COVID-19恢復(fù)期患者血清SARS-CoV-2抗體變化與免疫狀況的相關(guān)性研究*

沈銀峰， 巴元明， 胡雅玲， 王林群， 李偉男， 袁 軍

湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，湖北省中醫(yī)院新冠肺炎康復(fù)門診，武漢 430070

目前，武漢的新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)患者經(jīng)過積極救治，全部進(jìn)入恢復(fù)期。因COVID-19是一種新發(fā)疾病，在恢復(fù)期患者中仍存在一些困擾醫(yī)療工作者的問題，如“復(fù)陽”、“持陽”、“再次感染”等[1-2]。我們以康復(fù)出院6個(gè)月后的COVID-19恢復(fù)期患者為研究對(duì)象，觀測(cè)其復(fù)診4周內(nèi)血清新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)特異性抗體(IgM/IgG)的變化和患者免疫狀況特點(diǎn)，并分析其相關(guān)性，為COVID-19恢復(fù)期患者的臨床診療提供參考。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2020年7月1日～8月31日在湖北省中醫(yī)院新冠肺炎康復(fù)門診復(fù)診的，曾診斷為COVID-19并康復(fù)出院達(dá)6個(gè)月的COVID-19恢復(fù)期患者110例，其中男性50例，女性60例，年齡(50.3±12.9)歲。所有的患者均符合《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

所有納入病例均簽署知情同意書，本研究在中國(guó)臨床試驗(yàn)注冊(cè)中心注冊(cè)(注冊(cè)號(hào)：ChiCTR2000034794)，并通過湖北省中醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號(hào)：HBZY2020-C26-01)。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

①出院時(shí)間小于6個(gè)月；②出院期間復(fù)陽；③出院期間出現(xiàn)感染事件；④出院期間做過外科手術(shù)；⑤孕產(chǎn)婦；⑥癌癥患者；⑦患有免疫系統(tǒng)疾??；⑧研究對(duì)象正在參加其他研究。

1.3 數(shù)據(jù)采集

本研究的觀察期為4周。在研究開始時(shí)，收集患者人口學(xué)數(shù)據(jù)(性別、年齡、急性期分型、慢性病情況)。在研究第0、2、4周收集研究對(duì)象的血清學(xué)檢查數(shù)據(jù)[SARS-CoV-2 IgM、SARS-CoV-2 IgG、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6)、淋巴細(xì)胞亞群(CD3+/CD8+/CD4+/NK細(xì)胞/B淋巴細(xì)胞)]。

檢查時(shí)于晨9點(diǎn)前空腹采集靜脈血，進(jìn)行檢測(cè)。SARS-CoV-2特異性IgM/IgG抗體檢測(cè)采用膠體金法，運(yùn)用SARS-CoV-2 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑盒(珠海麗珠試劑股份有限公司)進(jìn)行；血清hs-CRP采用全自動(dòng)血液分析儀[羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司]檢測(cè)；血清IL-6采用cobas e411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)[羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司]測(cè)定；通過BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)檢測(cè)并計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞亞群，所使用的FITC-抗人CD14、FITC-抗CD4、ECD-抗CD3、PC5-抗CD8、PE-抗CD19、PC7-抗CD16和抗CD45均購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 臨床特點(diǎn)

110例出院后6個(gè)月的恢復(fù)期患者，男性50例，女性60例；其中合并慢性心血管疾病者21例，合并慢性呼吸系統(tǒng)疾病者12例，合并慢性腦血管疾病者5例，合并糖尿病者10例。

我們對(duì)110例患者進(jìn)行分組：IgM(+)/IgG(+)組32例，IgM(-)/IgG(+)組38例，IgM(-)/IgG(-)組40例。IgM(+)/IgG(+)組、IgM(-)/IgG(+)組、IgM(-)/IgG(-)組在年齡、性別、住院期間分型和慢性疾病史均無顯著差異(P>0.05，表1)。

表1 110例患者的一般情況比較Table 1 Comparisons of characteristics in 110 patients

2.2 血清Hs-CRP和IL-6變化特點(diǎn)

所有患者在復(fù)診第0、2和4周的血清hs-CRP(0～3 mg/L)和IL-6(<7 pg/mL)值均在正常范圍內(nèi)，各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 淋巴細(xì)胞亞群整體特點(diǎn)

全體患者中，淋巴細(xì)胞亞群所有檢測(cè)項(xiàng)目均在正常范圍內(nèi)的，0周12例(10.9%)，2周15例(13.6%)，4周18例(16.4%)，組間差異比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2、3。

表2 110例患者淋巴細(xì)胞亞群整體特點(diǎn)[例(%)]Table 2 Characteristics of total lymphocyte subsets in 110 patients[n(%)]

2.4 淋巴細(xì)胞百分比比較

IgM(+)/IgG(+)組中CD8+T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞百分比與IgM(-)/IgG(+)組以及IgM(-)/IgG(-)組差異顯著，在復(fù)診第2周和第4周時(shí)，CD8+T淋巴細(xì)胞占比最高，而NK細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞占比最低(P<0.05)。各組在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的各種淋巴細(xì)胞占比比較，CD8+T淋巴細(xì)胞百分比在IgM(+)/IgG(+)組最高，IgM(-)/IgG(-)組最低(P<0.05)；NK細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞百分比，IgM(-)/IgG(-)組最高，IgM(+)/IgG(+)組最低(P<0.05)，見表3。

表3 110例患者淋巴細(xì)胞百分比比較Table 3 Comparison of the dynamic percentages changes in lymphocyte subsets in 110 patients

3 討論

COVID-19的病亡主要發(fā)生在急性期，且患者有肺和/或其他系統(tǒng)發(fā)生并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)[3]，患者在急性期還可表現(xiàn)出細(xì)胞免疫缺陷和過度的免疫反應(yīng)[4]?？贵w的產(chǎn)生是宿主對(duì)病毒感染的免疫反應(yīng)，抗SARS-CoV-2的血清IgM和IgG最早可在感染第4天被檢測(cè)到，并在癥狀出現(xiàn)后的第2周達(dá)到峰值[5]。血清抗體檢測(cè)可能有助于鑒定SARS-CoV-2核酸陰性的疑似患者，并有助于診斷無癥狀感染[6]。

恢復(fù)期患者抗體的檢測(cè)意義與急性期感染不同[7]。本研究招募了111例出院6個(gè)月后處于恢復(fù)階段的COVID-19患者，其中IgM(+)/IgG(-)1例，IgM(+)/IgG(+)32例，IgM(-)/IgG(+)38例，IgM(-)/IgG(-)組40例。因IgM(+)/IgG(-)僅1例，未納入研究。

Hs-CRP是一種非特異性炎癥標(biāo)志物，不受放療、化療和糖皮質(zhì)激素的影響。IL-6是SAP過度免疫反應(yīng)中的關(guān)鍵促炎細(xì)胞因子。hs-CRP和IL-6作為重要促炎細(xì)胞因子引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)并放大細(xì)胞因子風(fēng)暴[8]，它們是急性期COVID-19預(yù)后的潛在、可靠且易于應(yīng)用的預(yù)測(cè)因子[9]。而我們的研究結(jié)果表明，出院6個(gè)月后所有恢復(fù)期患者的hs-CRP和IL-6值均在正常范圍內(nèi)。

外周血中的淋巴細(xì)胞亞群在維持免疫功能中起著重要的作用，細(xì)胞之間相互限制和相互調(diào)節(jié)。研究表明，住院期間COVID-19患者的T細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)顯著降低[10-11]。Jiang等[12]研究提示，COVID-19患者的CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)被用作疾病嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，恢復(fù)期患者的血清SARS-CoV-2 IgM和IgG動(dòng)態(tài)變化與淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)，與炎性因子和急性期嚴(yán)重程度無關(guān)。本研究中，淋巴細(xì)胞亞群所有檢測(cè)項(xiàng)目均在正常范圍內(nèi)的恢復(fù)期患者，0周12例(10.9%)、2周15例(13.6%)、4周18例(16.4%)。IgM(+)/IgG(+)組在復(fù)診第2周和第4周時(shí)，CD8+T細(xì)胞的占比最高，而NK細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的占比最低。3組各時(shí)間點(diǎn)NK細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞百分比比較，IgM(-)/IgG(-)組最高，IgM(+)/IgG(+)組最低。

綜上所述，隨著COVID-19恢復(fù)期患者SARS-CoV-2抗體轉(zhuǎn)陰，其免疫狀態(tài)并未隨之恢復(fù)；血清IgM和IgG的動(dòng)態(tài)變化與恢復(fù)期患者的免疫狀態(tài)密切相關(guān)，IgM(+)以CD8+T細(xì)胞升高為主，IgM(-)則以NK細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞升高代償為主。