中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)技術(shù)與方法研究進(jìn)展

張 佳，楊懷瑾，馬麗霞，莊欣雅，余亦婷，周 悅，董 潔,3，謝 輝，陳 軍,3，陸兔林,3，嚴(yán)國(guó)俊,3*

1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210023

2.南京市莫愁中等專(zhuān)業(yè)學(xué)校，江蘇 南京 210017

3.江蘇省中醫(yī)外用藥開(kāi)發(fā)與應(yīng)用工程研究中心，江蘇 南京 210023

中藥品質(zhì)是指中藥相關(guān)產(chǎn)品的品種、產(chǎn)地、規(guī)格、等級(jí)、質(zhì)量及其與功效相關(guān)的屬性[1]。傳統(tǒng)中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)多在臨床用藥前依據(jù)藥材的外觀性狀以及某些特征判定其真?zhèn)蝺?yōu)劣，以求達(dá)到藥到病除之效?，F(xiàn)行的中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)則多借助各種科技手段，從中藥及相關(guān)產(chǎn)品的藥性理論、物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機(jī)制等角度進(jìn)行指標(biāo)化學(xué)成分或質(zhì)量標(biāo)志物的考察，從而進(jìn)一步完成質(zhì)量評(píng)價(jià)和標(biāo)準(zhǔn)制定。目前，中藥從藥材到飲片及制劑各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制及評(píng)價(jià)技術(shù)和方法研究已經(jīng)引起業(yè)界足夠的重視，然而大多數(shù)研究都是集中在某個(gè)單獨(dú)的環(huán)節(jié)進(jìn)行質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)。中藥從田間種植形成高品質(zhì)藥材開(kāi)始，經(jīng)歷采收、加工、炮制、制劑等多個(gè)處置過(guò)程，臨床療效能否順利發(fā)揮，取決于每個(gè)環(huán)節(jié)能否將其高品質(zhì)屬性完整順利傳遞。而品質(zhì)的傳遞，需要在每個(gè)環(huán)節(jié)做出符合中藥自身特點(diǎn)的科學(xué)評(píng)價(jià)。目前對(duì)中藥在各環(huán)節(jié)傳遞過(guò)程中品質(zhì)整體性變化的評(píng)價(jià)缺乏關(guān)注，對(duì)于中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程的完整性、專(zhuān)屬性的評(píng)價(jià)體系也未形成，本文對(duì)現(xiàn)階段可用于中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程的評(píng)價(jià)技術(shù)與方法進(jìn)行綜述，為中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)及制定符合中藥本身特色的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 中藥品質(zhì)傳遞

1.1 中藥品質(zhì)傳遞的含義

中藥品質(zhì)傳遞即具有特定功效的中藥固有品質(zhì)從藥材生長(zhǎng)起始，經(jīng)歷藥材加工、飲片炮制、制劑生產(chǎn)直至臨床應(yīng)用等系列環(huán)節(jié)，發(fā)生量、質(zhì)轉(zhuǎn)移的過(guò)程，最終目標(biāo)是保障中藥的安全和有效。臨床發(fā)揮藥效的中藥物質(zhì)基礎(chǔ)一般是由其遺傳特性與環(huán)境因素疊加形成的代謝產(chǎn)物或是加工后的再生物質(zhì)，因此對(duì)于中藥品質(zhì)傳遞所涉及的一系列過(guò)程（如中藥材、中藥飲片、中藥提取物、中藥制劑、臨床應(yīng)用等）均需要加以控制，進(jìn)而保證中藥品質(zhì)和保障臨床療效。

1.2 中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)的重要性

近年來(lái)，中藥現(xiàn)代化發(fā)展在傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別基礎(chǔ)上，通過(guò)引入化學(xué)藥的評(píng)價(jià)方式對(duì)中藥材、中藥飲片、中藥提取物、中藥制劑等中藥生產(chǎn)鏈的各環(huán)節(jié)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，大大地提高了中藥品質(zhì)控制水平。然而，受限于中藥本身的復(fù)雜性，多數(shù)中藥藥效物質(zhì)尚不清晰，個(gè)別指標(biāo)性成分用于品質(zhì)評(píng)價(jià)的專(zhuān)屬性、代表性欠缺，加之中藥及制劑在生產(chǎn)過(guò)程中需經(jīng)歷多個(gè)環(huán)節(jié)，對(duì)于其在傳遞過(guò)程中的品質(zhì)整體性變化無(wú)法得到考察，因而建立從中藥種植養(yǎng)殖到臨床應(yīng)用的全產(chǎn)業(yè)鏈的品質(zhì)傳遞過(guò)程關(guān)鍵評(píng)價(jià)技術(shù)體系是目前保障中藥質(zhì)量和療效的關(guān)鍵。中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及目前應(yīng)用的評(píng)價(jià)技術(shù)方法見(jiàn)圖1。

圖1 中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程示意圖Fig.1 Schematic diagram of quality transfer process of traditional Chinese medicine

2 中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)技術(shù)與方法

中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)的技術(shù)與方法眾多且有些已成熟應(yīng)用，然而大多數(shù)只是針對(duì)于中藥生產(chǎn)的單個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)和檢測(cè)，以下列舉用于中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程的評(píng)價(jià)技術(shù)和方法，并通過(guò)文獻(xiàn)實(shí)例分析其在傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)中的優(yōu)缺點(diǎn)。

2.1 近紅外光譜（near infrared reflectance spectroscopy，NIRS）技術(shù)

近紅外是指在整個(gè)紅外光譜范圍中波長(zhǎng)較短的一類(lèi)電磁波，通過(guò)近紅外檢測(cè)分析，可憑借分子振動(dòng)吸收的信息不同來(lái)實(shí)現(xiàn)物質(zhì)檢測(cè)分析的目的[2]。近年來(lái)，隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的迅速發(fā)展，NIRS 技術(shù)與化學(xué)計(jì)量學(xué)有機(jī)結(jié)合，使其快速發(fā)展形成一種分析速度快、效率高、免預(yù)處理、無(wú)損傷、適用于在線(xiàn)分析的現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)，成為了中藥鑒別和質(zhì)量控制的佳選[3]。

以苦參為例[4-7]，多位學(xué)者采用NIRS 技術(shù)對(duì)苦參藥材、飲片、提取物再到復(fù)方苦參注射液等各個(gè)中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程環(huán)節(jié)產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)量控制。研究發(fā)現(xiàn)，NIRS 技術(shù)可以發(fā)現(xiàn)各個(gè)中藥及其相關(guān)環(huán)節(jié)產(chǎn)物的組織結(jié)構(gòu)以及化學(xué)成分上的微小差別，并通過(guò)化學(xué)計(jì)量學(xué)算法可實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥炮制前后以至生產(chǎn)到制劑過(guò)程中各個(gè)環(huán)節(jié)產(chǎn)物多化學(xué)指標(biāo)或非化學(xué)指標(biāo)（如水分）等的實(shí)時(shí)在線(xiàn)監(jiān)測(cè)，進(jìn)而更好掌握苦參品質(zhì)傳遞過(guò)程的變化規(guī)律。該實(shí)例表明NIRS 技術(shù)有望用于評(píng)價(jià)中藥材到飲片、提取物再到制劑的品質(zhì)傳遞過(guò)程。作為一種高新技術(shù)，NIRS 技術(shù)具有無(wú)前期預(yù)處理、高效便捷、無(wú)損環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)[8]，目前被廣泛應(yīng)用于中藥及其相關(guān)樣品的定性和定量考察，但仍存在一定的局限性：雖然NIRS 信息量大，但由于吸收強(qiáng)度弱，提取有效信息利用率低，對(duì)于需從復(fù)雜、重疊、變動(dòng)的光譜中提取復(fù)雜樣品微弱信息，識(shí)別非常困難，易出現(xiàn)誤識(shí)別，影響化合物測(cè)量的準(zhǔn)確性；另外，該技術(shù)為一種間接的分析技術(shù)，藥物定性定量分析模型的建立耗時(shí)耗力，無(wú)法全面滿(mǎn)足當(dāng)前數(shù)據(jù)庫(kù)模型的需求，極大地限制了NIRS 技術(shù)的使用。因此，擴(kuò)大和完善藥物的光譜模型系統(tǒng)、提高模型的穩(wěn)定性和精準(zhǔn)率、開(kāi)拓NIRS 技術(shù)分析的新思路等將成為后期研究的重點(diǎn)[9]。

2016年，劉昌孝院士[10]提出了中藥質(zhì)量標(biāo)志物的概念（即與有效性以及安全性直接相關(guān)的化學(xué)成分），為中藥的品質(zhì)研究與應(yīng)用提供了新思路。目前，已有研究人員以金銀花、沉香、當(dāng)歸等[11-14]中藥材建立了基于質(zhì)量標(biāo)志物的中藥功效近紅外快速評(píng)價(jià)方法；采用NIRS 結(jié)合偏最小二乘法可實(shí)現(xiàn)對(duì)梔子、獨(dú)活、白芷、防風(fēng)、丹參、連翹、白芍等藥材[15-16]和相關(guān)炮制品[17-19]、提取物[20]以及相關(guān)丸劑、注射劑、片劑、口服液、復(fù)方滴丸、配方顆粒等[21-29]藥物中活性成分的同時(shí)測(cè)定。提示NIRS 技術(shù)有望實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥材、中藥飲片、中藥提取物、中藥制劑品質(zhì)傳遞過(guò)程的評(píng)價(jià)，可針對(duì)中藥質(zhì)量標(biāo)志物的傳遞變化，結(jié)合臨床療效進(jìn)而把控中藥品質(zhì)。

2.2 智能感官技術(shù)

傳統(tǒng)的中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)主要從外觀性狀判斷藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣，即“辨狀論質(zhì)”[30-31]。但其檢測(cè)結(jié)果存在只重表象忽視內(nèi)在、不易量化等問(wèn)題。近年來(lái)，智能感官技術(shù)快速發(fā)展，通過(guò)模擬人體真實(shí)感官的功能，逐漸發(fā)展出電子眼、電子舌、電子鼻等較成熟的技術(shù)，并在藥材品種鑒定、制劑工藝優(yōu)化、藥品質(zhì)量控制和新藥研發(fā)等多個(gè)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用[32]。

黎量[33]利用電子眼、電子鼻、電子舌等智能感官技術(shù)對(duì)山楂藥材到飲片的品質(zhì)傳遞過(guò)程各環(huán)節(jié)產(chǎn)物進(jìn)行了性狀（顏色、氣、味）特征數(shù)值化，實(shí)現(xiàn)了對(duì)山楂不同飲片準(zhǔn)確高效的鑒別區(qū)分，并證實(shí)了山楂性狀與化學(xué)成分的顯著相關(guān)性，為“辨狀論質(zhì)”經(jīng)驗(yàn)理論的科學(xué)性作了巧步闡釋。Shafiqul Islam 等[34]利用電子鼻證明了東革阿里提取物揮發(fā)油中某些成分與電子鼻響應(yīng)信號(hào)的高度相關(guān)性。莊家俊等[35]則通過(guò)電子鼻獲取到不同生產(chǎn)批次的中成藥（百草油）的氣味特征信息，并將其與以往香氣質(zhì)量較佳的某批次樣品的氣味信息進(jìn)行匹配鑒別，可實(shí)現(xiàn)不同批次百草油產(chǎn)品的鑒別分類(lèi)以及香氣質(zhì)量的在線(xiàn)監(jiān)控。

山楂藥材及飲片、東革阿里提取物、百草油的實(shí)例表明電子眼、電子舌、電子鼻等智能感官技術(shù)可作為中藥材到飲片、提取物以及制劑的品質(zhì)傳遞過(guò)程的評(píng)價(jià)方法。智能感官技術(shù)兼有人類(lèi)感覺(jué)器官和現(xiàn)代分析技術(shù)的雙重優(yōu)勢(shì)，具有靈敏度高、可靠性強(qiáng)、重復(fù)性好、快捷方便等特點(diǎn)，擁有良好的應(yīng)用前景和發(fā)展?jié)摿36]。但除了這些優(yōu)勢(shì)，智能感官技術(shù)也存在一些局限性，如適用范圍有限、無(wú)法做到模型傳遞、信息豐富度不足等。

智能感官技術(shù)可利用中藥各環(huán)節(jié)產(chǎn)物的性狀特征評(píng)價(jià)中藥傳遞過(guò)程品質(zhì)的優(yōu)劣變化，但由于停留在性狀鑒別，無(wú)法深入考察其整體性品質(zhì)變化（如量質(zhì)轉(zhuǎn)移率等），后期可以考慮與其他化學(xué)或生物檢測(cè)設(shè)備聯(lián)合使用，對(duì)中藥在傳遞過(guò)程的品質(zhì)進(jìn)行綜合分析。

2.3 生物活性測(cè)定技術(shù)

生物活性測(cè)定技術(shù)是以實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)為基礎(chǔ)，通過(guò)比較對(duì)照品和供試品對(duì)生物體（包括整體動(dòng)物、離體器官與組織和生物標(biāo)記物等）的特定生物效應(yīng)，結(jié)合生物統(tǒng)計(jì)學(xué)，對(duì)中藥整體質(zhì)量和活性進(jìn)行評(píng)價(jià)和控制，其測(cè)定技術(shù)包括生物效價(jià)測(cè)定、生物活性限值測(cè)定和生物毒價(jià)測(cè)定[37]。該技術(shù)從藥物活性的角度出發(fā)，可以彌補(bǔ)中藥化學(xué)評(píng)價(jià)的不足，更好地保證中藥材、飲片、提取物、制劑等各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量一致性，反映中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程的變化趨勢(shì)[37-38]。

2.3.1 生物效價(jià)測(cè)定技術(shù) 生物效價(jià)測(cè)定技術(shù)是以藥理為基礎(chǔ)，利用生物體比較供試品與對(duì)照品在一定條件下所產(chǎn)生的各種可量化生理指標(biāo)或生物學(xué)特性的變化，進(jìn)而評(píng)價(jià)藥物生物活性的一種定量方法[39]。生物效價(jià)可以關(guān)聯(lián)中藥功效，較好地反映中藥產(chǎn)品的整體活性，適用于化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)不明確、難以通過(guò)常規(guī)理化方法評(píng)價(jià)其臨床生物活性的中藥及相關(guān)制劑[40]。

李會(huì)芳等[41]采用“量反應(yīng)平行線(xiàn)法”對(duì)大黃藥材到飲片品質(zhì)傳遞過(guò)程中的致瀉效價(jià)進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，生大黃的致瀉效價(jià)在炮制后顯著下降，且各類(lèi)大黃產(chǎn)物的致瀉效價(jià)由大到小依次是：生大黃、酒大黃、熟大黃、大黃炭。王伽伯等[42]則選用同樣的方法對(duì)大黃藥材到含大黃的復(fù)方制劑品質(zhì)傳遞過(guò)程中致瀉效價(jià)的變化進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大黃藥材質(zhì)量波動(dòng)較大，效價(jià)最高的唐古特大黃與效價(jià)最低的掌葉大黃相差5 倍；三黃片的致瀉效價(jià)相當(dāng)于中等效價(jià)的大黃藥材；排毒養(yǎng)顏膠囊因處方中還含有芒硝等其他瀉下藥，按處方中大黃的用量折算效價(jià)較高。

生物效價(jià)測(cè)定技術(shù)在掌葉大黃和唐古特大黃、酒大黃和熟大黃以及大黃炭、三黃片和排毒養(yǎng)顏膠囊致瀉效價(jià)的測(cè)定表明該技術(shù)后期可以應(yīng)用于中藥藥材到飲片再到制劑的品質(zhì)傳遞過(guò)程的評(píng)價(jià)，為建立中藥品質(zhì)傳遞評(píng)價(jià)體系提供有力的支持。生物效價(jià)測(cè)定法可以很好地反映中藥的整體活性和臨床療效。如采用實(shí)時(shí)細(xì)胞電子分析技術(shù)對(duì)不同批次的三七和復(fù)方丹參滴丸建立時(shí)間劑量相關(guān)性細(xì)胞反應(yīng)曲線(xiàn)，以細(xì)胞指數(shù)值為考察指標(biāo)，比較各批次藥物的生物活性，從而進(jìn)行品質(zhì)評(píng)價(jià)[43-45]。

生物效價(jià)測(cè)定技術(shù)一般選擇與藥品的功能主治、作用機(jī)制有關(guān)的細(xì)胞等價(jià)格較高的生物體，除了需要一定的培養(yǎng)周期，還需要充分的方法學(xué)考察，以保障評(píng)價(jià)結(jié)果的穩(wěn)定可靠。通常情況下，生物效價(jià)測(cè)定只能檢測(cè)中藥“功能主治”中的一種或多種，再加上中藥藥效物質(zhì)基準(zhǔn)、生物標(biāo)志物和專(zhuān)屬性靶點(diǎn)等的不確定性，無(wú)法全面反映中藥整體性，很大程度上限制了生物效價(jià)測(cè)定技術(shù)在中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)中的應(yīng)用[46]。在中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程，該技術(shù)通過(guò)藥效相關(guān)的生物指標(biāo)可以較好地反映中藥品質(zhì)，具有一定的代表性，但所選擇的單一或多個(gè)指標(biāo)能否代表中藥整體屬性還未可知。后期可考慮結(jié)合中藥中指標(biāo)性化學(xué)成分或質(zhì)量標(biāo)志物的變化，以及中藥在傳遞過(guò)程中的性狀變化，多指標(biāo)、多途徑地評(píng)價(jià)中藥品質(zhì)變化，更好地把控臨床療效。

2.3.2 生物活性限值測(cè)定技術(shù) 生物活性的存在是實(shí)現(xiàn)藥效作用的前提和基礎(chǔ)，生物活性限值測(cè)定法主要針對(duì)無(wú)法建立生物效價(jià)測(cè)定的中藥品種，是一種重復(fù)性較好的定性或半定量評(píng)價(jià)方法，可采用中藥成分或化學(xué)藥品作為方法可靠性驗(yàn)證用對(duì)照品[37]。以下總結(jié)了應(yīng)用于中藥品質(zhì)傳遞環(huán)節(jié)的生物活性限值測(cè)定報(bào)道，見(jiàn)表1。

表1 生物活性限值測(cè)定技術(shù)在中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)中的應(yīng)用Table 1 Application of biological activity limit measurement technology in quality transfer process evaluation of traditional Chinese medicine

生物活性限值測(cè)定技術(shù)在天麻超微粉、制附子、甘草水提物凍干粉、紅花注射液的應(yīng)用表明該技術(shù)后期可用于中藥材到中藥飲片，再到水提物以及制劑的品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)。該方法在達(dá)到某一特定值（如給藥量）后，才會(huì)表現(xiàn)出某效應(yīng)，具有半定量、定性的特點(diǎn)，主要適用于未能建立生物效價(jià)測(cè)定的中藥及其制劑，是生物效價(jià)測(cè)定技術(shù)的一種補(bǔ)充。

2.3.3 生物毒價(jià)測(cè)定技術(shù) 中藥毒性因其微小毒性、綜合毒性難以被現(xiàn)代生物技術(shù)檢測(cè)的局限，一直是中藥安全性評(píng)價(jià)的關(guān)鍵問(wèn)題之一[50]。目前，中藥毒性評(píng)價(jià)常從化學(xué)指標(biāo)和生物指標(biāo)2 個(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，但由于中藥成分復(fù)雜，化學(xué)毒性評(píng)價(jià)僅僅針對(duì)部分有毒成分進(jìn)行考察，仍不夠代表中藥整體毒性，存在一定的局限性。而生物毒價(jià)評(píng)價(jià)則關(guān)聯(lián)臨床，可以更為客觀準(zhǔn)確地直接反映中藥整體毒性。后期可以將毒價(jià)作為統(tǒng)一評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)中藥材至中藥制劑的品質(zhì)傳遞各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行毒性控制，也可以根據(jù)毒價(jià)調(diào)整臨床用藥劑量，確保用藥安全合理[51]。

呂旸等[52-53]對(duì)不同產(chǎn)地的生何首烏、不同炮制方法的制何首烏、不同提取方式的何首烏提取物樣品、含何首烏的中成藥（白蝕丸、坤寶丸、腦脈泰膠囊等）品質(zhì)傳遞過(guò)程肝毒價(jià)進(jìn)行了綜合考察，先通過(guò)CCK-8 法[54]檢測(cè)正常人肝L02 細(xì)胞的抑制率并進(jìn)行三次方的數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化，再采用量反應(yīng)平行線(xiàn)法計(jì)算出各個(gè)樣品的毒價(jià)。研究表明，生何首烏藥材的毒價(jià)初步估計(jì)在310～350 U/g 波動(dòng)；制何首烏的毒價(jià)限度初步估計(jì)為130 U/g，且其炮制品的毒價(jià)隨著炮制時(shí)間的增加而降低；何首烏50%乙醇提取物的毒性較強(qiáng)，可能存在較大的肝損害風(fēng)險(xiǎn)；含何首烏的中成藥中僅白蝕丸與腦脈泰膠囊的毒價(jià)超過(guò)制何首烏的毒價(jià)限度，后期使用應(yīng)高度重視。

生物毒價(jià)測(cè)定技術(shù)在何首烏藥材、炮制品、提取物、復(fù)方制劑中的應(yīng)用提示該技術(shù)有望成為有毒中藥從中藥材到飲片，再到提取物及制劑的品質(zhì)傳遞評(píng)價(jià)新方法。生物毒價(jià)測(cè)定技術(shù)具有靈敏度高、快速簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，可為全面評(píng)價(jià)中藥品質(zhì)傳遞的安全性提供參考。該檢測(cè)技術(shù)多是依靠離體細(xì)胞、組織或器官等生物體在某一特定條件下的定量藥理或毒理測(cè)定結(jié)果，與中藥臨床作用并不完全一致，但是作為安全性指標(biāo)，在中藥全產(chǎn)業(yè)鏈的品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)中具有重要意義[40]。

在中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程中，其他技術(shù)多側(cè)重于考察中藥功效成分的傳遞，而生物毒價(jià)測(cè)定技術(shù)的關(guān)注點(diǎn)則是其毒效的傳遞，注重的是藥物的安全性，屬于中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)中的輔助手段。但中藥的毒性往往不僅僅作用于某個(gè)細(xì)胞或其他生物體，單純考察某個(gè)生物學(xué)指標(biāo)的變化，并不能判斷中藥在品質(zhì)傳遞過(guò)程毒性轉(zhuǎn)移的多少，無(wú)法全面地評(píng)價(jià)其品質(zhì)屬性的變化。后期可結(jié)合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或臨床實(shí)驗(yàn)，篩選出中藥毒性相關(guān)的多項(xiàng)生物學(xué)指標(biāo)、化學(xué)指標(biāo)或其他指標(biāo)從多個(gè)角度對(duì)中藥傳遞過(guò)程進(jìn)行品質(zhì)評(píng)價(jià)，彌補(bǔ)單指標(biāo)考察的缺陷。

2.4 效應(yīng)成分指數(shù)評(píng)控技術(shù)

效應(yīng)成分指數(shù)將化學(xué)評(píng)價(jià)的精準(zhǔn)性與生物評(píng)價(jià)關(guān)聯(lián)藥效和安全性的優(yōu)勢(shì)相融合，是一種綜合量化的評(píng)價(jià)指標(biāo)。效應(yīng)成分指數(shù)評(píng)控技術(shù)與中藥臨床功效與活性相關(guān)聯(lián)，克服了目前中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)片面、分散、脫離藥效等弊端，適用于藥效物質(zhì)及活性成分相對(duì)明確的中藥的有效性、安全性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)[1]。

對(duì)不同批次黃連藥材（味連、雅連、云連）、黃連飲片煎煮液、黃連水提物的品質(zhì)傳遞過(guò)程進(jìn)行綜合考察，利用HPLC 法測(cè)定各樣品中的抗菌活性成分（黃連堿、小檗堿、藥根堿、表小檗堿和巴馬汀5 個(gè)生物堿成分），采用微量量熱法檢測(cè)其配制的提取物中5 個(gè)化學(xué)成分的半數(shù)抑制濃度（median inhibition concentration，IC50），而后將IC50的倒數(shù)歸一化，得到各成分藥效權(quán)重，進(jìn)而計(jì)算黃連抗痢疾桿菌效應(yīng)成分指數(shù)，同時(shí)結(jié)合偏最小二乘判別分析進(jìn)行“量-效”相關(guān)性分析[55-57]。結(jié)果表明，各批次黃連樣品的抗菌活性與效應(yīng)成分指數(shù)為顯著正相關(guān)，即效應(yīng)成分指數(shù)隨著黃連抗菌活性的增強(qiáng)而增大。張慧等[58]建立基于效應(yīng)成分指數(shù)的雙黃連制劑質(zhì)量控制方法，通過(guò)抗生素微生物檢定法檢測(cè)不同來(lái)源雙黃連制劑的抗菌效價(jià)，結(jié)合HPLC 定量指紋圖譜與偏最小二乘-判別分析法進(jìn)行“量-效”相關(guān)性分析，篩選出野黃芩苷、綠原酸、黃芩苷、連翹脂苷A 為雙黃連制劑的抗菌功效成分，藥效權(quán)重系數(shù)證實(shí)所測(cè)得的抗菌效價(jià)與功效成分指數(shù)呈正相關(guān)，可實(shí)現(xiàn)以效應(yīng)成分指數(shù)進(jìn)行雙黃連制劑的質(zhì)量評(píng)控。

效應(yīng)成分指數(shù)評(píng)控技術(shù)有望成為中藥材到中藥飲片再到中藥提取物和中藥制劑的品質(zhì)傳遞品控方法的有益補(bǔ)充，為建立中藥品質(zhì)傳遞評(píng)價(jià)體系提供有力的支持。效應(yīng)成分指數(shù)具有簡(jiǎn)單易行、能定量定效地表征中藥品質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)，可在臨床中藥辨質(zhì)用藥、優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)等方面提供技術(shù)支持，但藥材中與臨床功效相關(guān)聯(lián)的活性成分的確定以及這些活性成分之間的協(xié)同或拮抗作用的表征等都是效應(yīng)成分指數(shù)評(píng)控技術(shù)需要面臨的挑戰(zhàn)[59]。

效應(yīng)成分指數(shù)評(píng)控技術(shù)將指標(biāo)性化學(xué)成分與藥效結(jié)合，使得中藥品質(zhì)量化，從而更好地評(píng)價(jià)中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程。但該法將各個(gè)成分單獨(dú)分析，忽略了中藥各成分之間的相互協(xié)同拮抗作用，缺乏整體性，無(wú)法代表中藥品質(zhì)整體屬性。后期可考慮從中藥整體性出發(fā)，考察中藥材、中藥飲片、中藥提取物以及中藥制劑這整個(gè)品質(zhì)傳遞過(guò)程的各個(gè)環(huán)節(jié)產(chǎn)物中質(zhì)量標(biāo)志物的協(xié)同作用，建立對(duì)應(yīng)的效應(yīng)成分協(xié)同指數(shù)，彌補(bǔ)該技術(shù)在中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)中的不足。

2.5 生物效應(yīng)表達(dá)譜

生物效應(yīng)表達(dá)譜是指藥物在特定的條件下作用于生物體所表達(dá)出的一組特征生物學(xué)信息或圖譜，通常具有時(shí)間效應(yīng)或劑量-效應(yīng)相關(guān)性[1]，包括生物熱活性指紋圖譜、蛋白質(zhì)表達(dá)譜、基因表達(dá)譜、生物自顯影薄層色譜、細(xì)胞表型特征譜、代謝物表達(dá)譜等。與經(jīng)典生物效價(jià)檢測(cè)相比，生物效應(yīng)表達(dá)譜能反映藥物作用于生物的更多指紋和（或）動(dòng)態(tài)信息，具有指紋性或?qū)傩?，不僅可以鑒別中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣，還可用于中藥質(zhì)量波動(dòng)監(jiān)測(cè)[1]。

樊冬麗[60]針對(duì)生黃連、各種黃連炮制品（醋制黃連、膽汁制黃連、鹽制黃連、吳萸黃連、姜制黃連、酒制黃連）及其與吳茱萸配伍類(lèi)方（甘露散、左金丸、反左金丸、茱萸丸）綜合考察其品質(zhì)傳遞過(guò)程的生物效應(yīng)表達(dá)譜，采用多元統(tǒng)計(jì)方法，綜合分析各樣品作用在金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和痢疾桿菌的生物熱活性指紋圖譜與常規(guī)藥理活性、化學(xué)組分的相關(guān)性。結(jié)果表明，各樣品的生物熱活性圖譜與化學(xué)組分、藥理活性也具有顯著相關(guān)性。李俊賢[61]將各品種不同濃度的黃連水提物的化學(xué)指紋圖譜與其作用在痢疾桿菌的生物熱活性指紋圖譜結(jié)合建立相應(yīng)的“譜-效”關(guān)系，找出了黃連中與抑制痢疾桿菌生長(zhǎng)相關(guān)的活性物質(zhì)（黃連堿、巴馬汀、藥根堿、小檗堿），與《中國(guó)藥典》所規(guī)定的黃連指標(biāo)性成分一致。

以黃連為例，可選用黃連藥材到飲片、再到水提物和制劑品質(zhì)傳遞過(guò)程抗痢疾桿菌作用的生物熱活性指紋圖譜和化學(xué)組分、常規(guī)藥理活性的相關(guān)性評(píng)價(jià)黃連內(nèi)在品質(zhì)傳遞變化，為中藥品質(zhì)傳遞評(píng)價(jià)體系研究提供了新的思路。此外，多項(xiàng)研究將生物熱活性圖譜與熱動(dòng)力學(xué)參數(shù)等結(jié)合，定性定量地表征中藥注射劑的功效差異[62]，建立了注射用益氣復(fù)脈凍干粉、注射用雙黃連凍干粉、茵梔黃注射液、清開(kāi)靈注射液等中藥注射劑的熱活性指紋圖譜[51]。生物效應(yīng)表達(dá)譜可提供專(zhuān)屬性、特異性較強(qiáng)的二維信息，全面反映各個(gè)樣品的生物學(xué)信息，進(jìn)而靈敏準(zhǔn)確地區(qū)分不同批次產(chǎn)品、不同處理樣品及污染樣品的生物活性差異，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)品質(zhì)傳遞過(guò)程藥物的質(zhì)量信息，為其質(zhì)量一致性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)提供新的方法[39]，是對(duì)化學(xué)特征圖譜的有益補(bǔ)充[62]。

在中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程中，生物效應(yīng)表達(dá)譜可建立中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程各個(gè)環(huán)節(jié)產(chǎn)物的特征生物學(xué)圖譜，實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥品質(zhì)的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。但該技術(shù)也僅停留在生物學(xué)單一指標(biāo)的考察，后期可考慮在此研究基礎(chǔ)上，結(jié)合中藥化學(xué)指標(biāo)以及性狀變化規(guī)律，建立一個(gè)多指標(biāo)、多途徑、多層次的中藥品質(zhì)動(dòng)態(tài)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)體系。

2.6 HPLC 指紋圖譜法結(jié)合多成分含量測(cè)定

HPLC 指紋圖譜法主要是將HPLC 與多種檢測(cè)器結(jié)合，針對(duì)中藥復(fù)雜體系中不同的化合物（已知和未知成分）建立多波長(zhǎng)指紋圖譜[63-64]。2000年，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布了《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求（暫行）》，正式啟動(dòng)現(xiàn)代中藥質(zhì)量控制模式，進(jìn)一步促進(jìn)了中藥材、中藥飲片、中藥提取物、中藥制劑等中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程多環(huán)節(jié)質(zhì)量控制創(chuàng)新體系的建立[65]。

以丹參為例，多項(xiàng)研究[66-69]采用HPLC 法可對(duì)丹參原藥材、飲片、提取物、復(fù)方制劑（涉及體外釋藥和體內(nèi)吸收）的品質(zhì)傳遞過(guò)程藥物成分的特征圖譜進(jìn)行相關(guān)性研究（圖2）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，丹參在從原藥材到飲片，再到提取物、復(fù)方制劑這一品質(zhì)傳遞過(guò)程中各環(huán)節(jié)均含有丹酚酸B 等特征共有峰，藥物之間的相似度和化學(xué)成分相關(guān)性也均較好。HPLC 指紋圖譜法可通過(guò)考察中藥指標(biāo)性成分特征圖譜的變化和特征峰的歸屬整體性評(píng)價(jià)中藥在傳遞過(guò)程的品質(zhì)變化，后期可應(yīng)用于中藥品質(zhì)控制，進(jìn)而保證中藥傳遞過(guò)程中品質(zhì)的一致性和穩(wěn)定性。

圖2 HPLC 指紋圖譜法在中藥品質(zhì)傳遞中的應(yīng)用Fig.2 Application of HPLC fingerprint in quality transfer of traditional Chinese medicine

近年來(lái)，HPLC 指紋圖譜因具有靈敏度高、選擇性好、柱效高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，在各種指紋圖譜中應(yīng)用最廣，多用于中藥傳遞過(guò)程中各環(huán)節(jié)產(chǎn)物的品質(zhì)分析[70]。但是，該法僅僅依靠幾個(gè)指標(biāo)性成分評(píng)價(jià)中藥品質(zhì)，忽略了中藥的整體性。且其所得到的關(guān)于指標(biāo)性成分特征圖譜的變化和特征峰的歸屬信息，只能說(shuō)明各成分“量”轉(zhuǎn)移的有無(wú)，無(wú)法知曉中藥“量”“質(zhì)”轉(zhuǎn)移的多少，也無(wú)法像質(zhì)量標(biāo)志物一樣知道其與藥效的關(guān)聯(lián)性[71]。所以，針對(duì)中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程，后期可考慮通過(guò)中藥特征峰的峰面積絕對(duì)值的計(jì)算考察品質(zhì)傳遞過(guò)程中指標(biāo)性成分/ 質(zhì)量標(biāo)志物的量及量質(zhì)轉(zhuǎn)移率，或結(jié)合多指標(biāo)成分的測(cè)定[如一測(cè)多評(píng)法（quantitative analysis of multicomponents by single marker，QAMS）]更好地評(píng)價(jià)中藥傳遞過(guò)程的品質(zhì)變化特征和規(guī)律。

關(guān)于多成分含量測(cè)定主要采用QAMS。QAMS是一種可準(zhǔn)確定量已知成分的經(jīng)濟(jì)方法，一般先確定待測(cè)樣品中有代表性成分的含量，然后根據(jù)相對(duì)校正因子計(jì)算待測(cè)樣品中其他多種成分的含量，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)多指標(biāo)同步控制[72]。該法不僅實(shí)現(xiàn)了多指標(biāo)成分的同時(shí)檢測(cè)，還解決了因?qū)φ掌穬r(jià)格昂貴或難以提供導(dǎo)致檢測(cè)難以進(jìn)行的難題[73]。目前已成功應(yīng)用于中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程中藥材到飲片及復(fù)方制劑的含量測(cè)定和質(zhì)量控制中[74]。

以白芍為例進(jìn)行成分分析，見(jiàn)圖3。該法在白芍藥材[75]到飲片[76]以及制劑[77-81]中品質(zhì)傳遞過(guò)程的應(yīng)用提示：中藥從藥材到飲片再到制劑的品質(zhì)傳遞過(guò)程可以通過(guò)QAMS 測(cè)得各個(gè)環(huán)節(jié)的化學(xué)成分含量，進(jìn)而考察整個(gè)傳遞過(guò)程中藥品質(zhì)的變化，以達(dá)到 中藥品質(zhì)把控的目的，更好地應(yīng)用于臨床。QAMS 實(shí)現(xiàn)了中藥中多成分同時(shí)測(cè)定，和中藥指紋圖譜等技術(shù)聯(lián)用可彌補(bǔ)其模糊性的缺陷，且QAMS 操作方便、快捷，大大提高了中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)的效率[82]。但QAMS在實(shí)際應(yīng)用中，除了需考慮某些因素對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生的影響（如所用色譜條件是否與文獻(xiàn)保持一致、每個(gè)色譜峰的測(cè)定是否在排除干擾的條件下進(jìn)行、色譜柱的差異對(duì)校正因子產(chǎn)生的影響、對(duì)照品生產(chǎn)廠商與批次及存放條件對(duì)其質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響），還需要考慮實(shí)驗(yàn)儀器的精密度以及人為誤差對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響[74]。

圖3 QAMS 在中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)中的應(yīng)用Fig.3 Application of QAMS in equality transfer process evaluation of traditional Chinese medicine

對(duì)于中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程的評(píng)價(jià)，QAMS 僅從化學(xué)指標(biāo)的角度考察各環(huán)節(jié)產(chǎn)物指標(biāo)性化學(xué)成分的變化，這些成分是否是發(fā)揮整體性療效的物質(zhì)基礎(chǔ)也并不明晰，還需進(jìn)一步的整體動(dòng)物藥效或臨床研究驗(yàn)證，才能真正反映該中藥品質(zhì)傳遞是否完整。后期可以結(jié)合其他相關(guān)分析或統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，選擇與中藥療效相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)志物建立中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)體系，結(jié)合臨床療效，更好地把握中藥在傳遞過(guò)程的品質(zhì)變化規(guī)律。

2.7 原子熒光光譜法

在中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程除了需對(duì)其有效成分（活性成分）進(jìn)行有效控制，還需要對(duì)中藥中直接關(guān)系到人體健康的微量有害元素含量進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定和控制[83]。原子熒光光譜法可通過(guò)測(cè)量原子熒光強(qiáng)度獲得待測(cè)元素的含量特點(diǎn)，因具有分析靈敏度高、氣相干擾少、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、適合于多元素分析等優(yōu)點(diǎn)，多用于測(cè)定中藥中痕量和超痕量的砷、硒、鉛等多種元素[84]。

張艷等[85]選用微波消解-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法對(duì)云木香中汞、砷、鉛元素進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果表明，砷、汞、鉛的檢出限分別為0.043、0.036、0.531 μg/L。李燕[86]采用微波消解-原子熒光光譜法檢測(cè)中藥（桔梗根、山楂葉、忍冬葉、槐花、丹參粉、地黃）中砷和硒的含量，測(cè)得砷和硒的檢出限分別為0.087、0.123 μg/L。

中藥中的有害元素往往是在種植或養(yǎng)殖過(guò)程中引入的，目前主要通過(guò)加強(qiáng)無(wú)公害種植以減少中藥有害元素的危害。考慮到中藥材有害元素在飲片尤其是制劑中的含量較低，且相關(guān)評(píng)價(jià)技術(shù)及方法報(bào)道也較少，研究人員一般采用原子熒光光譜技術(shù)對(duì)中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程中的前端中藥材和飲片進(jìn)行品質(zhì)評(píng)價(jià)，以控制中藥品質(zhì)傳遞的源頭。但由于中藥材中金屬元素含量相對(duì)較低且基體結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，后期還需進(jìn)一步提高檢測(cè)方法的重現(xiàn)性及靈敏度[87]。

3 結(jié)語(yǔ)與展望

目前多元整體的中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)方法研究已逐漸成為研究熱點(diǎn)，有些成熟的技術(shù)與方法已應(yīng)用于中藥品質(zhì)傳遞的部分環(huán)節(jié)評(píng)價(jià)中。如近紅外光譜技術(shù)可對(duì)中藥進(jìn)行定性或定量，建立基于質(zhì)量標(biāo)志物的中藥功效快速評(píng)價(jià)方法，利用此特點(diǎn)可實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程動(dòng)態(tài)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)；智能感官技術(shù)通過(guò)模擬人類(lèi)感官并結(jié)合現(xiàn)代分析技術(shù)可快速靈敏地分析出中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程中藥物的性狀變化；生物評(píng)價(jià)多立足于藥物活性考察中藥品質(zhì)，是更接近于中藥臨床療效的品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，目前已逐步發(fā)展出生物活性測(cè)定技術(shù)、效應(yīng)成分指數(shù)評(píng)控技術(shù)、生物效應(yīng)表達(dá)譜等較為新穎的技術(shù)，在中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)；HPLC 指紋圖譜法可對(duì)中藥傳遞過(guò)程中各環(huán)節(jié)產(chǎn)物的已知/未知化學(xué)成分進(jìn)行半定量分析，與一測(cè)多評(píng)法相結(jié)合可定量出更多的已知成分，是中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程中應(yīng)用較多的化學(xué)評(píng)價(jià)技術(shù)。此外，對(duì)于危害到人體健康的微量有害元素的測(cè)定和控制現(xiàn)多選用原子熒光光譜法進(jìn)行前端中藥材的有害元素評(píng)價(jià)。以上諸多品質(zhì)評(píng)價(jià)新技術(shù)和新方法有些可用于藥材到飲片的傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)，有些也可用于藥材到飲片甚至制劑的全過(guò)程評(píng)價(jià)，見(jiàn)圖4。

圖4 中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程評(píng)價(jià)技術(shù)與方法關(guān)聯(lián)圖Fig.4 Correlation diagram of evaluation technologies and methods for quality delivery process of TCM

中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程是一個(gè)受多種因素影響的復(fù)雜過(guò)程，其總體目標(biāo)是將有利于臨床療效的品質(zhì)更多地傳遞，將無(wú)效甚或有害的品質(zhì)更少地傳遞。現(xiàn)階段的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)體系往往割裂于品質(zhì)傳遞的單一環(huán)節(jié)，用于品質(zhì)傳遞過(guò)程的評(píng)價(jià)研究還未引起足夠的關(guān)注，且單一環(huán)節(jié)的質(zhì)量評(píng)價(jià)多立足于某一位點(diǎn)（如性狀、化學(xué)指標(biāo)或生物指標(biāo)等）建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，和中藥復(fù)雜多元成分體系發(fā)揮整體效應(yīng)的自身特點(diǎn)已嚴(yán)重不符，難以客觀全面地反映中藥的品質(zhì)優(yōu)劣、臨床療效以及品質(zhì)傳遞過(guò)程中效應(yīng)和安全指標(biāo)的變化特征[88]。因此，需要新的評(píng)價(jià)方法和技術(shù)體系用于把控中藥生產(chǎn)全產(chǎn)業(yè)鏈各環(huán)節(jié)的品質(zhì)傳遞。針對(duì)中藥多成分、多功效的品質(zhì)特點(diǎn)及其與化學(xué)藥和生物藥在物質(zhì)基礎(chǔ)和質(zhì)控策略的差異性，可考慮將多個(gè)評(píng)價(jià)技術(shù)聯(lián)合使用，充分發(fā)揮各自的優(yōu)勢(shì)，建立一種“性狀評(píng)價(jià)＋化學(xué)評(píng)價(jià)＋生物評(píng)價(jià)”的多維綜合評(píng)價(jià)體系，進(jìn)而更好地把控中藥品質(zhì)傳遞過(guò)程的變化趨勢(shì)，為保證中藥品質(zhì)一致性和穩(wěn)定性提供技術(shù)支撐。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突