之一[15]。盡管目前益生菌的總體使用記錄顯示出較令人滿意的安全性結(jié)果,但相對(duì)于其應(yīng)用的廣泛度來說,益生菌的安全性并未受到充分鑒定[16]。例如,本團(tuán)隊(duì)前期對(duì)益生芽孢桿菌的毒性和耐藥性進(jìn)行了系統(tǒng)評(píng)估,發(fā)現(xiàn)菌株可產(chǎn)生多種毒素,其中便包括 cereulide[17-18]。此外,詳細(xì)綜述了蠟樣芽孢桿菌可能產(chǎn)生的多種毒素,包括毒素特征、毒性作用、合成機(jī)制及檢測(cè)方法,評(píng)估其對(duì)蠟樣芽孢桿菌作為益生菌使用的潛在危害[19]。

    本綜述旨在針對(duì)蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)生的主要毒素cereulide,整理其毒性作用機(jī)制研究進(jìn)展,為進(jìn)一步研發(fā)cereulide防控措施提供科學(xué)依據(jù);總結(jié)并提出其生物合成機(jī)理,對(duì)其關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域在合成過程中的功能進(jìn)行了補(bǔ)充,為闡明類似結(jié)構(gòu)的非核糖體肽合成提供新的思路。

    1 Cereulide的毒性特征

    Cereulide是一種由兩個(gè)羥基酸和兩個(gè)氨基酸殘基[-D-HIC-D-Ala-L-HIV-L-Val-]經(jīng) 3次重復(fù)組成的三聚體環(huán)狀縮酚酞,分子量約為1 152 Da[20-21]。cereulide的環(huán)狀結(jié)構(gòu)外部為脂溶性,能夠與細(xì)胞膜結(jié)合;內(nèi)部為親水性,中間存在容納鉀離子的腔隙,可進(jìn)行鉀離子的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)[9]。cereulide是目前已知最強(qiáng)的鉀離子螯合劑,對(duì)動(dòng)物和人體細(xì)胞具有普遍的毒性作用[22]。此外,cereulide性質(zhì)十分穩(wěn)定,能夠耐高溫、耐酸堿,對(duì)各種蛋白酶水解作用都有一定的抵抗力,經(jīng)過食品加工或者胃腸道消化仍可保持活性[23-24]。例如,cereulide在121℃處理2 h后仍可保持生物活性,并對(duì)pH 2.0至 pH 11.0的環(huán)境耐受[25]。研究表明,滅活cereulide不僅需要高溫處理,還依賴于pH條件,如在pH 9.5的條件下,滅活6 μg·mL-1cereulide需在121℃暴露80min或在150℃暴露60 min[26]。

    目前統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),環(huán)境中僅有1%—2%的蠟樣芽孢桿菌菌株會(huì)產(chǎn)生cereulide[27],但在食品和臨床樣本中產(chǎn)cereulide菌株的流行率卻高達(dá)32.8%[8]。產(chǎn)cereulide的菌株通常存在于淀粉類食物如米飯和面食中,在蔬菜、水果、奶酪和肉類產(chǎn)品中也可分離到。此外,在植物根部、種子和昆蟲的腸道也發(fā)現(xiàn)了產(chǎn)cereulide菌株[28]。因此,產(chǎn) cereulide菌株的廣泛流行,加之cereulide的穩(wěn)定性質(zhì)都對(duì)食品安全構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。

    Cereulide通常引起惡心和嘔吐的臨床癥狀,癥狀一般在攝入cereulide污染的食物后0.5—6 h內(nèi)出現(xiàn),持續(xù)24 h后可自愈[19,29]。目前研究認(rèn)為,cereulide通過與胃腸道內(nèi)分布的5-HT3受體結(jié)合,刺激迷走神經(jīng)進(jìn)而引發(fā)嘔吐癥狀(圖 1-A)[30]。10 μg·kg-1的 cereulide即可誘導(dǎo)恒河猴出現(xiàn)嘔吐癥狀[31],而人的誘導(dǎo)劑量目前尚不清楚。一般來說,cereulide常以中低濃度水平暴露于食物中,有研究發(fā)現(xiàn)在餐館隨機(jī)收集的米飯樣本中,cereulide的檢出率為7.4%,平均濃度為4 ng·g-1[32]。但也有食物中低劑量cereulide(0.01—1.28 ng·g-1)導(dǎo)致食物中毒事件的報(bào)道,即體重70 kg的成年人攝入100 g此類食物便會(huì)出現(xiàn)嘔吐癥狀[33]。因此,低劑量的cereulide雖然不會(huì)立即引起嘔吐反應(yīng),但由于容易被忽視導(dǎo)致消費(fèi)者或反復(fù)暴露于亞致吐劑量,長(zhǎng)期可能會(huì)對(duì)健康產(chǎn)生影響。

    Cereulide還可導(dǎo)致人的急性肝功能衰竭、心臟衰竭和腦部水腫等癥狀,嚴(yán)重的可致人死亡[4],但目前這些毒性作用機(jī)制都尚未研究清楚。當(dāng)前對(duì)于cereulide的毒性作用機(jī)制研究多集中于細(xì)胞毒性作用,如研究表明cereulide對(duì)多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞具有損傷作用[34]。cereulide可以使人喉癌細(xì)胞HEp2和人肝癌細(xì)胞 HepG2細(xì)胞空泡化和線粒體損傷[35-36];cereulide可導(dǎo)致人結(jié)腸腺癌細(xì)胞CaCo2、人肺腺癌細(xì)胞 Calu3、宮頸癌細(xì)胞 HeLa以及成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞Paju的損傷[37];還能抑制NK細(xì)胞,降低免疫力[35];低濃度的cereulide會(huì)誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞凋亡,這與糖尿病的發(fā)生密不可分[34,38]。最近,研究報(bào)道了cereulide對(duì) Caco2和HepG2細(xì)胞中線粒體的影響,特別是在HepG2細(xì)胞系中,低劑量的cereulide可以完全抑制線粒體的呼吸作用(圖1-B)[36,39]。

    此外,本團(tuán)隊(duì)前期研究分析了cereulide在兔體內(nèi)的毒代動(dòng)力學(xué)規(guī)律,cereulide在體內(nèi)的消除半衰期為(10.8±9.1)h[40],消除半衰期短解釋了cereulide引起短暫的嘔吐癥狀并一般為自限性的臨床特征,但其毒性的分子作用機(jī)制仍需進(jìn)一步探索。

    2 Cereulide的生物合成特征

    NRPS合成系統(tǒng)是一種大型的模塊化多酶復(fù)合物,參與多種天然產(chǎn)物的生物合成,如抗生素、表面活性劑和毒素[41]。其生物合成途徑可分為3類:線性(圖2-A),迭代型(圖2-B)和非線性(圖2-C)[42],其中模塊數(shù)量和順序與產(chǎn)物肽中氨基酸的數(shù)量和順序相匹配,并且各個(gè)模塊通過催化反應(yīng)與保守結(jié)構(gòu)域協(xié)同作用,以定向方式將單體結(jié)合到天然產(chǎn)物肽中,從而確定最終產(chǎn)物的化學(xué)特性。其中腺苷酸化(adenylation, A)結(jié)構(gòu)域,肽基載體蛋白(peptide carrier protein, PCP)或硫醇化(thiolation, T)結(jié)構(gòu)域、縮合(Ccondensation, C)結(jié)構(gòu)域以及硫酯酶(thioesterase, TE)結(jié)構(gòu)域是NRPS合成的基本功能單元。合成過程一般為:首先,A域通過腺苷酸化作用特異性識(shí)別底物并激活合成前體;其次,PCP域負(fù)責(zé)攜帶不斷增長(zhǎng)的天然產(chǎn)物鏈在每個(gè)模塊間穿梭,以此不斷催化肽鏈延伸;C域一般位于模塊末端,通過形成酰胺鍵或酯鍵催化鏈增長(zhǎng);最后,一旦非核糖體肽的合成完成,成熟的肽鏈將被轉(zhuǎn)移到NRPS末端的TE域,通過水解釋放線性肽,或通過分子內(nèi)親核攻擊形成環(huán)狀肽[43]。

    Cereulide是NRPS迭代型合成途徑的典型產(chǎn)物,由ces基因簇(cereulide synthetase gene cluster)控制合成[44]。ces基因簇位于大小約270 kb的質(zhì)粒上,該質(zhì)粒與炭疽芽孢桿菌的毒力質(zhì)粒 pXO1具有高度相似性[45]。ces基因簇包括cesH、cesP、cesT、cesA、cesB、cesC和cesD等7個(gè)主要編碼區(qū)。cesA和cesB是典型的NRPS系列基因,負(fù)責(zé)cereulide肽鏈結(jié)構(gòu)的組裝;cesP是4'-磷酸泛酰巰基乙胺基轉(zhuǎn)移酶基因,對(duì)于激活cereulide合成系統(tǒng)至關(guān)重要;cesT推測(cè)為II型硫酯酶基因,可以去除引發(fā)錯(cuò)誤的單體;此外,cesH位于5'末端,推定為編碼水解酶的基因;cesC/D位于3'端,推測(cè)為編碼ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因(圖3-B)[46-47]。

    ces基因簇的轉(zhuǎn)錄是在細(xì)菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)晚期開始,并在轉(zhuǎn)變至穩(wěn)定期后迅速關(guān)閉[48]。這種嚴(yán)格的時(shí)間調(diào)控是依賴于如AbrB、Spo0A和CodY等轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子實(shí)現(xiàn)的。在蠟樣芽孢桿菌中,AbrB和Spo0A調(diào)節(jié)子與芽孢的形成相關(guān),而 CodY的功能是調(diào)節(jié)細(xì)菌染色體與ces基因簇所在質(zhì)粒間的信號(hào)傳導(dǎo),進(jìn)一步將細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)和能量狀態(tài)與致病性聯(lián)系起來[49]。cereulide的合成除受細(xì)菌內(nèi)部基因調(diào)控之外,還受所在環(huán)境因素的影響。例如,蠟樣芽孢桿菌合成cereulide的最適溫度為20—30 ℃,并且依賴氧氣的存在,有研究表明在氧濃度低于1%—2%的條件下,菌株將不會(huì)產(chǎn)生cereulide[28]。此外,營(yíng)養(yǎng)條件、pH、濕度和NaCl等因素都會(huì)影響cereulide的產(chǎn)生[50-51],但這些外部信號(hào)如何被細(xì)菌感知,轉(zhuǎn)導(dǎo)并調(diào)節(jié)cereulide的合成過程這些問題均未闡明。

    3 Cereulide的生物合成過程

    隨著近年來對(duì)NRPS合成天然產(chǎn)物的研究增多,cereulide的生物合成過程也得到了進(jìn)一步探索。MAGARVEY等提出ces-NRPS識(shí)別的底物并不全是氨基酸,酮酸也是識(shí)別底物之一,例如CesA1的A結(jié)構(gòu)域識(shí)別的是 α-酮基羧酸(D-α-ketocarboxylic acids,KIC),CesB1識(shí)別的底物為 α-酮異戊酸(L-αketoisovaleric acid, KIV),并提出了酮還原酶(KR)結(jié)構(gòu)域的作用[20]。此外,有研究提出了關(guān)于cereulide生物合成的新概念,即二肽是形成cereulide肽鏈的基礎(chǔ)單元,而不是單個(gè)氨基酸或羥基酸作為組裝的基本模塊[52]。并將CesA末端的縮合結(jié)構(gòu)域描述為C*域,該結(jié)構(gòu)域的功能是酯合酶而不是酰胺合酶,推測(cè)其在cereulide肽鏈的最終環(huán)化過程中與TE結(jié)構(gòu)域協(xié)同酯化作用[21]。

    在現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道和研究數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上,我們總結(jié)并提出了cereulide的生物合成機(jī)理,并著重探討TE結(jié)構(gòu)域和KR結(jié)構(gòu)域在cereulide合成中的迭代和環(huán)化作用,如圖3-A所示:

    (1)二肽的合成:cereulide的主要合成單元,CesA由A-PCP-C-A-E-C*結(jié)構(gòu)域組成,CesB包含A-PCP-APCP-TE結(jié)構(gòu)域。首先,CesA1,CesA2,CesB1和CesB2 分別識(shí)別D-α-酮羧酸(KIC),L-丙氨酸(Ala),L-α-酮異戊酸(KIV)和L-纈氨酸(Val)。然后,通過KR域?qū)ⅵ?KIC(CesA1)和α-KIV(CesB1)分別還原為D-α-羥基異己酸(HIC)和L-α-羥基異戊酸(HIV)。PCP結(jié)構(gòu)域通過4'-磷酸泛酰巰基乙胺的巰基捕獲活化的前體物質(zhì),C結(jié)構(gòu)域催化下游PCP結(jié)合的單體,并對(duì)上游PCP結(jié)合的單體進(jìn)行親核攻擊,最終共價(jià)結(jié)合形成二肽。

    (2)四肽的合成:依照上述過程,CesA和CesB分別合成D-HIC-D-Ala和L-HIV-L-Val,C*結(jié)構(gòu)域催化酯鍵的形成,釋放 PCP上結(jié)合的四肽D-HIC-DAla-L-HIV-L-Val,該四肽隨后轉(zhuǎn)移至 CesB末端 TE結(jié)構(gòu)域的絲氨酸羥基(Ser-OH)上。

    (3)十二肽的環(huán)化:通過重復(fù)反應(yīng)合成第二個(gè)四肽,兩個(gè)四肽通過酯化形成八肽;再次重復(fù)上述反應(yīng),形成三元絡(luò)合的產(chǎn)物肽。由于ces-NRPS的TE結(jié)構(gòu)域活性中心表面結(jié)構(gòu)阻止外部水分子進(jìn)入,并誘導(dǎo)內(nèi)部親核攻擊反應(yīng),最后 TE結(jié)構(gòu)域催化中間反應(yīng)并釋放環(huán)狀的cereulide。

    3.1 KR結(jié)構(gòu)域的迭代作用-酯鍵的形成

    Cereulide是十二環(huán)肽,由交替的6個(gè)酰胺鍵和6個(gè)酯鍵連接而成。ces-NRPS具有兩個(gè)A結(jié)構(gòu)域,其中在a8和a9之間插入了一個(gè)KR結(jié)構(gòu)域(圖3-B)[20,53]。KR的功能是利用NADPH作為輔助因子,催化α-酮酸還原為α-羥基酸,是酯鍵形成的基礎(chǔ)[52]。其他研究也證明了 KR結(jié)構(gòu)域的還原作用,例如在放線菌kutzerides合成中的KR結(jié)構(gòu)域蛋白KtzG,以及鏈霉菌antimycins合成過程中的KR結(jié)構(gòu)域蛋白AntC,均參與催化 α-酮酸的還原[54-55]。不同的是,kutzerides和antimycins合成基因簇中的KR結(jié)構(gòu)域未插入A結(jié)構(gòu)域中,而是位于A和PCP結(jié)構(gòu)域之間并形成獨(dú)立部分。此外,真菌的環(huán)二肽合成酶系統(tǒng)(cyclodepsipeptide synthetase systems)合成的如enniation和bassianolide,這些肽類同 cereulide類似,也由酯鍵鏈接,但與細(xì)菌NRPS系統(tǒng)不同的是,真菌環(huán)二肽合成酶簇的A結(jié)構(gòu)域可直接利用α-羥酸,無需KR結(jié)構(gòu)域進(jìn)行催化還原[56]。總之,細(xì)菌NRPS系統(tǒng)的組成是靈活的,通過了解多肽類天然產(chǎn)物的迭代形成過程,可為后期通過基因工程、合成生物學(xué)和其他手段獲得理想產(chǎn)物提供新的思路。

    3.2 TE結(jié)構(gòu)域的環(huán)化作用

    許多NRPS合成的天然產(chǎn)物TE結(jié)構(gòu)域的功能已得到良好闡述,其功能主要為:活性絲氨酸殘基攻擊PCP結(jié)構(gòu)域結(jié)合的中間肽,并使之與TE結(jié)構(gòu)域結(jié)合,成熟肽最終通過水解或環(huán)化作用從TE結(jié)構(gòu)域釋放,形成線性肽或環(huán)肽(圖3-B)[57-58]。例如,有研究分析了枯草芽孢桿菌surfactin的TE結(jié)構(gòu)域晶體結(jié)構(gòu),SrfTE是一個(gè)含有碗狀活性位點(diǎn)的球狀結(jié)構(gòu)域[59]。并且與典型的α/β水解酶家族一樣,SrfTE域也具有保守的Ser-His-Asp催化三聯(lián)體[43,60]。因此,推測(cè)cereulide的TE結(jié)構(gòu)域“肽結(jié)合袋”表面分布有大量疏水殘基形成疏水環(huán)境,外部水分子被阻攔,分子內(nèi)羥基或氨基對(duì)羰基碳發(fā)起親核攻擊,最終通過形成內(nèi)酯或內(nèi)酰胺釋放環(huán)肽。

    此外,也有研究表明若 TE結(jié)構(gòu)域活性中心位點(diǎn)上氨基酸為結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、剛性的脯氨酸時(shí),則會(huì)形成環(huán)狀產(chǎn)物;當(dāng)脯氨酸被骨架柔軟的氨基酸替代時(shí),外部水分子進(jìn)入 TE結(jié)合口袋充當(dāng)親核試劑,則會(huì)形成線性肽[58]。總之,阻止外部水分子進(jìn)入TE的“肽結(jié)合袋”,是形成環(huán)狀產(chǎn)物的關(guān)鍵。另一方面,我們認(rèn)為TE結(jié)構(gòu)域也具有調(diào)節(jié)迭代次數(shù)的功能。例如,enniation也含有3個(gè)重復(fù)單元,其C末端的TE結(jié)構(gòu)域被PCP-C結(jié)構(gòu)域取代,這表明TE結(jié)構(gòu)域和PCP-C結(jié)構(gòu)域可能具有相似的功能或核心位點(diǎn),而PCP域的功能便是控制天然產(chǎn)物鏈的延伸長(zhǎng)度[43]。

    4 結(jié)語

    綜述了蠟樣芽孢桿菌主要毒素cereulide的毒性作用和生物合成過程,其毒性作用機(jī)制主要包括:與5-HT3受體結(jié)合,刺激傳入迷走神經(jīng)引起嘔吐;誘導(dǎo)線粒體膜電位耗竭,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。然而,cereulide導(dǎo)致的急性肝衰竭、心力衰竭、橫紋肌溶解和腦部病變等毒性作用的機(jī)制尚不清楚。此外,在綜述cereulide的生物合成過程中,筆者強(qiáng)調(diào)了催化酮酸形成酯的酮還原酶(KR)域,及形成重復(fù)單元和環(huán)肽的硫酯酶(TE)域在cereulide合成過程中的迭代和環(huán)化作用。并且這種作用并不僅限于 cereulide,而是可以作為NRPS系統(tǒng)生物合成環(huán)狀迭代天然產(chǎn)物的推廣分析,為后期通過基因工程、合成生物學(xué)和其他手段獲得理想產(chǎn)物等研究提供科學(xué)依據(jù)。

    猜你喜歡
    蠟樣基因簇芽孢
    解淀粉芽孢桿菌Lx-11
    解淀粉芽孢桿菌的作用及其產(chǎn)品開發(fā)
    側(cè)孢短芽孢桿菌A60
    梅雨季節(jié),除了霉菌,還要小心它
    冬瓜高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析
    30L發(fā)酵罐培養(yǎng)枯草芽孢桿菌產(chǎn)高密度芽孢的研究
    細(xì)菌型豆豉蠟樣芽孢桿菌的動(dòng)態(tài)變化研究
    腸球菌萬古霉素耐藥基因簇遺傳特性
    遺傳(2015年5期)2015-02-04 03:06:55
    海洋稀有放線菌 Salinispora arenicola CNP193 基因組新穎PKS 和NRPS基因簇的發(fā)掘
    高水分烤蝦中蠟樣芽孢桿菌的分離鑒定及其生長(zhǎng)特性
    日韩 亚洲 欧美在线| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 日韩制服骚丝袜av| 国产淫片久久久久久久久| 大香蕉久久网| 久久久国产欧美日韩av| 91久久精品国产一区二区成人| 中文字幕制服av| 亚洲国产欧美在线一区| 日本黄色日本黄色录像| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲人与动物交配视频| 2018国产大陆天天弄谢| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 一级爰片在线观看| 亚洲四区av| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 水蜜桃什么品种好| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲av.av天堂| av在线观看视频网站免费| 伦理电影大哥的女人| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产精品免费大片| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 三级国产精品片| 激情五月婷婷亚洲| 成人黄色视频免费在线看| 欧美xxⅹ黑人| kizo精华| 国产爽快片一区二区三区| 好男人视频免费观看在线| av免费观看日本| 少妇高潮的动态图| 秋霞伦理黄片| a级毛色黄片| 视频中文字幕在线观看| 深夜a级毛片| 久久久久久久久久人人人人人人| 美女中出高潮动态图| 国产亚洲一区二区精品| 91精品国产国语对白视频| 国产精品免费大片| 精品一区二区免费观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 两个人免费观看高清视频 | 午夜老司机福利剧场| 久久久久久久久久成人| 精品人妻一区二区三区麻豆| 热re99久久国产66热| 久久久国产一区二区| 日本vs欧美在线观看视频 | 久久久久久久久大av| 成人毛片a级毛片在线播放| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 国精品久久久久久国模美| 亚洲怡红院男人天堂| 不卡视频在线观看欧美| 丝袜在线中文字幕| 亚洲va在线va天堂va国产| av又黄又爽大尺度在线免费看| 男人舔奶头视频| av天堂中文字幕网| 日韩成人伦理影院| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲国产最新在线播放| 国产一区亚洲一区在线观看| 22中文网久久字幕| 国产在线视频一区二区| 午夜影院在线不卡| 久久久久久久国产电影| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产免费视频播放在线视频| 国产亚洲最大av| 伊人亚洲综合成人网| 麻豆成人av视频| 一级爰片在线观看| 99久久人妻综合| 国产淫片久久久久久久久| 久久青草综合色| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲熟女精品中文字幕| 两个人的视频大全免费| 大陆偷拍与自拍| 国产成人freesex在线| 一个人免费看片子| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美 日韩 精品 国产| 麻豆乱淫一区二区| 99久国产av精品国产电影| 免费大片18禁| √禁漫天堂资源中文www| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久久精品94久久精品| 少妇人妻 视频| 亚洲av国产av综合av卡| 国产成人精品福利久久| 久久久久久久久久成人| 国产成人一区二区在线| 在线观看www视频免费| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 人妻一区二区av| 午夜免费男女啪啪视频观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 一本一本综合久久| 午夜福利影视在线免费观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 色视频在线一区二区三区| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日韩大片免费观看网站| 3wmmmm亚洲av在线观看| 欧美精品一区二区免费开放| 久久久午夜欧美精品| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲国产精品999| 免费人成在线观看视频色| 亚洲国产成人一精品久久久| 天美传媒精品一区二区| 免费观看性生交大片5| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 麻豆成人av视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 丰满迷人的少妇在线观看| 老女人水多毛片| 日本欧美视频一区| 少妇人妻一区二区三区视频| 三上悠亚av全集在线观看 | 老熟女久久久| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲精品国产色婷婷电影| 色婷婷av一区二区三区视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 久久97久久精品| 大片电影免费在线观看免费| 人体艺术视频欧美日本| 激情五月婷婷亚洲| 伊人久久精品亚洲午夜| 18+在线观看网站| 精品一区二区三卡| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久久a久久爽久久v久久| 三上悠亚av全集在线观看 | 国产黄片美女视频| 日本免费在线观看一区| 少妇高潮的动态图| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 人人妻人人看人人澡| 国产成人精品福利久久| 国产免费福利视频在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品国产av蜜桃| 午夜日本视频在线| 国产欧美亚洲国产| 在线天堂最新版资源| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲av不卡在线观看| 如何舔出高潮| 乱人伦中国视频| 亚洲第一av免费看| 97超碰精品成人国产| a级片在线免费高清观看视频| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 色视频www国产| 欧美人与善性xxx| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产视频首页在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 久久免费观看电影| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲精品自拍成人| 99热国产这里只有精品6| 中国三级夫妇交换| 精品卡一卡二卡四卡免费| 男人爽女人下面视频在线观看| videos熟女内射| 国产欧美日韩精品一区二区| 看免费成人av毛片| 在线看a的网站| 各种免费的搞黄视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 午夜老司机福利剧场| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲欧美一区二区三区国产| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 韩国av在线不卡| 少妇人妻精品综合一区二区| 一区二区三区乱码不卡18| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 国产精品人妻久久久久久| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久韩国三级中文字幕| 97在线视频观看| 黑人猛操日本美女一级片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产精品久久久久久av不卡| 熟妇人妻不卡中文字幕| 22中文网久久字幕| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲精品色激情综合| 看非洲黑人一级黄片| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久精品国产自在天天线| 精品国产一区二区久久| 国产精品女同一区二区软件| 晚上一个人看的免费电影| 免费看光身美女| 亚洲伊人久久精品综合| 久久精品夜色国产| 另类精品久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 黑人猛操日本美女一级片| 纯流量卡能插随身wifi吗| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 少妇的逼好多水| 日本黄色片子视频| 两个人的视频大全免费| 嫩草影院入口| 99re6热这里在线精品视频| www.色视频.com| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产精品不卡视频一区二区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 久久国内精品自在自线图片| 高清视频免费观看一区二区| 一级片'在线观看视频| 亚洲av综合色区一区| 国产成人精品无人区| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 女性生殖器流出的白浆| 久久ye,这里只有精品| 免费黄网站久久成人精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 丰满迷人的少妇在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 一区二区三区精品91| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲人成网站在线观看播放| 极品人妻少妇av视频| 美女福利国产在线| 韩国av在线不卡| 免费观看av网站的网址| 亚洲成人av在线免费| 一级,二级,三级黄色视频| 视频区图区小说| 女人精品久久久久毛片| 99久久中文字幕三级久久日本| 日韩中文字幕视频在线看片| 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久国内精品自在自线图片| 国产日韩欧美视频二区| 日本黄大片高清| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产免费又黄又爽又色| 观看av在线不卡| 亚洲国产色片| av天堂中文字幕网| 黄色怎么调成土黄色| 中文在线观看免费www的网站| 蜜臀久久99精品久久宅男| 男男h啪啪无遮挡| 国产午夜精品一二区理论片| 日日撸夜夜添| 亚洲成人一二三区av| 永久网站在线| 91精品国产国语对白视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲av在线观看美女高潮| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 毛片一级片免费看久久久久| 在线观看免费视频网站a站| 日韩精品有码人妻一区| 国产黄色视频一区二区在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 午夜91福利影院| 国产伦在线观看视频一区| 大码成人一级视频| 久久久久久久久久久丰满| 久久久久久久久久久久大奶| 老司机亚洲免费影院| 亚洲中文av在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 三上悠亚av全集在线观看 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产av国产精品国产| 赤兔流量卡办理| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 男人舔奶头视频| 国产精品久久久久成人av| 国产伦在线观看视频一区| 有码 亚洲区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 免费人妻精品一区二区三区视频| 在线 av 中文字幕| 伊人久久精品亚洲午夜| 一级二级三级毛片免费看| 国产乱来视频区| 日本爱情动作片www.在线观看| 丝袜在线中文字幕| 蜜臀久久99精品久久宅男| 精品久久久精品久久久| 在线播放无遮挡| 久久人人爽人人爽人人片va| 九九爱精品视频在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 99热国产这里只有精品6| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品99久久久久久久久| 激情五月婷婷亚洲| 国产淫语在线视频| 男女边摸边吃奶| 99久国产av精品国产电影| 美女视频免费永久观看网站| 美女内射精品一级片tv| 久久精品国产a三级三级三级| 51国产日韩欧美| 秋霞在线观看毛片| 一级毛片久久久久久久久女| 18禁在线播放成人免费| 97超视频在线观看视频| 美女大奶头黄色视频| 久久久国产精品麻豆| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 两个人免费观看高清视频 | 99久久精品一区二区三区| 亚洲av成人精品一区久久| 制服丝袜香蕉在线| 日本-黄色视频高清免费观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲成色77777| 亚洲精品一区蜜桃| 熟女av电影| www.色视频.com| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 免费看光身美女| 99热网站在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲一区二区三区欧美精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| 在线 av 中文字幕| 久久精品国产亚洲网站| 国产乱人偷精品视频| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 激情五月婷婷亚洲| 黄色怎么调成土黄色| 中国国产av一级| 在线免费观看不下载黄p国产| 在现免费观看毛片| 乱码一卡2卡4卡精品| 岛国毛片在线播放| 精品国产一区二区三区久久久樱花| av一本久久久久| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 9色porny在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产欧美亚洲国产| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 嫩草影院入口| 国产91av在线免费观看| 99久久人妻综合| 97超碰精品成人国产| 搡女人真爽免费视频火全软件| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 蜜桃在线观看..| 国产亚洲最大av| 欧美变态另类bdsm刘玥| 精品国产乱码久久久久久小说| 超碰97精品在线观看| 国产黄片美女视频| 亚洲色图综合在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 天美传媒精品一区二区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美精品国产亚洲| 成人无遮挡网站| 亚洲国产精品成人久久小说| 韩国av在线不卡| 日韩电影二区| 国产精品一区二区在线观看99| 三级经典国产精品| 亚洲伊人久久精品综合| 高清欧美精品videossex| 成年人午夜在线观看视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 免费看日本二区| 精华霜和精华液先用哪个| 下体分泌物呈黄色| 22中文网久久字幕| 亚洲色图综合在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲在久久综合| 99热网站在线观看| 午夜激情久久久久久久| 丰满饥渴人妻一区二区三| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 曰老女人黄片| 国产有黄有色有爽视频| 国产黄频视频在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产一区二区三区综合在线观看 | 成人综合一区亚洲| 成人免费观看视频高清| 一级片'在线观看视频| 欧美3d第一页| 亚洲av日韩在线播放| 一区二区三区免费毛片| 伊人久久国产一区二区| 国产精品免费大片| 久久久久久久久久成人| av国产久精品久网站免费入址| 91精品国产九色| 国产精品福利在线免费观看| 最后的刺客免费高清国语| 国产伦理片在线播放av一区| 国产 一区精品| 韩国高清视频一区二区三区| kizo精华| 夫妻午夜视频| 久久久国产欧美日韩av| 国产亚洲欧美精品永久| 久久精品久久久久久久性| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲欧洲日产国产| 晚上一个人看的免费电影| 成人毛片a级毛片在线播放| 一本一本综合久久| 欧美日韩综合久久久久久| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲精品456在线播放app| 久久99精品国语久久久| 午夜福利影视在线免费观看| 欧美最新免费一区二区三区| 91久久精品国产一区二区三区| 美女中出高潮动态图| 丰满迷人的少妇在线观看| 婷婷色av中文字幕| 国产精品偷伦视频观看了| 中文字幕免费在线视频6| 街头女战士在线观看网站| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 女人久久www免费人成看片| 看非洲黑人一级黄片| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美最新免费一区二区三区| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久6这里有精品| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产高清三级在线| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美日韩视频精品一区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国内揄拍国产精品人妻在线| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产精品国产三级专区第一集| 热re99久久精品国产66热6| 一级毛片电影观看| 婷婷色av中文字幕| 一级,二级,三级黄色视频| 大香蕉97超碰在线| 全区人妻精品视频| 国模一区二区三区四区视频| 精品熟女少妇av免费看| 多毛熟女@视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲国产av新网站| 亚洲av综合色区一区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产成人91sexporn| 国产亚洲一区二区精品| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲在久久综合| 日本91视频免费播放| 国产免费福利视频在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲国产精品国产精品| 色网站视频免费| 女人久久www免费人成看片| 在线观看免费日韩欧美大片 | 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产av国产精品国产| 欧美精品高潮呻吟av久久| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产精品欧美亚洲77777| 狂野欧美激情性bbbbbb| a级片在线免费高清观看视频| 中文欧美无线码| 国产精品久久久久久av不卡| av在线老鸭窝| 国国产精品蜜臀av免费| 久久久久久久久久成人| 国产成人精品久久久久久| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久韩国三级中文字幕| 夫妻性生交免费视频一级片| 精品人妻熟女av久视频| 制服丝袜香蕉在线| 99热6这里只有精品| 亚洲美女视频黄频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 伊人久久国产一区二区| av天堂久久9| 久久精品国产亚洲av涩爱| 有码 亚洲区| 欧美高清成人免费视频www| 国产精品一区二区在线不卡| 国产av码专区亚洲av| 亚洲内射少妇av| 夜夜爽夜夜爽视频| 草草在线视频免费看| 黄色怎么调成土黄色| av天堂中文字幕网| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 蜜桃在线观看..| 中文字幕av电影在线播放| 十八禁网站网址无遮挡 | 麻豆精品久久久久久蜜桃| 精华霜和精华液先用哪个| 国产日韩欧美亚洲二区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲久久久国产精品| av国产精品久久久久影院| 中文天堂在线官网| 亚洲精品456在线播放app| 免费高清在线观看视频在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 日韩人妻高清精品专区| av一本久久久久| 久久av网站| 亚洲成人手机| 久久国产精品大桥未久av | 精品人妻熟女av久视频| 麻豆乱淫一区二区| 如何舔出高潮| 婷婷色麻豆天堂久久| 久久6这里有精品| 在线播放无遮挡| 色吧在线观看| av线在线观看网站| 国产高清不卡午夜福利| 观看美女的网站| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 韩国av在线不卡| 女人久久www免费人成看片| 日日爽夜夜爽网站| h日本视频在线播放| 亚洲国产最新在线播放| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 欧美另类一区| 日本免费在线观看一区| 久久韩国三级中文字幕| 欧美+日韩+精品| 日韩强制内射视频| 国产乱人偷精品视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 五月玫瑰六月丁香| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲国产色片| 久久久午夜欧美精品| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产乱来视频区| 欧美最新免费一区二区三区| 国产综合精华液| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 丰满少妇做爰视频| 久久这里有精品视频免费| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产91av在线免费观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 日本爱情动作片www.在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久久久人妻精品一区果冻|