內(nèi)源性HMGB1調(diào)節(jié)低氧乏養(yǎng)胰腺癌細(xì)胞脂肪酸代謝及其機(jī)制

高潔，吳琪煒，宋廉，石卉，王鳴，龔愛華，王冬青，朱海濤

0 引言

胰腺癌惡性程度極高，具有早期診斷困難，放化療不敏感，致死率高等特點(diǎn)[1]。由于豐富的纖維基質(zhì)成分和不成熟的血管結(jié)構(gòu)，低氧乏養(yǎng)是胰腺癌微環(huán)境最顯著特點(diǎn)之一[2-3],癌細(xì)胞在相對缺氧和營養(yǎng)缺乏的環(huán)境中惡性生物學(xué)行為增加，然而其確切機(jī)制仍不十分明確。

高遷移率族蛋白B1（high-mobility group box 1,HMGB1）損傷相關(guān)模式分子，具有細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外兩種存在模式[4-5]。細(xì)胞內(nèi)HMGB1，又稱內(nèi)源性HMGB1，是一種高豐度的細(xì)胞核非組蛋白DNA結(jié)合蛋白[6]，核內(nèi)的HMGB1參與穩(wěn)定核小體、DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄翻譯等進(jìn)程[7]。在血供和（或）氧供不足、營養(yǎng)缺乏、炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激等因素下，內(nèi)源性HMGB1從腫瘤細(xì)胞細(xì)胞核轉(zhuǎn)位至細(xì)胞質(zhì)[8-10]，進(jìn)而發(fā)生激活腫瘤細(xì)胞自噬、抑制凋亡等行為[11]。近年來，內(nèi)源性HMGB1在腫瘤代謝重編程中的作用得到越來越多的關(guān)注，但是其在胰腺癌脂質(zhì)代謝重編程和線粒體功能調(diào)控中的作用卻鮮見報(bào)道。本研究通過研究胰腺癌Patu8988細(xì)胞內(nèi)源性 HMGB1在脂質(zhì)代謝重編程和線粒體功能中的作用，進(jìn)一步明確其在胰腺癌增殖、侵襲以及遷移等惡性生物學(xué)行為中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)atu8988、AsPC1、BXPC3和Panc1細(xì)胞和人胚胎腎細(xì)胞HEK293T購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞研究所；胰蛋白酶、澳洲胎牛血清購自美國Gibco公司；高糖型DMEM、磷酸鹽溶液PBS購自美國Hyclone公司；兔抗人單克隆抗體β-微管蛋白（β-tubulin）、兔抗人多克隆抗體高遷移率族蛋白B1（HMGB1）購于美國Abcam公司；兔抗人單克隆抗體脂肪酸合酶（FASN）、三磷酸腺苷檸檬酸裂解酶（ACLY）、磷酸化三磷酸腺苷檸檬酸裂解酶（p-ACLY）、線粒體融合蛋白1（MFN1）、線粒體融合蛋白2（MFN2）、線粒體分裂蛋白（FIS1）、動(dòng)力相關(guān)蛋白（DRP1）、磷酸化動(dòng)力相關(guān)蛋白1（p-DRP1（Ser637））以及鼠抗單克隆抗體?；o酶A合成酶短鏈家族成員2（ACSS2）均購自美國Cell Signaling Technology公司；HRP標(biāo)記的羊抗兔二抗和羊抗鼠二抗購于美國Santa Cruz Biotechnology公司；MitoTracker?Red CMXRos線粒體紅色熒光探針購于上海前塵生物科技有限公司；DAPI溶液購于北京Solarbio公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 人胰腺癌Patu8988細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM高糖培養(yǎng)基（含10%胎牛血清、100 u/L青霉素、100 mg/L鏈霉素），在37℃恒溫、5%CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（10%FBS）。乏養(yǎng)培養(yǎng)條件（2%FBS）為DMEM高糖培養(yǎng)基（含2%胎牛血清、100 u/L青霉素、100 mg/L鏈霉素），在37℃恒溫、5%CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。低氧培養(yǎng)條件（Hypoxia）為將含10%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)皿置于密封的低氧培養(yǎng)盒中，向低氧培養(yǎng)盒里充入混合氣（1%O2、5%CO2、94%N2），持續(xù)充入10 min，低氧混合氣購自南大恒通氣體廠，然后將低氧培養(yǎng)盒轉(zhuǎn)移到37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。低氧乏養(yǎng)培養(yǎng)條件（2%FBS+Hypoxia）為DMEM高糖培養(yǎng)基（含2%胎牛血清、100 u/L青霉素、100 mg/L鏈霉素），將其置于密封的低氧培養(yǎng)盒中，向低氧培養(yǎng)盒里充入混合氣，持續(xù)充入10 min，隨后將低氧培養(yǎng)盒放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中。

1.2.2 病毒包裝與感染 在六孔板中接種適量HEK293T細(xì)胞，待第二天細(xì)胞40%～60%融合時(shí)，進(jìn)行病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。取1.5 ml滅菌EP管，加入1 μg包裝混合質(zhì)粒和1 μg表達(dá)質(zhì)粒（空載質(zhì)粒、HMGB1-shRNA1、HMGB1-shRNA2）以及100 μl的無血清培養(yǎng)基（高糖DMEM）。輕柔混勻，室溫孵育5 min。取1.5 ml滅菌EP管，5 μl PEI脂質(zhì)體（質(zhì)粒:PEI脂質(zhì)體=1:2.5）溶于100 μl無血清培養(yǎng)基中。輕柔混勻，室溫孵育5 min。將DNA溶液和脂質(zhì)體溶液輕柔混勻，室溫孵育25 min。在六孔板中每孔加入2 ml含血清的生長培養(yǎng)基，再加入DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物。轉(zhuǎn)染后48～72 h收獲含病毒的上清液。3 000 r/min離心20 min，去除沉淀。六孔板中接種待感染細(xì)胞Patu8988，用含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)；待細(xì)胞鋪板，第二天更換新培養(yǎng)基，加入聚凝胺和上述病毒液進(jìn)行感染，混勻；第三天重復(fù)感染一次。72 h后，熒光顯微鏡下觀察GFP的表達(dá)情況。收取細(xì)胞系蛋白及RNA，蛋白質(zhì)免疫印跡法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR鑒定細(xì)胞系中HMGB1的表達(dá)情況，驗(yàn)證敲減效率。

1.2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測相關(guān)蛋白表達(dá) 用無菌PBS清洗細(xì)胞三次后，加入蛋白裂解液，提取總蛋白，100℃加熱5 min后12 000g離心5 min。蛋白經(jīng)10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離，每個(gè)泳道20 μl的蛋白樣品上樣，然后將蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜上，5%脫脂牛奶室溫封閉1 h；一抗[β-tubulin、HMGB1、FASN、

p-ACLY、ACLY、MFN1、MFN2、FIS1、DRP1、p-DRP1（S637）、ACSS2（1:1 000）] 4℃孵育過夜；TBST洗膜，每次10 min，重復(fù)3次；相應(yīng)二抗[羊抗兔二抗（1:10 000），羊抗鼠二抗（1:10 000）]室溫孵育1 h；TBST洗膜3次，每次10 min；ECL發(fā)光試劑顯影，在凝膠成像系統(tǒng)上拍照并分析。

1.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測相關(guān)指標(biāo)mRNA水平的表達(dá) 用TRIzol法提取總RNA,根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒的操作方法獲得單鏈cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測，SYBR Green染料法操作，以β-actin為靶基因的內(nèi)參，采用10 μl反應(yīng)體系（2×SYBR Premix ExTaqTM5 μl，含上游引物0.2 μl、下游引物0.2 μl、cDNA溶液0.5 μl、DEPC水4.1 μl），95℃預(yù)變性180 s，95℃ 10 s，56℃30 s，40個(gè)循環(huán)。

1.2.5 激光共聚焦顯微鏡觀察線粒體形態(tài)變化 在2 4 孔板內(nèi)放置蓋玻片，加入適量培養(yǎng)基進(jìn)行爬片培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁后進(jìn)行低氧乏養(yǎng)處理，24 h后吸除培養(yǎng)液，加入37℃預(yù)熱的Mito-Tracker?Red CMXRos染色工作液，與細(xì)胞共孵育15～45 min。染色結(jié)束后，去除染色工作液，在24孔板中用PBS清洗玻片一次；換用新鮮配制且預(yù)熱的4%多聚甲醛室溫固定20 min后PBST浸洗玻片3次；滴加DAPI避光孵育10～15 min，PBST浸洗4次;吸干爬片上的液體，封片液封片，然后在激光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)線粒體形態(tài)，并采集相應(yīng)圖像。

1.2.6 細(xì)胞增殖能力檢測 接種對照組（Ctrl-HMGB1）及干擾組（HMGB1-shRNA1、HMGB1-shRNA2）Patu8988細(xì)胞于96孔板內(nèi)，每孔1×103個(gè)，細(xì)胞貼壁后低氧乏養(yǎng)培養(yǎng)，每24 h加入10 μl CCK-8檢測試劑，避光孵育2 h，檢測450 nm處吸光度值。

1.2.7 細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力檢測（1）Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn) 將Transwell小室放入24孔板孔洞中，小室內(nèi)為上室，24孔板孔洞為下室，將對照組（Ctrl-HMGB1）和干擾組（HMGB1-shRNA1、HMGB1-shRNA2）Patu8988細(xì)胞用胰酶消化，離心后1 ml無血清培養(yǎng)基重懸，計(jì)數(shù)，吸取100 μl細(xì)胞懸液（約含5×104個(gè)細(xì)胞）滴加入小室上方，低氧乏養(yǎng)培養(yǎng)。小室外側(cè)加入500 μl含2%FBS的新鮮培養(yǎng)基，將其置于密封的低氧培養(yǎng)盒中，向低氧培養(yǎng)盒里充入混合氣，持續(xù)充入10 min，隨后將低氧培養(yǎng)盒放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中。當(dāng)下室底部出現(xiàn)穿過Transwell上小孔的癌細(xì)胞時(shí)，對下室側(cè)癌細(xì)胞進(jìn)行結(jié)晶紫染色。在顯微鏡下隨機(jī)選取視野進(jìn)行拍攝；此實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。（2）Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn) 將BD膠放置于冰上融化。每孔吸取100 μl無血清培養(yǎng)基，待BD膠完全融化后吸取4 μl至EP管中，與無血清培養(yǎng)基混合快速吹勻后加入到小室內(nèi)，放置于細(xì)胞恒溫培養(yǎng)箱。待BD膠完全凝固后，棄去無血清培養(yǎng)基，加入細(xì)胞懸液。實(shí)驗(yàn)步驟同Transwell遷移實(shí)驗(yàn)。

1.2.8 細(xì)胞遷移能力檢測 將對照組（CtrlshRNA）和干擾組（HMGB1-shRNA1、HMGB1-shRNA2）Patu8988細(xì)胞接種至24孔板，每孔接種細(xì)胞約2×105個(gè)，放置于細(xì)胞恒溫培養(yǎng)箱中過夜。第二天細(xì)胞貼壁且融合度達(dá)到90%～100%，用10 μl小槍頭在孔底劃兩條平行直線。用PBS清洗劃痕后的孔，清洗2～3次后，低氧乏養(yǎng)處理，選取合適位置進(jìn)行顯微鏡下拍照記為0 h，24 h后同一位置拍照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.9 生物信息學(xué)分析 利用GEPIA數(shù)據(jù)庫（http://gepia.cancer-pku.cn/）中的臨床患者相關(guān)數(shù)據(jù)，分析HMGB1在胰腺癌患者和非胰腺癌患者中的表達(dá)水平。將胰腺癌患者分為HMGB1高表達(dá)組和低表達(dá)組，分析兩組的生存期。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)三次，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩組間均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HMGB1表達(dá)水平與胰腺癌患者生存率的關(guān)系

經(jīng)GEPIA數(shù)據(jù)庫分析臨床胰腺癌標(biāo)本發(fā)現(xiàn)：與正常胰腺組織相比，胰腺癌組織HMGB1 mRNA表達(dá)水平明顯增高（P＜0.01），見圖1A。TCGA轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)提示：HMGB1高表達(dá)組胰腺癌患者總體生存率明顯低于低表達(dá)組（P=0.00097），見圖1B。

圖1 GEPIA數(shù)據(jù)庫及TCGA轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析HMGB1在胰腺癌中的表達(dá)及其臨床意義Figure 1 GEPIA database and TCGA transcriptome data analyses of HMGB1 expression in pancreatic cancer tissues and its clinical significance

2.2 內(nèi)源性HMGB1促進(jìn)低氧乏養(yǎng)Patu8988細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移

蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果表明在胰腺癌細(xì)胞AsPC1、BXPC3、Patu8988和Panc1中，Patu8988的HMGB1基礎(chǔ)表達(dá)量最高，見圖2A，因此選擇Patu8988細(xì)胞株進(jìn)行穩(wěn)定干擾HMGB1的細(xì)胞株構(gòu)建。熒光顯微鏡結(jié)果顯示Patu8988細(xì)胞綠色熒光蛋白（green fluorescent protein,GFP）表達(dá)呈陽性，提示質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成功，見圖2B。蛋白免疫印跡法及實(shí)時(shí)熒光PCR法分別檢測顯示：干擾組（HMGB1-shRNA1和HMGB1-shRNA2）HMGB1的蛋白及mRNA表達(dá)量明顯下降，表明Patu8988 HMGB1干擾細(xì)胞系構(gòu)建成功，見圖2C～E。

圖2 HMGB1敲減細(xì)胞株構(gòu)建及效率驗(yàn)證Figure 2 Construction and efficiency verification of HMGB1-knockdown cell line

與對照組（Ctrl-shRNA）相比，Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：細(xì)胞的侵襲遷移能力下降，見圖3A、3B；CCK-8法檢測Patu8988細(xì)胞的增殖能力，敲減低氧乏養(yǎng)Patu8988細(xì)胞的HMGB1后，細(xì)胞增殖能力明顯下降，見圖3C。因此，低氧乏養(yǎng)的腫瘤微環(huán)境中，內(nèi)源性HMGB1維持胰腺癌Patu8988細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移運(yùn)動(dòng)能力。

圖3 HMGB1敲減對Patu8988細(xì)胞增殖(A)、侵襲(B)及遷移運(yùn)動(dòng)(C)能力的影響Figure 3 Effect of HMGB1 knockdown on proliferation(A),invasion(B) and migration(C) of Patu8988 cells

2.3 內(nèi)源性HMGB1促進(jìn)低氧乏養(yǎng)Patu8988細(xì)胞脂質(zhì)代謝重編程

將Patu8988細(xì)胞在不同培養(yǎng)條件下培養(yǎng)24 h后，蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果顯示Patu8988細(xì)胞ACLY及p-ACLY蛋白表達(dá)水平明顯升高，見圖4A，ACLY作用的檸檬酸途徑來源的線粒體乙酰輔酶A增加，F(xiàn)A合成相關(guān)指標(biāo)脂肪酸合酶（FASN）升高，表明低氧乏養(yǎng)Patu8988細(xì)胞的FA合成增加。

蛋白質(zhì)免疫印跡法結(jié)果顯示：與對照組（Ctrl-HMGB1）相比，干擾HMGB1組的低氧乏養(yǎng)Patu8988細(xì)胞ACLY及p-ACLY蛋白表達(dá)水平明顯降低，見圖4B，表明內(nèi)源性HMGB1上調(diào)低氧乏養(yǎng)Patu8988細(xì)胞ACLY蛋白表達(dá)，提高其磷酸化水平，增強(qiáng)ACLY的活性，促進(jìn)腫瘤的FA合成，從而維持胰腺癌細(xì)胞的惡性增殖、侵襲及遷移運(yùn)動(dòng)能力。

圖4 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測HMGB1敲減對Patu8988細(xì)胞脂肪酸從頭合成相關(guān)蛋白表達(dá)量的影響Figure 4 Effect of HMGB1 knockdown on expression of de novo fatty acid synthesis related proteins in Patu8988 cells detected by Western blot

2.4 內(nèi)源性HMGB1促進(jìn)低氧乏養(yǎng)Patu8988細(xì)胞線粒體融合

激光共聚焦顯微鏡觀察到干擾HMGB1的低氧乏養(yǎng)Patu8988細(xì)胞與未干擾組相比，線粒體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)破壞，融合減少，分裂增多，見圖5A。蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果表明干擾組的Patu8988細(xì)胞線粒體外膜融合蛋白1（MFN1）和線粒體外膜融合蛋白2（MFN2）表達(dá)量下降，線粒體分裂蛋白FIS1表達(dá)量明顯升高，p-DRP1（Ser637）降低，見圖5B。上述結(jié)果表明內(nèi)源性HMGB1參與調(diào)節(jié)低氧乏養(yǎng)Patu8988細(xì)胞線粒體的動(dòng)態(tài)變化，促進(jìn)線粒體的融合，抑制線粒體的分裂。

圖5 激光共聚焦顯微鏡和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測HMGB1敲減對Patu8988細(xì)胞線粒體形態(tài)(A)及線粒體分裂和融合相關(guān)蛋白表達(dá)量(B)的影響Figure 5 Effect of HMGB1 knockdown on mitochondrial morphology(A) and expression of mitochondrial division and fusion related proteins(B) in Patu8988 cells detected by laser confocal microscope and Western blot

3 討論

HMGB1在多種腫瘤中過度表達(dá)[12-13]，對腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、浸潤和腫瘤新生血管形成等有著重要的影響。HMGB1在細(xì)胞核內(nèi)合成，通過自分泌和旁分泌方式分泌到胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中[14]。根據(jù)其定位和修飾的不同，HMGB1的功能也不同。胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的HMGB1可結(jié)合多種受體，比如Toll樣受體（TLR）和糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）等[15]，激活多種信號通路，參與細(xì)胞發(fā)育、分化、免疫、轉(zhuǎn)移、新陳代謝、自噬和死亡，乙?；土姿峄兄贖MGB1在胞質(zhì)中的積累，阻止其重新定位于細(xì)胞核中；細(xì)胞核內(nèi)HMGB1調(diào)節(jié)多種蛋白的轉(zhuǎn)錄活性，例如，HMGB1直接與P53（抑癌基因）相互作用，增強(qiáng)其DNA結(jié)合[16-17]。近年來對HMGB1的研究指出，內(nèi)源性HMGB1在細(xì)胞能量代謝中發(fā)揮重要作用[18]。本研究結(jié)果顯示敲減HMGB1基因后，低氧乏養(yǎng)Patu8988細(xì)胞ACLY和p-ACLY均顯著下調(diào)，F(xiàn)ASN蛋白表達(dá)水平降低，Patu8988細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移運(yùn)動(dòng)能力明顯下降，表明內(nèi)源性HMGB1通過調(diào)節(jié)ACLY的表達(dá)和活性，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞FA合成，維持其惡性生物學(xué)行為。這對研究內(nèi)源性HMGB1在胰腺癌脂質(zhì)代謝中的作用及其機(jī)制具有重要意義。

代謝重編程是腫瘤的重要特征，腫瘤細(xì)胞通過代謝重編程為其在嚴(yán)酷的微環(huán)境中（如缺氧、酸中毒、營養(yǎng)不良）提供了生存和增殖的選擇優(yōu)勢[19-20]。大量研究表明：脂質(zhì)代謝在腫瘤中發(fā)生高度的重編程[21-23]。除Warburg效應(yīng)外，在多種腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)合成增加，以維持腫瘤細(xì)胞在生長過程中的膜合成以及能量代謝等過程[24]。與正常組織相比，細(xì)胞惡性行為增加的重要特征之一就是FA從頭合成的增加[25]。FA代謝模式的調(diào)整會(huì)影響細(xì)胞生長、增殖、分化和運(yùn)動(dòng)性能[26]。FA合成是一種合成代謝過程，可將營養(yǎng)素衍生的碳轉(zhuǎn)化為脂肪酸。這些碳主要由檸檬酸鹽提供，通常由葡萄糖衍生的丙酮酸鹽進(jìn)入線粒體三羧酸（TCA）循環(huán)產(chǎn)生，在ACLY的作用下裂解為草酰乙酸和乙酰輔酶A，后者是FA合成的主要底物，是糖代謝和脂肪酸代謝的樞紐[27]。本研究結(jié)果證明了在低氧乏養(yǎng)的微環(huán)境下，胰腺癌Patu8988細(xì)胞ACLY表達(dá)及活性明顯升高，F(xiàn)ASN表達(dá)增高，F(xiàn)A合成增加。值得注意的是，癌細(xì)胞在產(chǎn)生用于FA合成的檸檬酸鹽過程中表現(xiàn)出代謝可塑性。在缺氧或線粒體功能異常的癌細(xì)胞中，TCA循環(huán)受到抑制，線粒體來源的檸檬酸鹽減少[28]，因此線粒體功能在FA合成中至關(guān)重要。正常情況下，線粒體融合與分裂處于平衡狀態(tài)，其數(shù)目與形態(tài)保持穩(wěn)定。線粒體融合與分裂平衡失調(diào)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙。融合增多，線粒體呈長管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，能量代謝更加豐富，可對細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用；分裂增多，線粒體變得短小、碎片化，呈點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致線粒體損傷[29]。有證據(jù)表明HMGB1可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞線粒體的生物合成，并且維持線粒體的形態(tài)，干擾HMGB1之后，線粒體發(fā)生功能障礙[30]。但也有文章表明HMGB1可以通過誘導(dǎo)線粒體分裂促進(jìn)成纖維樣滑膜細(xì)胞遷移[31]。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究HMGB1對低氧乏養(yǎng)胰腺癌細(xì)胞線粒體分裂與融合的影響，結(jié)果顯示，敲減HMGB1后，線粒體分裂增加，功能障礙，F(xiàn)A合成減少。但實(shí)驗(yàn)中并未對線粒體形態(tài)變化導(dǎo)致的線粒體內(nèi)其他代謝的改變進(jìn)行深入的研究，因此線粒體代謝的變化與脂質(zhì)代謝的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。

本研究證明HMGB1可以通過維持低氧乏養(yǎng)胰腺癌Patu8988細(xì)胞線粒體的功能，上調(diào)ACLY表達(dá)和活性，促進(jìn)胰腺癌的FA合成，維持腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本研究可能為針對胰腺癌微環(huán)境的靶向治療提供新的思路和依據(jù)。