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    miR-122-5p與上皮性卵巢癌臨床病理特征關(guān)系及手術(shù)預(yù)后價(jià)值

    2021-08-10 06:02:32趙宏霞吳華梅劉彥霞
    關(guān)鍵詞:卵巢癌引物淋巴結(jié)

    劉 靜 趙宏霞 吳華梅 江 利 劉彥霞 韓 克

    泰康仙林鼓樓醫(yī)院(南京,210046)

    上皮性卵巢癌(EOC)惡性程度較高,對(duì)符合手術(shù)指征的患者及時(shí)手術(shù)切除是延長(zhǎng)生存時(shí)間的最可靠方法[1-2]。但是接受手術(shù)治療患者,術(shù)后生存結(jié)局存在明顯差異,推測(cè)存在某些影響患者治療預(yù)后的關(guān)鍵因素。miR-122-5p已被發(fā)現(xiàn)在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色[3],且基礎(chǔ)研究[4]指出miR-122-5p可通過靶向ERCC1而抑制卵巢癌HO8910細(xì)胞的增殖、侵襲等惡性生物學(xué)行為,但關(guān)于miR-122-5p與EOC治療預(yù)后的影響研究目前開展極少。本文探討EOC組織中miR-122-5p的表達(dá)對(duì)患者病情及治療預(yù)后的影響,為EOC發(fā)病機(jī)制、術(shù)后死亡風(fēng)險(xiǎn)分層、治療方案制定等提供指標(biāo)。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    收集2014年8月-2017年8月在本院接受手術(shù)治療的EOC患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):①術(shù)中病理診斷為EOC,符合國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(huì)(FIGO)、世界衛(wèi)生組織制定的分類分級(jí)標(biāo)準(zhǔn);②順利完成手術(shù)、無嚴(yán)重手術(shù)相關(guān)并發(fā)癥;③配合治療、病例資料完整;④本人簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):①術(shù)前接受放化療、激素治療等;②術(shù)前存在嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病、其他原發(fā)惡性腫瘤性疾病等可能影響EOC患者治療結(jié)局的其他情況;③拒絕隨訪或者隨訪過程失聯(lián)病例。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)審批。

    1.2 miR-122-5p測(cè)定

    術(shù)中取患者腫瘤組織、癌旁正常組織(距離腫瘤邊緣3cm的正常卵巢組織)標(biāo)本,置液氮罐中凍存。取腫瘤組織、癌旁正常組織標(biāo)本各100mg,液氮碾磨法碾磨成粉末后加入1ml Trizol裂解液,參照說明書步驟提取總RNA。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄RNA獲得cDNA,內(nèi)參為U6。在熒光定量PCR儀上進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR,引物序列如下:U6上游引物5’-TGCGAACGATGCAAGCTGA-3’,下游引物5’-GCGAATGAGCGTGCGAAG-3’; miR-122-5p上游引物5’-CTAGAGCTAAGCGAGAG-3’,下游引物5’-TGCAAGCTGAGCGGTAAG。反應(yīng)體系包括:引物及探針Mix 1μl、TaqMan 通用混合物溶液10μl、cDNA 1.33μl、無核酸酶的水7.67μl。反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性10min、95℃變性15s、60℃復(fù)性60s,上述過程共計(jì)45個(gè)循環(huán)。2﹣△△Ct法計(jì)算miR-122-5p相對(duì)表達(dá)量。

    1.3 病例資料收集及隨訪

    查閱所有入組患者的病例資料采集基本人口學(xué)及臨床病理特征信息,包括年齡、組織類型、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。術(shù)后24h開始隨訪,通過電話、門診復(fù)查等方式進(jìn)行,隨訪截止日期為2020年8月1日或該時(shí)間點(diǎn)前患者死亡時(shí)間。記錄患者的總生存時(shí)間(術(shù)后24h至患者死亡時(shí)間)。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果

    2.1 一般臨床資料

    共納入118例,年齡(56.7±12.8)歲(39~77歲),術(shù)前體質(zhì)指數(shù)(BMI)(23.7±1.9)kg/m2(21~26 kg/m2)。

    2.2 miR-122-5p表達(dá)水平與生存結(jié)局及ROC曲線

    患者腫瘤組織中miR-122-5p(0.31±0.08)低于癌旁正常組織(0.40±0.11)(P<0.05)。隨訪118例患者,隨訪期內(nèi)死亡49例歸于死亡組,余69例歸于存活組。死亡組腫瘤組織中miR-122-5p(0.26±0.06)低于存活組(0.34±0.11)(P<0.05),癌旁正常組織中miR-122-5p(0.41±0.08)與存活組(0.40±0.09)無差異(P>0.05)。ROC曲線顯示,腫瘤組織中miR-122-5p表達(dá)水平預(yù)測(cè)術(shù)后隨訪期死亡的最佳截?cái)嘀禐?.30,AUC為0.808(95%CI 0.738~0.891),敏感度68.1%、特異度75.5%。見圖1(封三)。

    2.3 miR-122-5p表達(dá)水平與預(yù)后生存

    根據(jù)ROC曲線最佳截?cái)嘀祵⑺腥虢M的EOC患者分為高表達(dá)組(miR-122-5p>0.30)64例、低表達(dá)組(miR-122-5p≤0.30)54例。高表達(dá)組術(shù)后生存結(jié)局優(yōu)于低表達(dá)組(P<0.05)。見圖2(封三)。

    2.4 miR-122-5p表達(dá)水平與臨床病理特征

    高表達(dá)組、低表達(dá)組患者的年齡、組織類型、分化程度分布無差異(P>0.05),F(xiàn)IGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分布有差異(P<0.05)。見表1。

    表1 不同miR-122-5p表達(dá)水平患者臨床病理特征比較[例(%)]

    2.5 影響EOC患者術(shù)后生存多因素Cox回歸分析

    以EOC患者術(shù)后生存結(jié)局作為因變量(0=生存,1=死亡),單因素分析中有差異的指標(biāo)納入多因素Cox回歸分析。發(fā)現(xiàn),miR-122-5p≤0.30、FIGO分期Ⅲ期、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是EOC患者術(shù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表2。

    表2 影響EOC患者術(shù)后生存的多因素分析

    3 討論

    miR-122-5p是一種重要的microRNA類型,其表達(dá)改變可影響下游靶基因及相關(guān)信號(hào)通路的功能變化,進(jìn)而引發(fā)一系列疾病的發(fā)生發(fā)展。已有研究指出miR-122-5p與消化系統(tǒng)疾病的發(fā)生相關(guān),如Matsuzaki[5]研究指出miR-122-5p可能通過影響氧化應(yīng)激參與肝損傷發(fā)生;PEI[6]發(fā)現(xiàn)miR-122-5p在胃癌組織中表達(dá)下調(diào)并發(fā)揮腫瘤抑制作用。卵巢癌的發(fā)生發(fā)展也涉及較多microRNA,機(jī)體miR-122-5p水平是否對(duì)卵巢癌病情及預(yù)后產(chǎn)生直接影響目前尚無明確結(jié)論。本文中發(fā)現(xiàn)EOC患者腫瘤組織中存在miR-122-5p異常低表達(dá),這與苗培田[4]結(jié)論吻合;術(shù)后死亡組患者腫瘤組織中miR-122-5p表達(dá)水平較低,推測(cè)miR-122-5p異??赡苡绊懥薊OC患者的術(shù)后生存結(jié)局。

    本文中經(jīng)ROC曲線,miR-122-5p預(yù)測(cè)EOC患者術(shù)后生存結(jié)局的最佳截?cái)嘀担⒁源藢?duì)EOC患者分組發(fā)現(xiàn),高表達(dá)組術(shù)后生存結(jié)局優(yōu)于低表達(dá)組。提示miR-122-5p低表達(dá)可能對(duì)EOC患者術(shù)后生存情況產(chǎn)生一定負(fù)面影響,但miR-122-5p低表達(dá)產(chǎn)生影響的具體機(jī)制不明,還有待后續(xù)深入研究。

    本研究進(jìn)一步探討EOC患者臨床病理特征與腫瘤組織中miR-122-5p表達(dá)關(guān)系發(fā)現(xiàn),F(xiàn)IGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等與miR-122-5p表達(dá)相關(guān),主要表現(xiàn)為miR-122-5p低表達(dá)者FIGO分期較高、伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等概率更高。提示miR-122-5p表達(dá)減少甚至缺失可能導(dǎo)致EOC患者臨床病理特征不理想、病情較為嚴(yán)重,術(shù)后復(fù)發(fā)及死亡風(fēng)險(xiǎn)增高。分析EOC患者隨訪期死亡的影響因素發(fā)現(xiàn),miR-122-5p≤0.30、FIGO分期Ⅲ期、深肌層浸潤(rùn)、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等均是EOC患者術(shù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。miR-122-5p異常低表達(dá)可能由于解除了對(duì)癌細(xì)胞惡性行為的抑制作用,導(dǎo)致術(shù)后殘留微小腫瘤灶迅速增殖并導(dǎo)致局部復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[7-9]。腫瘤分期較高、浸潤(rùn)較深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移已在諸多國內(nèi)外研究[10-12]中被明確是惡性腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素,本文結(jié)果與其吻合。

    綜上所述,在可接受手術(shù)治療的EOC患者中,miR-122-5p低表達(dá)是患者病情嚴(yán)重、術(shù)后生存結(jié)局不佳的重要影響因素。該分析可能為臨床工作在EOC治療方案的選擇等臨床實(shí)踐方面提供一定幫助。

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