HBV抗原對乙型肝炎相關(guān)性肝細胞癌分化程度的影響*

羅昊翔，李秀惠

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西百色 533000；2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院，北京100086)

據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計，全球大約有3.5～4.0億人患HBV感染相關(guān)的疾病，而接近50%的慢性HBV感染者可能會發(fā)展為肝癌[1]。原發(fā)性肝癌在我國也是發(fā)病率和病死率均較高的惡性腫瘤之一，且有逐年增高的趨勢[2]。然而，乙型肝炎相關(guān)性肝細胞癌(HCC)的發(fā)生機制尚未完全清楚，目前對于HBV血清標(biāo)志物組合模式與HCC發(fā)生的關(guān)系及HBsAg、HBeAg、HBcAg在HCC發(fā)生機制中的研究較少。探究HBV抗原導(dǎo)致肝細胞異常分化的機制對于乙型肝炎相關(guān)性HCC的診斷、治療、預(yù)防和預(yù)后有重要的意義。本研究通過收集乙型肝炎相關(guān)性HCC患者的住院病例資料，對乙型肝炎相關(guān)性HCC患者的HBV血清標(biāo)志物、病理標(biāo)本的免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果與HCC分化類型的關(guān)系進行探討，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院2019年診斷HCC且HBV感染或既往感染的住院患者260例，性別和年齡不限。納入研究的HCC患者需同時具備以下要求：HBV感染或既往感染者；病理檢查有分化類型；須有免疫組織化學(xué)(HBsAg、HBcAg)的檢測結(jié)果；診斷須為HCC。排除標(biāo)準(zhǔn)：抗-HBs單一陽性者；合并HCV等其他肝炎病毒感染者；酒精性肝病等其他因素相關(guān)性肝癌患者；血清學(xué)、病理學(xué)和免疫組織化學(xué)(HBsAg、HBcAg)檢查資料任一項不全者；肝腺癌、膽管細胞癌等非HCC的類型。

1.2 資料收集及分析

收集患者的HBV血清學(xué)、免疫組織化學(xué)(HBsAg、HBcAg)和HCC病理學(xué)檢測高、中、低分化類型的資料，按照檢測結(jié)果指標(biāo)，輸入SPSS21.00軟件進行統(tǒng)計分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS21.00軟件對收集的數(shù)據(jù)進行處理和統(tǒng)計分析。將病例資料中的結(jié)果，根據(jù)HBV血清標(biāo)志物組合模式的不同，分類輸入SPSS21.00統(tǒng)計軟件，使用χ2檢驗進行統(tǒng)計分析，理論頻數(shù)小于1時，使用Fisher確切概率法。并分別統(tǒng)計分析血清HBsAg、血清HBeAg、免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果中HBsAg和HBcAg與HCC組織分化的關(guān)系。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HBV血清標(biāo)志物組合模式與HCC分化程度的相關(guān)性

乙型肝炎HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)(簡稱“小三陽”)血清標(biāo)志物組合模式152例(58.5%)，其中肝組織病理顯示HCC高分化類型3例(1.2%)，中、低分化類型149例(57.3%)；非“小三陽”血清組合模式共108例(41.5%)，其中HCC高分化類型7例(2.7%)，中、低分化類型有101例(38.8%)。HBV血清標(biāo)志物組合模式對乙型肝炎相關(guān)性HCC分化類型的影響差異無統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=0.125，P>0.05)，見圖1。

圖1 HBV血清標(biāo)志物組合模式與HCC分化程度

2.2 血清HBsAg與HCC分化程度的相關(guān)性

在260例病例資料中，血清HBsAg陽性221例(85.0%)，其中屬于高分化類型7例(2.7%)，中、低分化類型214例(82.3%)；血清HBsAg陰性39例(15.0%)，屬于高分化類型3例(1.2%)，中、低分化類型36例(13.8%)，HBsAg對HCC高分化和HCC中、低分化的影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.366，P>0.05)。進一步通過Pearson相關(guān)性分析，r=-0.084，P>0.05。

2.3 HCC組織HBsAg與HCC分化程度的相關(guān)性

在260例病例資料中，HCC組織免疫組織化學(xué)HBsAg陽性206例(79.2%)，其中HCC高分化類型5例(1.9%)，中、低分化類型201例(77.3%)；HCC組織免疫組織化學(xué)HBsAg陰性54例(20.8%)，其中HCC高分化類型5例(1.9%)，中、低分化類型49例(18.8%)，HBsAg對HCC高分化和HCC中、低分化的影響差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.020，P<0.05)。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，r=-0.144，P<0.05。

2.4 血清HBeAg與HCC分化程度的相關(guān)性

在260例病例資料中，血清HBeAg陽性19例(7.3%)，其中屬于HCC高分化類型0例，中、低分化類型19例；HBeAg陰性241例(92.7%)，其中屬于HCC高分化類型10例，中低分化類型231例，經(jīng)Fisher確切概率法進行統(tǒng)計檢驗，HBeAg對HCC高分化和HCC中、低分化的影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，經(jīng)Pearson相關(guān)性統(tǒng)計分析，r=-0.056，P>0.05。

2.5 HCC組織HBcAg與HCC分化程度的相關(guān)性

在260例病例資料中，HCC組織HBcAg陽性39例(15.0%)，其中屬于HCC高分化類型2例(0.8%)，中低分化類型37例(14.2%)；HCC組織HBcAg陰性221例(85.0%)，屬于HCC高分化類型8例(3.1%)，中低分化類型213例(81.9%)，HBcAg對HCC高分化和HCC中低分化的影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.000，P>0.05)。Pearson相關(guān)性統(tǒng)計分析，r=0.028,P>0.05。

3 討 論

在我國，乙型肝炎為原發(fā)性肝癌的主要原因[3]，近年來仍呈上升趨勢，HBV血清標(biāo)志物組合模式中，以“小三陽”模式患者更易發(fā)生HCC。以往文獻認為，乙型肝炎“小三陽”血清組合模式HBV DNA多為變異株，HBV DNA變異與原發(fā)性肝癌的發(fā)生有關(guān)，而且乙型肝炎“小三陽”血清組合模式多為慢性HBV感染；HBV在體內(nèi)存在多年，HBV DNA可能已與細胞基因組整合，導(dǎo)致細胞基因突變，繼而和原發(fā)性肝癌的發(fā)生有關(guān)。近年來的研究表明，HBV的抗原有反式激活作用，通過反式激活細胞基因的表達，調(diào)控細胞信號傳導(dǎo)通路，進而與原發(fā)性肝癌的發(fā)生有關(guān)。然而，目前文獻顯示，HBV抗原對肝癌細胞分化影響的研究較少。本研究通過收集病例資料，對其統(tǒng)計分析，探討HBV的抗原與HCC分化程度的關(guān)系。

在本研究中，通過對260例乙型肝炎相關(guān)性HCC患者的病例資料進行分析，發(fā)現(xiàn)乙型肝炎相關(guān)性HCC中“小三陽”血清標(biāo)志物組合模式有152例(58.5%)，其中HCC中、低分化類型有149例(57.3%)，雖然目前尚不能說明乙型肝炎“小三陽”血清標(biāo)志物組合模式和乙型肝炎非“小三陽”血清標(biāo)志物組合模式對乙型肝炎相關(guān)性HCC分化類型有影響，但是可以看出乙型肝炎相關(guān)性HCC的發(fā)病人群主要HBV血清標(biāo)志物組合模式為“小三陽”者及乙型肝炎相關(guān)性HCC分化類型多為中、低分化的趨勢。

本研究發(fā)現(xiàn)，乙型肝炎相關(guān)性HCC組織中HBsAg陽性與乙型肝炎相關(guān)性HCC組織中HBsAg陰性對HCC高分化和中、低分化的影響差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且乙型肝炎相關(guān)性HCC高分化和中、低分化類型與HCC組織HBsAg的存在與否呈負相關(guān)(r=-0.144，P<0.05)，說明HBsAg在HCC組織的存在可能會影響HCC分化，且HBsAg在肝組織中存在時間越長及存在于肝組織中的水平越高，乙型肝炎相關(guān)性HCC的分化程度可能越低。TSENG等[4]的研究表明，在HBeAg陰性且低病毒載量的患者中，HCC的風(fēng)險取決于HBsAg的水平、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平和年齡。HBsAg為HBV S基因編碼的蛋白，是構(gòu)成HBV外衣殼的主要成分，也是HBV感染的重要指標(biāo)。有研究表明，HBsAg是一種轉(zhuǎn)錄激活子，可以反式激活多種細胞基因包括癌基因[5]，如c-myc、c-fos、c-Ha-ras等，且能激活c-Raf-1/MEK /Erk2信號傳導(dǎo)途徑[6]，從而導(dǎo)致肝細胞惡性轉(zhuǎn)化。SHAN等[7]的研究表明，HBsAg的刺激可促進乙型肝炎相關(guān)性肝癌細胞的侵襲。高水平的HBsAg在肝細胞內(nèi)積累可導(dǎo)致嚴(yán)重的肝損傷，而肝損傷又可以激活Met原癌基因，啟動HGF/MET信號傳導(dǎo)通路[8]，與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。然而，乙型肝炎相關(guān)性HCC患者血清HBsAg陽性和血清HBsAg陰性對HCC高分化和中低分化的影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。HBsAg作為HBV大球形顆粒外衣殼和小球形顆粒及管型顆粒的主要成分，在肝細胞內(nèi)產(chǎn)生后分泌到細胞外，主要在血清中存在，其在肝細胞中存在時間的長短及水平對肝細胞分化的調(diào)控可能起到一定作用。SALPINI等[9]的研究表明，阻止HBsAg的分泌與促進細胞增殖有關(guān)。

綜上所述，乙型肝炎相關(guān)性HCC組織分化程度主要與HCC組織中HBsAg有關(guān)。乙型肝炎相關(guān)性HCC組織中細胞的增殖和分化程度，可能與HBsAg長期留存于肝組織有關(guān)。

HBeAg和HBcAg都是HBV在細胞內(nèi)復(fù)制時產(chǎn)生前基因組3.5 kb mRNA翻譯出的重要蛋白[10]，且這兩種抗原都由HBV C基因區(qū)編碼[11]，都是與HBV的復(fù)制過程同步的蛋白，一般將其視為HBV復(fù)制的指標(biāo)，而高病毒載量往往是HCC發(fā)生的高危因素[12]。HBcAg為HBV大球形顆粒內(nèi)衣殼的主要成分，HBcAg在細胞內(nèi)產(chǎn)生后，可存在于HBV大球形顆粒的內(nèi)衣殼，也可經(jīng)內(nèi)源性抗原提呈途徑提呈后表達在肝細胞表面，導(dǎo)致一系列免疫反應(yīng)，進而與導(dǎo)致的肝損傷有關(guān)。HBV C基因區(qū)翻譯出的HBeAg的前體，經(jīng)剪切加工后，分泌到肝細胞外，HBeAg主要在血清中存在。侯環(huán)榮等[13]的研究表明，HBcAg能促進HepG2.2.15細胞的侵襲力，而在本研究中，目前尚不能說明HCC組織中HBcAg及血清HBeAg的存在對HCC分化程度有影響，另外，與肝損傷有關(guān)的HBcAg在肝組織持續(xù)存在是否與HCC分化程度有關(guān)，有待于進一步研究。