MMP-9、NLRP3、熱休克蛋白70在子癇前期患者血清表達及相關性

聶艷琴 許小華 張 蘭

聯(lián)勤保障部隊第九〇九醫(yī)院,廈門大學附屬東南醫(yī)院(漳州，363000)

子癇前期屬較嚴重的產(chǎn)科并發(fā)癥，臨床癥狀常表現(xiàn)為妊娠20周后產(chǎn)婦進行性加重的蛋白尿、高血壓、水腫等，可導致母嬰重要器官功能損傷，且隨著疾病進展圍生兒死亡風險增加[1]。臨床對子癇前期的發(fā)病機制尚不完全明確?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在血管重鑄、胎盤滋養(yǎng)層細胞浸潤中有重要意義[2]。核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3(NLRP3)，在機體炎癥反應中有關鍵性作用[3]。熱休克蛋白70(HSP70)屬細胞保護因子，參與細胞生物學行為過程[4]。本研究分析MMP-9、NLRP3、HSP70在子癇前期患者血清中的表達及其關系，為臨床診治提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2018年1月—2019年12月本院產(chǎn)科住院的子癇前期患者120例(子癇前期組)。納入標準：符合子癇前期診斷標準[5]。排除標準：合并糖尿?。缓喜a(chǎn)科并發(fā)癥及合并癥；胎膜早破、存在感染征象；合并心、肝、肺功能不全；存在精神障礙和溝通障礙。另選同期產(chǎn)前檢查正常妊娠產(chǎn)婦100例為對照組。所有孕婦及家屬對本次研究均知情并簽署知情同意書。本研究獲院倫理委員會批準通過。

1.2 檢測方法

抽取產(chǎn)婦清晨空腹靜脈血分離血清。血清MMP-9、HSP70水平酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測。實時熒光定量RT-PCR檢測血清中NLRP3 mRNA表達，2-△△Ct法計算NLRP3 mRNA表達量。NLRP3引物序列：上游：5’-AAAGAGATGAGCCGAAGTGGG-3’，下游：5’-TCAATGCTGTCTTCCTGGCA-3’；內(nèi)參基因GAPDH引物序列：上游：5’-AACAGCCTCAAGATCATCAGCAA-3’，下游：5’-GACTGTGGTCATGAGTCCTTCCA-3’。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 一般臨床資料

子癇前期組年齡(30.2±1.5)歲，孕周(33.2±1.6)周，體質(zhì)指數(shù)(BMI)(25.8±1.0)kg/m2；早發(fā)型65例，晚發(fā)型55例；輕度49例，重度71例；初產(chǎn)婦67例，經(jīng)產(chǎn)婦53例；有子癇前期家族史38例，有高血壓家族史30例；有水腫癥狀78例，尿蛋白水平+59例，++36例，+++25例。對照組年齡(31.8±1.2)歲，孕周(33.5±1.5)周，BMI(25.6±1.2)kg/m2。兩組年齡、孕周、BMI比較無差異(P>0.05)。

2.2 兩組血清NLRP3mRNA、MMP-9、HSP70水平

如表1所示，子癇前期組血清NLRP3 mRNA表達量、HSP70水平高于對照組，MMP-9水平低于對照組(P<0.05)。

表1 兩組血清NLRP3mRNA、MMP-9、HSP70水平比較

2.3 不同類型子癇前期患者血清NLRP3mRNA、MMP-9、HSP70水平

如表2所示，子癇前期患者中，早發(fā)型血清NLRP3 mRNA表達量、HSP70表達水平高于晚發(fā)型，MMP-9水平低于晚發(fā)型(P<0.05)；重度子癇前期患者血清NLRP3 mRNA表達量、HSP70表達水平高于輕度子癇前期患者，MMP-9水平低于輕度子癇前期患者(P<0.05)。

表2 不同類型子癇前期患者血清NLRP3mRNA、MMP-9、HSP70水平比較

2.4 不同臨床特征子癇前期患者NLRP3mRNA、MMP-9、HSP70水平

如表3所示，NLRP3 mRNA、MMP-9、HSP70表達水平在不同年齡、BMI、孕產(chǎn)次子癇前期患者間無差異(P>0.05)，而在患者存在家族史、高血壓家族史、尿蛋白水平等方面存在差異(P<0.05)。

表3 不同臨床特征子癇前期患者NLRP3mRNA、MMP-9、HSP70表達比較

2.5MMP-9、NLRP3、HSP70之間相關性分析

如圖1所示，MMP-9、NLRP3、HSP70行Pearson相關性分析，MMP-9與NLRP3負相關(r=-0.212,P=0.020)，MMP-9與HSP70負相關(r=-0.226,P=0.013)，NLRP3與HSP70正相關(r=0.199,P=0.023)。

圖1 MMP-9、NLRP3、HSP70相關性分析

3 討論

目前研究認為[6]子癇前期發(fā)生與胚胎著床期母體對同種異體胚胎免疫耐受不全、胎盤形成期滋養(yǎng)細胞侵襲子宮肌層能力不足以及孕晚期母體血管內(nèi)皮功能障礙和過度全身炎癥反應相關。

MMP是細胞外基質(zhì)蛋白水解酶，其中MMP-9屬于一種滋養(yǎng)細胞所分泌的最為有效的蛋白水解酶，含量高低與滋養(yǎng)細胞侵襲能力、血管重鑄相關[7-8]。在妊娠過程中，胚胎滋養(yǎng)層細胞會侵入至母體蛻膜組織及蛻膜組織中的螺旋動脈，以代替血管內(nèi)皮細胞建立母嬰營養(yǎng)交互循環(huán)，是妊娠順利進行的必須環(huán)節(jié)[9]。有研究認為[10]，滋養(yǎng)細胞自身不可溶解或者吞噬基質(zhì)，主要依賴于MMP-9的分泌量，進而選擇性的將子宮內(nèi)膜基質(zhì)成分、基底膜水解，當MMP-9的分泌量減少時會到導致滋養(yǎng)細胞浸潤不足，進而影響滋養(yǎng)細胞浸潤子宮內(nèi)膜功能，最終導致子癇前期的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示子癇前期患者血清中MMP-9低表達，且與患者子癇前期家族史、高血壓家族史、尿蛋白水平相關，與蔣韜等[11]研究中認為MMP-9參與重度子癇前期的發(fā)生相關的研究結(jié)果一致。

核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體(NLR)家族會對IL-1β等可溶性促炎因子產(chǎn)生誘導作用，在機體炎癥反應、自身免疫綜合征中具有重要的作用[12]。NLRP3屬NLR家族中較重要的成員之一，當其被激活后會使ASC等接頭蛋白催化caspase-1，當caspase-1被活化后會促進IL-1β成熟，當IL-1β異常表達會引發(fā)產(chǎn)婦發(fā)生內(nèi)皮炎癥反應，進而對螺旋動脈重塑、滋養(yǎng)層入侵[13]。臨床有研究發(fā)現(xiàn)，當NLRP3被激活后可導致子癇前期的發(fā)生[14-15]。本研究中子癇前期患者血清中NLRP3高表達，且與患者子癇前期家族史、高血壓家族史、尿蛋白水平相關，與C Weel I等[16]研究中認為NLRP3參與重度子癇前期的發(fā)生相關的研究結(jié)果一致。

HSP屬于熱休克反應在轉(zhuǎn)錄過程中所合成的一組蛋白，在多種不利于自身因素的刺激下會促進細胞快速翻譯合成，進而激活機體內(nèi)源性保護機制，最終起到抗應激損傷的作用[17]。HSP70屬HSP家族成員之一，機體正常狀態(tài)下細胞內(nèi)HSP70含量較少，當機體受到外界感染、炎癥因子刺激、組織損傷等可促進HSP70過度表達，以維持細胞正常功能[18]。臨床研究認為[19]，HSP70的機體內(nèi)源性保護機制包括穩(wěn)定細胞膜、抗氧化、促進正常蛋白合成、輔助蛋白質(zhì)正確折疊以及抑制細胞凋亡等。本研究結(jié)果顯示，子癇前期患者血清中HSP70高表達，且與患者子癇前期家族史、高血壓家族史、尿蛋白水平相關，與劉霞[20]研究中認為HSP70參與重度子癇前期的發(fā)生結(jié)果一致。

本文相關性分析顯示，MMP-9與NLRP3、HSP70均呈負相關，NLRP3與HSP70呈正相關，說明NLRP3、MMP-9、HSP70存在一定的相關性，可能共同參與子癇前期的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，NLRP3、MMP-9、HSP70在子癇前期患者血清中呈異常表達，且與患者子癇前期家族史、高血壓家族史、水腫、尿蛋白水平有關，為臨床上子癇前期的診治提供理論參考。