通過(guò)式固相萃取-氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定黑木耳中六氯苯、五氯硝基苯和七氯殘留

何智勇 宋志峰 蔡玉紅 魏春雁

（吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，長(zhǎng)春 130033）

吉林省是我國(guó)黑木耳的主要產(chǎn)區(qū)，近年來(lái)黑木耳的質(zhì)量安全被逐漸關(guān)注和重視。通過(guò)對(duì)吉林省內(nèi)多地進(jìn)行走訪調(diào)研，發(fā)現(xiàn)吉林省黑木耳地?cái)[之后的生產(chǎn)過(guò)程中不使用除草劑、殺蟲劑、殺菌劑、營(yíng)養(yǎng)劑等農(nóng)業(yè)投入品，不會(huì)直接受到農(nóng)業(yè)投入品的污染。依托長(zhǎng)白山脈豐富的水資源，黑木耳生產(chǎn)中會(huì)使用大量的山泉水或地下水進(jìn)行澆灌。殘留在土壤中的七氯等污染物性質(zhì)穩(wěn)定，有環(huán)境持久性，可能隨雨水匯入山泉水或地下水中[1]，使用受到污染的水澆灌黑木耳會(huì)造成污染風(fēng)險(xiǎn)。六氯苯、五氯硝基苯、七氯具有累積性和半衰期長(zhǎng)的特點(diǎn)[3]，會(huì)在人體多器官與組織中積累并造成損傷，有致癌風(fēng)險(xiǎn)[5]。因此，開發(fā)一個(gè)黑木耳中污染物殘留的測(cè)定方法，對(duì)保證黑木耳質(zhì)量安全有重要的意義。本文探討應(yīng)用通過(guò)式固相萃取－氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定黑木耳中六氯苯、五氯硝基苯、七氯殘留的方法。

一、材料與方法

（一）儀器與試劑氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜儀Trace 1310－TSQ 8000 EVO（Thermo公司）；Millipore超純水機(jī)（Millipore公司）；水浴超聲清洗器KQ－500DE（昆山市超聲儀器有限公司）；渦旋混勻器（IKA公司）；離心機(jī)Multifuge X3R（Thermo公司）；固相萃取柱Oasis PRiME HLB 6 mL/200 mg（Waters公司）；乙腈、乙酸乙酯（色譜純，Merck公司）；0.22μm有機(jī)濾膜（天津東康）；Copure QuEChERS凈化管15 mL（深圳逗點(diǎn)生物技術(shù)有限公司）；六氯苯、五氯硝基苯、七氯標(biāo)準(zhǔn)品［濃度為1 000 mg/L，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（天津）］。

（二）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確吸取各標(biāo)準(zhǔn)品0.1 mL，用丙酮定容至10 mL，配制成濃度為10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4℃貯存?zhèn)溆?。基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制：準(zhǔn)確稱取1.00 g樣品（精確到0.01 g）按照下文“（三）樣品前處理”和“（四）實(shí)驗(yàn)條件”進(jìn)行前處理及儀器分析，當(dāng)六氯苯、五氯硝基苯、七氯的定量離子信噪比＜3時(shí)，樣品確定為空白基質(zhì)；空白基質(zhì)按照下文“（三）樣品前處理”進(jìn)行前處理獲得基質(zhì)空白提取液，用基質(zhì)空白提取液將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐步稀釋至相應(yīng)的工作濃度。

（三）樣品前處理干制的黑木耳經(jīng)粉碎機(jī)充分磨碎后，稱取樣品1.00 g（精確到0.01 g）于50 mL具塞塑料離心管中，加入10 mL超純水浸泡15 min，再加入10 mL乙腈、6 g氯化鈉，蓋好離心管蓋，充分渦旋1 min，常溫水浴超聲提取10 min，5 000 r/min離心5 min。吸取離心后的上清液5 mL加入PRiME HLB固相萃取柱凈化，收集凈化濾液，吸取1 mL凈化液，氮?dú)獯抵两?，? mL乙酸乙酯溶液復(fù)溶，過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜，用于測(cè)定。

（四）實(shí)驗(yàn)條件氣相色譜條件：進(jìn)樣口溫度220℃；進(jìn)樣量1μL；不分流進(jìn)樣；隔墊吹掃流量3 mL/min。載氣流速為1 mL/min，載氣為高純氦氣（99.999%）。色譜柱：TG－5SILMS（30 m×0.25 mm×0.25μm，Thermo Scientific）。程序升溫初始溫 度50℃，20℃/min升 至150℃，保 持2 min；10℃/min升至260℃，保持8 min；20℃/min升至280℃，保持1 min。質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源為EI源，電子能量70 eV，離子源溫度280℃；傳輸線溫度280℃；溶劑延遲5 min；碰撞氣為高純氬氣（99.999%），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）主要參數(shù)見表1。

表1 六氯苯、五氯硝基苯、七氯的采集參數(shù)

二、 結(jié)果與討論

（一）提取溶劑的選擇比較了超純水浸泡15 min與非浸泡對(duì)回收率的影響。在添加濃度為50 μg/kg的條件下，重復(fù)7次測(cè)定六氯苯、五氯硝基苯、七氯的回收率分別平均提高3.31%、2.56%、2.23%，因此選擇超純水浸泡木耳15 min后再進(jìn)行前處理。

比較了乙酸乙酯、乙腈對(duì)提取效果的影響。乙酸乙酯提取的回收率偏低，添加濃度為10μg/kg的條件下，六氯苯、五氯硝基苯、七氯的回收率分別為51%、47%、41%，無(wú)法滿足測(cè)定需求。采用乙腈提取時(shí)，這3種污染物均有較好的溶解性，添加濃度為10μg/kg的條件下，回收率為65%～117%，因此選擇乙腈為提取溶劑。

（二）凈化方式的選擇比較了兩種凈化方式。一是AOAC Official Method 2007.01[6]（QuEChERS前處理方法）的凈化方式，吸式取5 mL提取液加入Copure QuEChERS凈化管，渦旋1 min，5 000 r/min離心5min，收集上層凈化液。二是通過(guò)式固相萃取凈化法，吸取5 mL提取液加入Oasis PRiME HLB固相萃取柱中，收集濾液。分別取兩種凈化方式的凈化液1 mL氮吹至近干，用1 mL乙酸乙酯復(fù)溶，0.22μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，按照上文“（四）實(shí)驗(yàn)條件”參數(shù)進(jìn)行儀器分析。

2種凈化方式的總離子流圖如圖1和圖2所示，對(duì)比圖1和圖2可以得出，Oasis PRiME HLB凈化方式下基質(zhì)干擾較小，表明通過(guò)式固相萃取凈化的效果更好。

圖1 QuEChERS凈化方式的總離子流圖

圖2 Oasis PRiME HLB凈化方式的總離子流圖

2種凈化方式下的六氯苯、七氯和五氯硝基苯3種目標(biāo)物定量峰信噪比的大小如圖3、圖4、圖5所示，通過(guò)式固相萃取凈化后目標(biāo)化合物的信噪比更大、靈敏度更高。此外，通過(guò)式固相萃取凈化耗時(shí)短，提高了檢測(cè)通量，減少了基質(zhì)對(duì)色譜柱和離子源的污染，所以選擇通過(guò)式固相萃取作為凈化方式。

圖4 七氯的信噪比（50 ng/mL）

圖5 五氯硝基苯的信噪比（50 ng/mL）

（三）方法的線性范圍、檢出限和定量限采用基質(zhì)配標(biāo)—外標(biāo)法定量分析。為消除基質(zhì)效應(yīng)對(duì)目標(biāo)物檢測(cè)的影響，用空白的黑木耳樣品提取液配制濃度為5、10、25、50、100 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以濃度為橫坐標(biāo)（X），定量離子對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。信噪比S/N≥3計(jì)算方法檢出限，信噪比S/N≥10計(jì)算方法定量限，具體見表2。

表2 3種目標(biāo)物的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

六氯苯、五氯硝基苯、七氯在1～100 ng/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均＞0.995，檢出限（S/N≥3）分別為1.66、1.62、1.88μg/kg，定量限（S/N≥10）均為6.0μg/kg，能夠滿足殘留檢測(cè)的需求。

（四）方法的正確度與精密度對(duì)黑木耳進(jìn)行10、50和100μg/kg 3個(gè)濃度的加標(biāo)回收，每個(gè)濃度添加重復(fù)7次，計(jì)算回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表3。

表3 3種目標(biāo)物的回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n＝7）

3個(gè)添加濃度下六氯苯、五氯硝基苯、七氯的回收率為65%～117%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.28%～12.77%。結(jié)果表明，本方法的正確度與精密度能滿足殘留檢測(cè)的要求。

三、結(jié)論

本文建立了采用通過(guò)式固相萃?。瓪庀嗌V串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定黑木耳中六氯苯、五氯硝基苯和七氯殘留的方法。方法的確認(rèn)滿足了GB/T 27417－2017《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》[8]中對(duì)線性范圍、正確度、精密度、檢出限、定量限的要求。該方法在實(shí)際應(yīng)用中操作簡(jiǎn)便，具有提高檢測(cè)通量、降低檢測(cè)成本、對(duì)氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)污染小的優(yōu)點(diǎn)。