酶聯(lián)免疫吸附分析及其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用

□ 馬杰華 平南縣公共檢驗(yàn)檢測(cè)中心

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）是以酶標(biāo)記抗體技術(shù)為基礎(chǔ)，在實(shí)際應(yīng)用中，可通過(guò)酶標(biāo)抗體及待測(cè)標(biāo)本的未標(biāo)記抗原進(jìn)行檢驗(yàn)，并分離游離的已經(jīng)結(jié)合的標(biāo)記抗原進(jìn)行酶活性測(cè)定與分析，從而得到待測(cè)抗原的含量。ELISA具有選擇性好、靈敏度高、檢測(cè)結(jié)果比較準(zhǔn)確、實(shí)用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、生物學(xué)及化學(xué)分析等領(lǐng)域中?；诖耍芯考胺治鯡LISA在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用，對(duì)進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)食品安全檢驗(yàn)水平提升有積極作用[1]。

1 酶聯(lián)免疫吸附的基本原理

ELISA是將抗原或抗體以不損壞免疫活性的條件，結(jié)合到固相載體的表面。在進(jìn)行測(cè)定的過(guò)程中，可根據(jù)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)抗原、抗體的反應(yīng)過(guò)程、復(fù)合物等進(jìn)行檢測(cè)分析。在反應(yīng)過(guò)程中，固相載體上酶標(biāo)抗原或抗體被結(jié)合量等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，洗滌處理后，去除反應(yīng)液中的其他物質(zhì)，在加入酶反應(yīng)底物后，底物可通過(guò)酶催化轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩a(chǎn)物，最后，采用定性或定量分析的方式，對(duì)有色產(chǎn)物量進(jìn)行檢驗(yàn)與分析[2]。ELISA在實(shí)際應(yīng)用中，其基本應(yīng)用原理如圖1所示。

圖1 操作步驟

ELISA在實(shí)際應(yīng)用中，其可以采用直接法、間接法兩種方式進(jìn)行檢驗(yàn)分析。其中，直接法則是酶標(biāo)記抗體與待檢測(cè)樣本中固相抗原直接產(chǎn)生作用，并在加入底物后，出現(xiàn)顏色變化。間接法則是以已知抗原為基礎(chǔ)，吸附在固相載體上，與待檢測(cè)樣本中的抗體作用為主，加入酶標(biāo)記抗同種動(dòng)物抗體的免疫球蛋白，并加入酶底物，顯色。ELISA在實(shí)際應(yīng)用中，可通過(guò)直接、間接的方式進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，并結(jié)合最終的顯色，從而判定最終的檢驗(yàn)結(jié)果。

2 ELISA操作的影響因素分析

ELISA的實(shí)際應(yīng)用中，需對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果的影響因素進(jìn)行分析。①抗原包液的質(zhì)量對(duì)ELISA的測(cè)定結(jié)果會(huì)產(chǎn)生直接的影響。將抗原固定在聚苯乙烯微量反應(yīng)板中，其效果對(duì)抗原-抗體反應(yīng)等會(huì)產(chǎn)生直接的影響。②非特異性反應(yīng)的干擾。在設(shè)置稀釋液空白、陽(yáng)性及陰性參比血清的基礎(chǔ)上，需采用包埋、封閉等方式進(jìn)行預(yù)處理。如在抗原包液中加入牛血清白蛋白、明膠和吐溫-20等，從而達(dá)到減少非特異性反應(yīng)的目的。③高選擇性的單克隆抗體可代替多克隆抗體，這對(duì)提高ELISA特異性方面有積極作用。④在實(shí)際操作中，選擇表面積相對(duì)較大的固相載體，可提高ELISA的敏感性以及操作性。⑤酶合交聯(lián)劑對(duì)ELISA的操作會(huì)產(chǎn)生直接的影響。在利用免疫法或化學(xué)法的過(guò)程中，HRP與抗體的交聯(lián)可采用高碘酸鈉氧化法進(jìn)行處理，從而達(dá)到檢驗(yàn)與操作的目的。酶底物本身要求無(wú)色，在反應(yīng)后可出現(xiàn)顏色變化。大多HRP是以鄰苯二胺為酶底物，AKP則是以硝基苯磷酸鹽為ELISA檢驗(yàn)的酶底物[3]。

3 酶聯(lián)免疫吸附在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用分析

3.1 細(xì)菌檢測(cè)

沙門(mén)氏菌是食品安全檢測(cè)中的關(guān)鍵指標(biāo)，可采用制備單克隆抗體的ELISA方法對(duì)沙門(mén)氏菌進(jìn)行檢測(cè)，最低檢測(cè)量可達(dá)到500 cfu/g，時(shí)間為22 h，可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)檢測(cè)。在利用BADot-ELISA對(duì)食品中的李氏桿菌進(jìn)行檢驗(yàn)的過(guò)程中，其檢驗(yàn)的敏感性可達(dá)到104個(gè)/mL，而且節(jié)省時(shí)間。以蘇丹紅1號(hào)為研究對(duì)象，在對(duì)其抗原序列進(jìn)行分析時(shí)，通過(guò)抗原可實(shí)現(xiàn)溶解劑的制備。在對(duì)食品中的病原微生物進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，強(qiáng)化ELISA檢測(cè)程序，可提高吸附的靈敏性。單核細(xì)胞的檢驗(yàn)，可采用細(xì)菌分離的方式，但檢驗(yàn)周期較長(zhǎng)，所以，可建立重組單細(xì)胞ELISA檢測(cè)方法，提升單細(xì)胞細(xì)菌的檢驗(yàn) 效果[4]。

3.2 生物毒素檢驗(yàn)

真菌毒素對(duì)人體健康產(chǎn)生直接的影響，毒性相對(duì)較強(qiáng)，有致癌作用，如黃曲霉毒素的毒性較強(qiáng)，對(duì)人體的傷害性較大，具有一定的免疫抑制性，較低的含量就會(huì)導(dǎo)致各類(lèi)疾病。可利用ELISA對(duì)真菌毒素進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，如在利用ELISA檢驗(yàn)黃曲霉毒素B+G標(biāo)準(zhǔn)品的過(guò)程中，檢驗(yàn)的最低濃度為0.13 ng/mL，最低的檢出量為 50 μg/kg，利用校正曲線(xiàn)分析，線(xiàn)性范圍為0.25～20 ng/mL?？赏ㄟ^(guò)ELISA檢驗(yàn)，對(duì)生物毒素含量及吸附敏感性等方面進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，從而滿(mǎn)足食品安全檢驗(yàn)的實(shí)際需求。ELISA對(duì)真菌毒素的檢驗(yàn)與分析，包括黃曲霉素、抗原體及特異性抗體等方面，ELISA的應(yīng)用穩(wěn)定性較高，測(cè)量結(jié)果較準(zhǔn)確。

3.3 藥物材料檢測(cè)

利用ELISA可對(duì)食品中的藥物殘留進(jìn)行檢測(cè)與分析，如有害殘留成分、禁用獸用殘留成分等。以肉制品為研究對(duì)象，利用ELISA可對(duì)生鮮肉的血清蛋白和熟食肉制品的肌肉抗原進(jìn)行檢測(cè)。在檢測(cè)瘦肉精時(shí)，可對(duì)食品的可食用性、安全性等進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，如果食用的肉制品瘦肉精含量超標(biāo)，易導(dǎo)致人們出現(xiàn)頭疼、四肢麻木等癥狀。而且，ELISA可對(duì)動(dòng)物脂肪中的孕激素殘留量進(jìn)行檢驗(yàn)，如果殘留量超標(biāo)，則說(shuō)明食品質(zhì)量不達(dá)標(biāo)[5]。

3.4 轉(zhuǎn)基因食品監(jiān)測(cè)

在對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的研發(fā)、食用等方面進(jìn)行綜合分析時(shí)，可通過(guò)ELISA技術(shù)對(duì)基因序列、目的蛋白質(zhì)等進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，通過(guò)雙夾心ELISA法的應(yīng)用，可對(duì)轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行評(píng)估與分析，有助于提高食品安全質(zhì)量。以轉(zhuǎn)基因大豆為例，通過(guò)ELISA的應(yīng)用，可對(duì)抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆中的CP4EPSPS蛋白進(jìn)行檢驗(yàn)，而且，在檢驗(yàn)的過(guò)程中，可檢測(cè)出不同轉(zhuǎn)基因大豆中的蛋白含量，這對(duì)提高轉(zhuǎn)基因食品安全檢驗(yàn)水平有積極作用。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，探究酶聯(lián)免疫吸附分析法的實(shí)際應(yīng)用，對(duì)酶聯(lián)免疫吸附在轉(zhuǎn)基因食品、藥物材料、生物毒素等檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)行研究，酶聯(lián)免疫吸附的應(yīng)用方式不同，食品檢驗(yàn)與分析效果方面也存在一定的差異。但是，在酶聯(lián)免疫吸附的實(shí)際應(yīng)用中，強(qiáng)化自動(dòng)檢測(cè)儀器的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用對(duì)提高酶聯(lián)免疫吸附分析法在食品安全檢測(cè)中的實(shí)際應(yīng)用效果有積極作用。