一種小鼠2型糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化模型的構(gòu)建方法及評(píng)價(jià)*

楊金偉， 喻 嶸 ， 吳勇軍 ， 劉 秀， 鄧奕輝△

（湖南中醫(yī)藥大學(xué) 1中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，2研究生院，3中醫(yī)方證研究轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，4藥學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410208）

糖尿?。╠iabetes mellitus）是由于胰島β 細(xì)胞損傷（胰島素分泌缺陷）及胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)（生物作用受損），出現(xiàn)以慢性血糖增高為特征的代謝紊亂綜合征［1］。據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)盟于2019 年發(fā)布的最新全球糖尿病地圖（第9 版）的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球成人糖尿病患者（20～79 歲）已增至4.63 億。我國(guó)糖尿病患者約1.164 億，以2 型糖尿病為主，而心腦血管并發(fā)癥是致死的主要原因［2-3］，病變累及心、腦大血管形成動(dòng)脈粥樣硬化，嚴(yán)重者引起組織缺血壞死。目前糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化的病因及各種并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，而理想動(dòng)物模型的建立是實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)。

小鼠2 型糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭苽浞椒ㄖ饕? 類(lèi)：（1）基因雜交，將糖尿病模型小鼠與動(dòng)脈粥樣硬化模型小鼠進(jìn)行雜交，但因其操作方法較為復(fù)雜、繁殖小鼠存在基因修復(fù)情況、制備成功率不明確等因素限制了實(shí)驗(yàn)使用［4］。（2）以動(dòng)脈粥樣硬化小鼠（ApoE-/-小鼠）為基礎(chǔ)，配合鏈脲佐菌素（streptozocin，STZ）對(duì)小鼠胰腺損傷，模擬糖尿病過(guò)程。ApoE-/-小鼠可自發(fā)形成明顯的粥樣斑塊，在高脂及STZ 的聯(lián)合誘導(dǎo)下存在明顯的糖脂代謝紊亂及胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中操作相對(duì)簡(jiǎn)單可靠，現(xiàn)階段較多使用［5-6］。（3）以糖尿病模型小鼠為基礎(chǔ)制備動(dòng)脈粥樣硬化模型，多采用喂養(yǎng)高脂飼料，可較好地模擬2 型糖尿病并發(fā)血管病變的病理過(guò)程，但研究對(duì)象的選擇及誘導(dǎo)干預(yù)方法的不同，使其動(dòng)脈粥樣斑塊的發(fā)生率和程度不明確。本課題組對(duì)2 型糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的研究中，以MKR 小鼠作為研究對(duì)象，聯(lián)合STZ 及N-硝基-L-精氨酸甲酯（N-nitro-L-arginine-methyl ester，L-NAME）干預(yù)誘導(dǎo)，成功建立了穩(wěn)定的2 型糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型，可為研究糖尿病大血管病變的發(fā)病機(jī)制及治療措施提供參考。

材料和方法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本實(shí)驗(yàn)的MKR 小鼠為胰島素/胰島素樣生長(zhǎng)因子雙重受體缺陷的轉(zhuǎn)基因糖尿病小鼠，從美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院（NIH）的Dr.Derek LeRoith 和Dr.Jun-Li Liu 處引進(jìn)，湖南中醫(yī)藥大學(xué)SPF 級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室自繁自用。FVB/N 及ApoE-/-小鼠由湖南中醫(yī)藥大學(xué)SPF實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心向北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司訂購(gòu)，許可證號(hào)為SYXK（湘）2013-0005。

2 實(shí)驗(yàn)飼料及試劑

普通飼料（編號(hào)U05615908，Co60輻照實(shí)驗(yàn)鼠維持飼料）、膽固醇及膽酸鈉（江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司）。高脂乳劑配方：膽固醇50 g、豬油100 g、丙基硫氧嘧啶1 g、膽酸鈉10 g、吐溫80 100 mL和丙二醇100 mL，蒸餾水定容至500 mL。以上均經(jīng)滅菌處理。STZ（Sigma）；丙基硫氧嘧啶片和LNAME（上海源葉生物科技有限公司）；總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）試劑盒（南京建成科技有限公司）；C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）及IL-18 試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）；兔源基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）抗體和金屬蛋白酶組織抑制物1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP-1）單克隆抗體（Abcam）。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 動(dòng)物分組飼養(yǎng) 8周齡MKR小鼠20只，隨機(jī)選取10 只作為MKR 空白（MKR blank）組，剩余MKR 小鼠與FVB/N、ApoE-/-小鼠給予溶于檸檬酸鈉緩沖液（pH 4.5）中的STZ 40 mg·kg-1·d-1，連續(xù)5 d 進(jìn)行腹腔注射造模，測(cè)得空腹血糖＞11.1 mmol/L，則表示糖尿病造模成功；糖尿病造模成功后，除MKR空白對(duì)照組予生理鹽水，其余MKR小鼠予L-NAME 0.2 mg·kg-1·d-1，同時(shí)聯(lián)合高脂乳劑10 mL·kg-·1d-1灌胃進(jìn)行造模12 周，建立糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化模型。另取10 只FVB/N 小鼠作為正常（normal）組，以普通維持飼料飼養(yǎng)。飼養(yǎng)條件：溫度（22±2）℃及相對(duì)濕度（50±5）%，光/暗周期為12 h/12 h。自由飲水，每日更換飲水瓶，定期清理籠具與墊料，通風(fēng)，光線(xiàn)良好。

3.2 觀(guān)察指標(biāo) 取材前1 d，小鼠禁食不禁水8 h，小鼠尾靜脈采血應(yīng)用電化學(xué)法血糖儀檢測(cè)空腹血糖；配制10%的水合氯醛4 mL/kg 腹腔注射麻醉，心臟采血后處死小鼠，收集血液，分離血清，用于血脂相關(guān)指標(biāo)和胰島素。用組織剪剝離小鼠胰腺，剔除胰腺組織周邊脂肪，取出完整的胰腺組織。同時(shí)暴露心臟，自主動(dòng)脈起始部開(kāi)始分離向下至骼總動(dòng)脈分叉處，向上分離左側(cè)頭臂干動(dòng)脈和無(wú)名動(dòng)脈，將心臟與血管一同取下，切取小鼠主動(dòng)脈組織放入2 mL 4%多聚甲醛固定液常溫保存24 h 做HE、Masson 染色及免疫組化檢測(cè)。

3.3 血脂、胰島素及血清 CRP、TNF-α、IL-1β 和 IL-18水平的檢測(cè) 應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血脂相關(guān)指標(biāo)（包括TC、TG、HDL-C、LDL-C）。ELISA 法測(cè)定小鼠血清 CRP、TNF-α、IL-1β 及 IL-18 的含量。稀釋和加樣后用封板膜進(jìn)行封板溫育，配液洗滌進(jìn)行加酶，通過(guò)顯色后以450nm 的波長(zhǎng)依次測(cè)量每孔吸光度?；瘜W(xué)發(fā)光法測(cè)定胰島素水平。胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）=空腹血糖×血清胰島素水平/22.5。

3.4 小鼠胰腺及動(dòng)脈HE 染色 石蠟包埋，切片厚度3～4 μm，60 ℃烤片1～2 h；脫蠟：切片置于二甲苯中10 min，2 次。依次在100%、95%、85%和75%乙醇，每級(jí)放置5 min。蒸餾水浸洗5 min；蘇木素染5～10 min，PBS 返藍(lán)；伊紅染3～5 min，蒸餾水沖洗；梯度酒精脫水；中性樹(shù)膠封片、顯微鏡觀(guān)察。

3.5 小鼠動(dòng)脈Masson 染色 石蠟包埋切片（3 μm）；切片脫蠟至水，核染液染色3～5 min；沖洗染色液，PBS浸泡切片5～10 min，胞核返藍(lán)；滴加漿染液染色2 min；分色液分色30 s；滴加復(fù)染液染色6～8 min，無(wú)水乙醇沖洗干凈；吹干、透明、封片，顯微鏡觀(guān)察。

3.6 免疫組化法測(cè)定MMP-9 和TIMP-1 的表達(dá)水平 脫蠟前60 ℃恒溫箱烘烤60 min；常規(guī)二甲苯浸泡兩次脫蠟，依次用100%、95%、85%和70%濃度乙醇梯度水化5min；PBS 浸泡5 min，清洗 3 次；抗原修復(fù)后再次PBS浸泡5 min，清洗3次。樣本處理后，免疫組化檢測(cè)MMP-9和TIMP-1陽(yáng)性表達(dá)率，加HRP滅活液覆蓋樣本，冰上放置，PBS 浸泡2 min，洗滌3 次；經(jīng)水化、封閉，通過(guò)抗體稀釋液稀釋I 抗（1：100），加入 100 μL，每片 1 μg 抗體 I 抗孵育、II 抗孵育。制備DAB 顯色液，運(yùn)用顯微鏡下觀(guān)察染色的程度，染好后立刻終止反應(yīng)；將切片放入蘇木素染液中，5 min 后用蒸餾水清洗干凈，封片后于顯微鏡下拍照并計(jì)算MMP-9 和 TIMP-1 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。MMP-9 和 TIMP-1 陽(yáng)性表達(dá)形式為胞核或胞漿呈棕黃色顆粒。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。組間比較若滿(mǎn)足正態(tài)性者，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；不滿(mǎn)足正態(tài)性資料用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 各組小鼠血糖、血脂和胰島素水平及胰島素抵抗指數(shù)的變化

造模誘導(dǎo)過(guò)程中正常組小鼠空腹血糖波動(dòng)不明顯；MKR 小鼠在誘導(dǎo)干預(yù)為動(dòng)脈粥樣硬化模型前血糖較其他組增高；通過(guò)腹腔注射STZ 及高脂乳劑的灌胃，F(xiàn)VB/N、ApoE-/-及MKR 小鼠血糖較正常組均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），ApoE-/-及MKR模型組升高尤為明顯，而這2 組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）；整個(gè)造模周期中，MKR 小鼠體現(xiàn)出較為穩(wěn)定的血糖高值，見(jiàn)圖1。

Figure 1.Comparison of fasting blood glucose in each group.Mean±SD. n=10.＃P＜0.05 vs normal group；*P＜0.05 vs MKR model group.圖1 各組小鼠空腹血糖的變化

與正常組相比，ApoE-/-及 MKR 模型組 TG、TC 和LDL-C 水平顯著增高，HDL-C 水平顯著降低（P＜0.05），說(shuō)明MKR 小鼠經(jīng)造模后存在血脂代謝異常；FVB/N 對(duì)照組及 MKR 空白組小鼠 TG、TC 和 LDL-C水平較正常組高（P＜0.05），但仍不及MKR 模型組血脂的水平（P＜0.05），見(jiàn)圖2。

Figure 2.The levels of serum lipids in each group.Mean±SD.n=10.＃P＜0.05 vs normal group；*P＜0.05 vs MKR model group.圖2 各組小鼠血脂水平的變化

造模12周后，與正常組相比，其余各組小鼠血清胰島素水平及胰島素抵抗指數(shù)均顯著升高（P＜0.05）；與FVB/N對(duì)照組比較，ApoE-/-及MKR模型組小鼠血清胰島素水平及胰島素抵抗指數(shù)進(jìn)一步升高（P＜0.05），見(jiàn)圖3。

Figure 3.Comparison of fasting serum insulin level and HOMA-IR in each group.Mean±SD. n=10.＃P＜0.05 vs normal group；*P＜0.05 vs MKR model group.圖3 各組小鼠空腹血清胰島素水平及胰島素抵抗指數(shù)的變化

2 各組小鼠炎癥相關(guān)因子變化情況

高脂乳劑及L-NAME 持續(xù)誘導(dǎo)后，F(xiàn)VB/N 對(duì)照組、ApoE-/-模型組及MKR模型組小鼠血清CRP、TNF-α、IL-1β 及IL-18 水平較正常組顯著升高（P＜0.05），其中以ApoE-/-及MKR 模型組更明顯，而這2 組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性（P＞0.05）；與 MKR 空白組比較，MKR 模型組血清中炎癥因子水平顯著升高（P＜0.05），說(shuō)明L-NAME 的持續(xù)干預(yù)可誘導(dǎo)炎癥因子釋放過(guò)程，見(jiàn)圖4。

Figure 4.Comparison of CRP，TNF-α，IL-1β and IL-18 levels in each group.Mean±SD. n=10.#P＜0.05 vs normal group；*P＜0.05 vs MKR model group.圖4 各組小鼠CRP、TNF-α、IL-1β及IL-18水平的變化

3 各組小鼠胰腺、主動(dòng)脈染色特征分析

小鼠胰腺HE 染色病理切片顯示，正常組胰島清晰可見(jiàn)，胰島與周?chē)夥置谙龠吔缜逦?，胰島內(nèi)可見(jiàn)豐富清晰的毛細(xì)血管；MKR 空白組胰島細(xì)胞大小不等、分布不均，胰腺小葉結(jié)構(gòu)紊亂；FVB/N 對(duì)照組可見(jiàn)部分胰島細(xì)胞空泡變性，胰島組織有輕微炎癥因子浸潤(rùn)；ApoE-/-及MKR 模型組胰腺的外分泌部侵入胰島，胰島萎縮，大量炎癥因子浸潤(rùn)。

小鼠動(dòng)脈HE 染色病理切片顯示，正常組主動(dòng)脈內(nèi)膜完整光滑，細(xì)胞排列整齊，未見(jiàn)炎癥細(xì)胞聚集及斑塊形成；MKR空白組主動(dòng)脈內(nèi)膜增厚，有斑塊突出管腔，纖維組織排列紊亂；FVB/N 對(duì)照組主動(dòng)脈有散在粥樣斑塊，中膜增厚伴部分平滑肌細(xì)胞增生，排列尚可，未見(jiàn)鈣鹽沉積及明顯泡沫細(xì)胞堆積；ApoE-/-及MKR 模型組小鼠主動(dòng)脈均有明顯動(dòng)脈斑塊形成，管腔變窄，內(nèi)膜明顯增生，內(nèi)含泡沫細(xì)胞及膽固醇結(jié)晶。應(yīng)用圖像分析儀分析斑塊面積及Masson染色后含膠原斑塊的面積，結(jié)果顯示，與正常組比較，ApoE-/-模型組及MKR 模型組斑塊面積與動(dòng)脈壁橫切面積的比值和含膠原斑塊面積與斑塊面積的比值均顯著升高（P＜0.05）。見(jiàn)圖5。

Figure 5.The pathological changes of pancreatic and arterial tissues observed by HE and Masson staining（×400），and comparison of ratios of plaque area/lumen cross area and area containing collagen/plaque area in each group.Mean±SD. n=5.#P＜0.05 vs normal group；*P＜0.05 vs MKR model group.圖5 各組小鼠胰腺和動(dòng)脈組織的HE和Masson染色及主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積和含膠原斑塊面積的變化

4 各組小鼠主動(dòng)脈組織MMP-9 及TIMP-1 蛋白表達(dá)水平的變化

與正常組相比，MKR 空白組、FVB/N 對(duì)照組、ApoE-/-模型組及MKR模型組MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率均顯著升高，TIMP-1 陽(yáng)性表達(dá)率均顯著降低（P＜0.05），MMP-9/TIMP-1 比值顯著升高；與MKR 模型組比較，MKR 空白組和FVB/N 對(duì)照組MMP-9 表達(dá)水平降低，TIMP-1 表達(dá)水平升高（P＜0.05），而ApoE-/-模型組與MKR模型組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05），見(jiàn)圖6。

Figure 6.The protein expression of MMP-9 and TIMP-1 in the arteries detected by immunohistochemical staining.Mean±SD. n=5.#P＜0.05 vs normal group；*P＜0.05 vs MKR model group.圖6 各組小鼠主動(dòng)脈組織MMP-9及TIMP-1免疫組織化學(xué)染色

討 論

糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化是一個(gè)復(fù)雜的多細(xì)胞、多因素參與的慢性炎癥性病理過(guò)程［7］?；静±韺W(xué)特征是粥樣斑塊的形成。動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷，出現(xiàn)脂質(zhì)蓄積于內(nèi)膜處，平滑肌細(xì)胞、泡沫細(xì)胞和膠原纖維積聚增生，隨著病程進(jìn)展伴有壞死、鈣化的病變。糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程是多種致病因素交互的結(jié)果［8］。借助基因敲除手段輔以STZ誘導(dǎo)及高脂飼料，ApoE-/-小鼠在實(shí)驗(yàn)研究中可較好建立糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型。但其本身存在較為明顯的血脂代謝障礙及自發(fā)形成粥樣斑塊的特性，研究中難以區(qū)分加速的動(dòng)脈粥樣硬化是糖尿病的作用還是血脂代謝障礙的作用。

2 型糖尿病有胰島素抵抗引起的高血糖和高胰島素血癥的病理特征［9］。MKR 小鼠是美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院Dr.Derek LeRoith 等于2001 年建立的轉(zhuǎn)基因非肥胖型2 型糖尿病動(dòng)物模型小鼠［10］。該小鼠具有骨骼肌特異性胰島素樣生長(zhǎng)因子1 受體（insulin-like growth factor 1 receptor，IGF-1R）缺陷而形成IGF-1和胰島素受體（insulin receptor，IR）突變混合受體的特性，其 IGF-1 和 IR 功能均受損。MKR 小鼠在5周齡有明顯的血糖升高、胰島素抵抗、糖耐量異常及血脂代謝紊亂（LDL-C 和 TG 水平升高，HDL-C 水平降低）［11-12］，表現(xiàn)出高血糖、高血脂、高胰島素血癥及周?chē)M織胰島素抵抗等特點(diǎn)并能穩(wěn)定遺傳，是良好的2型糖尿病及并發(fā)癥研究的動(dòng)物模型［13］。本研究中持續(xù)的高脂乳劑灌胃不僅可促使脂質(zhì)代謝失衡也可更好維持胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，STZ小劑量注射破壞胰島功能，進(jìn)一步確定模型的構(gòu)建且體現(xiàn)胰島素分泌不足的病理特點(diǎn)。L-NAME 的干預(yù)可加重血管的炎癥損傷及粥樣斑塊的形成［14］。

本實(shí)驗(yàn)MKR模型組HE染色胰腺小葉結(jié)構(gòu)破壞，大量腺泡萎縮形成空泡甚至破裂，炎癥因子浸潤(rùn)明顯；主動(dòng)脈內(nèi)膜增生，出現(xiàn)部分缺失；可見(jiàn)巨噬細(xì)胞，內(nèi)膜含泡沫細(xì)胞；中膜增厚伴平滑肌細(xì)胞增生，排列不整齊。模型構(gòu)建符合糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化臨床發(fā)病特點(diǎn)，在病理形態(tài)上出現(xiàn)了典型的胰腺損傷和粥樣斑塊形成的相關(guān)表現(xiàn)。糖脂代謝失衡是糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中的重要危險(xiǎn)因素，機(jī)體持續(xù)高血糖及胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)的存在可誘導(dǎo)機(jī)體代謝異常、炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激損傷的持續(xù)狀態(tài)，是疾病發(fā)展的始動(dòng)因素［15］。而循環(huán)血中的膽固醇尤其是LDL-C 在氧化修飾后形成的ox-LDL，是啟動(dòng)炎癥性病理過(guò)程重要因素。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示造模誘導(dǎo)干預(yù)下MKR 小鼠FBG、TG、TC及LDL-C水平明顯增高，且較ApoE-/-模型組有更穩(wěn)定的血糖高值、高胰島素血癥及胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，較好地模擬代謝紊亂狀態(tài)下粥樣斑塊形成過(guò)程。同時(shí)粥樣斑塊的形成是一個(gè)慢性炎癥反應(yīng)的過(guò)程，炎癥可引起斑塊不穩(wěn)定。CRP、TNF-α、IL-1β及IL-18等炎癥因子在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊處沉積且沉積的范圍與斑塊的不穩(wěn)定性呈正相關(guān)已被多數(shù)研究證實(shí)：CRP作為機(jī)體炎癥及感染敏感指標(biāo)，可調(diào)節(jié)血管壁炎癥反應(yīng)，同時(shí)參與補(bǔ)體激活及巨噬細(xì)胞泡沫化［16］；TNF-α由單核巨噬細(xì)胞釋放，介導(dǎo)粥樣斑塊形成中的免疫炎癥反應(yīng)，在趨化因子的刺激下促進(jìn)血小板黏附及脂質(zhì)蓄積［17］；IL-1β 可通過(guò)上調(diào)免疫效應(yīng)（活化Th1、Th17和體液免疫），促進(jìn)炎癥局部釋放及血栓形成；IL-18水平增高可刺激干擾素γ 釋放，活化中心粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及黏附分子對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生損傷［18］。MKR 模型組小鼠血清出現(xiàn)明顯的炎癥因子含量增高，反映了模型炎癥釋放的病理特點(diǎn)。同時(shí)，斑塊纖維帽的厚薄程度和完整性是評(píng)估斑塊穩(wěn)定性重要因素。膠原是纖維帽的重要組成成分，機(jī)體內(nèi)MMPs一旦被激活，整個(gè)細(xì)胞外基質(zhì)能夠被其分解，其中明膠酶MMP-9表達(dá)水平對(duì)預(yù)測(cè)易損性斑塊具有較高的敏感性和特異性。TIMPs 作為MMPs 的天然抑制劑，其作用是抑制MMPs的活化，延緩動(dòng)脈粥樣硬化的形成和進(jìn)展，MMPs 和TIMPs 表達(dá)的平衡直接影響斑塊穩(wěn)定性。本研究的免疫組化結(jié)果顯示，MKR 模型組動(dòng)脈管壁及斑塊內(nèi)MMP-9 的陽(yáng)性表達(dá)量明顯升高，同時(shí)TIMP-1的表達(dá)下調(diào)，引起MMP-9/TIMP-1的失衡狀態(tài)，細(xì)胞外基質(zhì)降解，促進(jìn)斑塊不穩(wěn)定。

綜上所述，MKR 模型組小鼠具備高血糖狀態(tài)持續(xù)和糖尿病加速動(dòng)脈粥樣硬化的病理過(guò)程，且上述作用對(duì)醫(yī)學(xué)干預(yù)不抗拒，可在2 型糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的實(shí)驗(yàn)研究中使用。